天幕毛虫核型多角体病毒对黄褐天幕毛虫幼虫的毒力测定

胡春祥，陆蓓

(东北林业大学，黑龙江哈尔滨 150040)

黄褐天幕毛虫Malacosoma neustria testacea Motschulsky属鳞翅目Lepidoptera枯叶蛾科Lasiocampidae，又名天幕枯叶蛾［1］，是世界性的大害虫，也是我国森林、园林、果树上的一大害虫［2］。核型多角体病毒(Nucleus Polyhedrosis Virus，简称NPV)，是研究最早和最为详细的一类昆虫病毒。全世界已发现感染这种病毒的昆虫超过380种，我国也发现60多种。近年来，我国已从47种不同昆虫体内分离出了NPV，其中大部分具有经济意义，有的严重危害养蚕业，有的可以用来控制农林害虫［3－4］。

在昆虫病毒中，NPV是研究最多、应用最广的。不同种的NPV对昆虫的感染力是不同的，同一种病毒，其杀虫活性因不同的品系或分离株而有所不同。昆虫感染NPV剂量愈大，死亡愈快，用棉铃虫Heliothis armigera NPV感染2龄幼虫，感染剂量为160 PIB/头和80 PIB/头，致死中时(LT50)分别是5．6 d和7．1 d［5］。用油桐尺蠖核型多角体病毒防治油桐尺蠖 Buzura suppressaria Guenee、卷蛾属昆虫达90%以上的感染率，并能使该虫在4 d之后降低取食量，18 d以后防治效果可达53.4% ～93%［6］。为了明确NPV对天幕毛虫的毒力，作者用不同浓度的NPV以胃毒方式对黄褐天幕毛虫幼虫进行了毒力测定。

1 试验

1.1 材料 供试昆虫黄褐天幕毛虫幼虫于2012年5月采自东北林业大学哈尔滨林场，在温度20～24℃，湿度60% ～80%条件下，室内饲养。天幕毛虫NPV是将带毒死虫研碎、离心获得，带病毒天幕毛虫死虫由东北林业大学生物防治教研室提供。

1.2 方法

1.2.1 病毒提纯 将保存于0～4℃冰箱中的带病毒死虫取出，加入无菌水，充分搅拌，经纱布过滤后，离心 4 次(800 r/min，10 min，常温)，去杂质，取上清液;再将上清液离心(7 000 r/min，8 min，常温)4次，去除上清液取沉淀，得到天幕毛虫 NPV［7－8］。

1.2.2 病毒悬液的制备 将得到的天幕毛虫NPV，在显微镜下用血球计数器进行颗粒计数，根据稀释倍数，算出每克制剂中的总数［9］。用记数后的病毒悬液为原液，以10倍递增加水稀释成不同浓度的悬浮液。

1.2.3 病毒浓度与幼虫死亡关系测定 用1.824×107，1.824 × 106，1.824 × 105，1.824 × 104，1.824×103，1.824×102PIB/mL 6种浓度的天幕毛虫NPV悬液涂抹新鲜的杨树叶片接种，并以清水涂抹作为对照，在20～24℃室内饲养幼虫。每24 h检查幼虫的死亡情况;利用Excel软件统计死亡率和校正死亡率;计算出剂量对数值;查出死亡机率值;求出浓度与死亡率的回归直线方程及致死中浓度的置信区间。

1.2.4 感染病毒时间与幼虫死亡关系测定 用1.824×107，1.824 ×106，1.824 ×105PIB/mL 3 种浓度的天幕毛虫NPV悬液浸杨树叶片接种，感染黄褐天幕毛虫幼虫，设清水对照，在20～24℃条件下饲养，每天更换新叶。定期检查、统计幼虫死亡数;计算出时间对数值;求出时间与死亡率的回归直线方程及LT50。

2 结果与分析

2.1 天幕毛虫NPV浓度与幼虫死亡的关系 天幕毛虫NPV的浓度越大，幼虫死亡率越高。当病毒浓度为 1.824×107PIB/mL时，校正死亡率高达94.57%(表1);随着病毒浓度的增大，幼虫死亡机率值也相应增大，二者为直线回归(图1);回归方程为y=0.444 3x+3.223 5，天幕毛虫NPV致死中浓度LC50为1.096×104PIB/mL，95%置信空间上限为2.71×104，下限为3.731×103。

表1 天幕毛虫NPV浓度与幼虫死亡的关系

图1 幼虫死亡机率值与浓度的回归直线

2.1 感染时间与幼虫死亡率的关系 用1.824×107，1.824×106，1.824 ×105PIB/ml 3 种浓度的天幕毛虫NPV悬液感染黄褐天幕毛虫幼虫。感染时间越长，幼虫死亡机率值越大(表2)。1.824×107，1.824×106，1.824×105PIB/mL浓度的时间与死亡机率值为直线回归，回归方程分别为y=0.013 1x+2.854 2，y=0.010 5x+2.932 9 和 y=0.015x+1.790 3，LT50分别为6.8，8.2 ，9.1 d(图2 ～4)。方程式中x为时间，y为死亡机率值。

表2 不同浓度天幕毛虫NPV感染天幕毛虫幼虫的时间与死亡机率值

图2 1．824×107PIB/mL浓度时间与死亡机率值回归直线

图3 1．824×106PIB/mL浓度时间与死亡机率值回归直线

图4 1．824×105PIB/mL浓度时间与死亡机率值回归直线

3 讨论

施用昆虫病毒杀虫剂是控制林木害虫的安全、有效生物措施，在一定生态体系中完全可以把害虫数量控制在经济上能够接受的水平，达到防治目的，而且昆虫病毒作为害虫防治手段没有化学农药所带来的消极后果。首先，昆虫病毒本来就是自然界长期存在的，特别如杆状病毒(NPV、GV)只感染昆虫纲，对人畜鱼虾等安全无害，不会造成环境污染问题。其次，病毒的宿主特异性高，人工撒布后可引起种群内大流行，不会因杀灭害虫而造成主要害虫再猖獗和次要害虫大发生。第三，病毒制剂生产比较容易，使用方便，成本低廉。最后，昆虫病毒使用的后效作用比较明显，因为病虫本身就是繁殖病毒的“小工厂”，尸体成为新的传染源，遇到合适条件，即可造成再次大流行［10－12］。

实验结果表明，天幕毛虫NPV对黄褐天幕毛虫幼虫具有较强的致病力。幼虫感染死亡率与病毒浓度成正比关系，1.824×107PIB/mL病毒浓度接种天幕毛虫幼虫后死亡率高达94.57%，对天幕毛虫幼虫的致死中浓度LC50为1.096×104PIB/mL。天幕毛虫NPV的潜伏期比较短，一般10 d左右。NPV病毒的浓度越高，天幕毛虫幼虫开始死亡的时间就越短，LT50也越小。浓度为1.824×107PIB/mL时，LT50=6.8 d;1.824×106PIB/mL时，LT50=8.2 d;浓度为1.824×105PIB/mL时，LT50=9.1 d。

为了更好地用天幕毛虫核型多角体病毒防治天幕毛虫，建议进一步开展病毒繁殖工艺、杀虫剂配制技术和林间应用技术的研究。

志谢:东北林业大学森林保护学科生物防治教研室提供带病毒虫体，特此致谢。

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