重氮法与钒酸盐氧化法测定新生儿血清胆红素的比较分析

李胜学 赵琴玲 严明 李含瑞 李爱平

胆红素是血红素代谢的产物，临床上多用于黄疸的诊断和性质鉴别，亦是重要的肝功能试验指标，准确测定具有重要的意义。目前，我国临床实验室测定血清总胆红素（total TB）的方法主要有3种：重氮法、胆红素氧化酶法和化学氧化法（如钒酸盐氧化法）[1]。酶法测定胆红素具有准确性高、稳定性好等优势，但由于试剂昂贵，仅为少数临床实验室所接受。重氮法和钒酸盐氧化法是多数临床实验室首选的检测方法。目前仍广泛使用的方法是重氮法，而钒酸盐氧化法因其稳定性、精密度、准确度均能满足实验室要求，且试剂简单，能在全自动生化分析仪上面使用，被越来越多的实验室所采用，在使用过程中，本实验室发现重氮法胆红素测定结果稍高于钒酸盐氧化法测定结果，但两者的系统误差均属临床可接受水平[2]，与大量的文献报道一致，但新生儿直接胆红素两种方法的测定结果差异较大。

1 资料与方法

1.1 试剂和仪器 重氮法和钒酸盐氧化法测定结果的相关回归方程为Y=1.092X+4.815，相关系数r为0.9958，T.bil试剂盒（批号：Z109218）、D.bil试剂盒（批号：Z109218）均为美国贝克曼公司提供的配套试剂；钒酸盐氧化法T.bil试剂盒、D.bil试剂盒均为北京利德曼公司提供，总胆红素试剂盒批号为111011J，直接胆红素试剂批号为111011J。采用贝克曼DXC800型全自动生化分析仪。

1.2 方法 用两种方法同时测定从患者临床标本中挑选出来的若干血清标本，成人组随机挑选不同浓度的胆红素标本进行测定，新生儿均使用两种方法测定，然后对数据进行比较分析，部分实验依据美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）EP9-A文件，对两种方法进行比较。

1.3 统计学处理 使用SPSS 19.0统计软件进行统计分析，计量资料以（±s）表示，采取配对t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 精密度实验 取两份标本，一份高值，一份为低值，分别用两种方法对总胆红素及直接胆红素进行20次重复测定，计算其CV。重氮法：TBIL（高值）：X=235.6 μmol/L，CV=1.53%；TBIL（低值）：X=17.2 μmol/L，CV=1.98%；DBIL（高值）：X=168.1 μmol/L，CV=1.78%；DBIL（低值）：X=9.4 μmol/L，CV=2.23%；钒酸盐氧化法：TBIL（高值）：X=232.7 μmol/L，CV=1.52%；TBIL（低值）：X=9.8 μmol/L，CV=1.79%；DBIL（高值）：X=102.8 μmol/L，CV=1.35%；DBIL（低值）：X=9.7 μmol/L，CV=1.77%。两法精密度良好。

2.2 回收实验 随机抽取新鲜血清标本0.9 ml，加入原装进口标准品1 ml，及时上机测定T.bil和D.bilL。标本浓度分别为：T.bil：22.5 μmol/L，D.bil：8.2 μmol/L。标准品浓度为：T.bil：236 μmol/L、52 μmol/L，D.bil：153 μmol/L、28 μmol/L。重氮法回收率分别为T.bil：101.2%、101.8%，平均101.5%；DBIL：102.1%、100.9%，平均101.5%；钒酸盐氧化法回收率分别为T.bil：98.9%、99.5%，平均99.3%；D.bil：98.4%、100.4%，平均99.4%。

2.3 线性比较 用T.bil化学品配制成不同浓度梯度：0、200、400、600、800、1000 μmol/L。分别用重氮法和钒酸盐氧化法进行测定，然后计算两种方法的回归方程。重氮法为：Y=1.053X-3.85，r=0.9998，TBIL在340 μmol/L内线性良好；钒酸盐氧化法：Y=1.2184X-35.82，r=0.9963，TBIL在650 μmol/L线性。重氮法线性范围较钒酸盐氧化法窄。

2.4 分组比较 选取笔者所在医院住院患者根据年龄分新生儿组、儿童组、成人组，选取各种浓度的血清进行同步测定，各组血清总胆红素重氮法和钒酸法测定结果差异不大，相关回归方程为Y=1.092X+4.815，相关系数r为0.9958。新生儿的直接胆红素测定差异较大，重氮法和钒酸法测定结果的相关回归方程为Y=0.1372X+1.8，相关系数r为0.5831，成年人及大于30 d的儿童的直接胆红素测定结果的相关回归方程为Y=1.1368X-3.818，相关系数r为0.9997。见表1。

2.5 相关性比较 取随机标本40份，分别用重氮法和钒酸盐氧化法对TBIL及DBIL进行测定，对两种方法进行相关性比较。TBIL：Y=1.27X-0.78，r=0.996 8；DBIL：Y=1.42X-1.83，r=0.9968，两法在TBIL及DBIL测定中相关系数均达到0.99以上，说明及两法相关性良好。

2.6 干扰试验 分别对重氮法和钒酸盐氧化法进行溶血标本及脂血标本进行抗干扰试验，试验证明重氮法在Hb<5.5 g/L、TG<6.2 mmol/L时基本无干扰，钒酸盐氧化法在Hb<3.5 g/L、TG<4.6 mmol/L时基本无干扰，当甘油三酯浓度为8.0 mmol/L以下时用钒酸氧化法测定TBIL和DBIL均无显著性干扰（P>0.05）。

3 讨论

两种方法均为检测总胆红素和直接胆红素的常用方法，钒酸氧化法检测直接胆红素的线性范围略窄于重氮法，但是它的精密度和准确度略优于重氮法，而且抗血红蛋白和甘油三酯干扰的能力明显强于重氮法[1]。新生儿标本常伴有溶血，故对两种方法做了相关干扰试验。

两种方法检测结果有良好的相关性，均符合r≥0.975[2]，比较差异有统计学意义（P<0.01），钒酸氧化法检测直接胆红素的线性范围略窄于重氮法，但是它的精密度和准确度略优于重氮法，而且抗血红蛋白和三酰甘油干扰的能力明显强于重氮法。

在临床工作中发现小于30 d的新生儿的直接胆红素测定，两法差异较大，造成差异较大的原因尚待研究，重氮法测定结果更可靠，临床认为新生儿直接胆红素>26 umol/L为病理性黄疸[3]，因为大量新生儿黄疸患者测定的直接胆红素如果依据重氮法测定结果进行光疗，都能治愈，如果依据钒酸盐氧化法测定的结果，临床会认为患者为病理性黄疸，即为肝细胞损伤引起的黄疸，治疗方法将与生理性黄疸有巨大区别，必定耽误患者的治疗，所以重氮法测定的新生儿直接胆红素更符合临床。因此建议新生儿的直接胆红素测定不可用钒酸盐氧化法。

[1] 陈宗平.钒酸氧化法测定血清总胆红素的方法学评价[J].国际检验医学杂志，2006，27（11）：997-998.

[2] 杨昌国.精密度评价和方法比较中NCCL评价方案的应用[J].临床检验杂志，1997，17（1）：47-48.

[3] 王慕逖.儿科学[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2000：73.