Rh血型系统新生儿溶血病的实验诊断及特殊反应分析

骆 宏，莫春妍，张润青，赵 阳，姬艳丽，魏 玲，罗广平

(广州血液中心临床输血研究所，广东 广州 510095)

Rh血型系统新生儿溶血病的实验诊断及特殊反应分析

骆 宏，莫春妍，张润青，赵 阳，姬艳丽，魏 玲，罗广平

(广州血液中心临床输血研究所，广东 广州 510095)

目的探讨Rh血型系统新生儿溶血病的实验诊断和特殊试验结果分析。方法收集Rh系统新生儿溶血病标本12例，母血标本12例，测定其ABO和Rh血型。新生儿标本行溶血病3项实验，新生儿血清、放散液、母血清行不规则抗体筛选和鉴定实验，并测定相应抗体的效价。结果有1例患儿标本RhD血型放散前定型为阴性，放散后为阳性；患儿标本溶血病3项实验均阳性；引起溶血病的抗体中，IgG抗-D 9例，IgG抗-E检出2例，IgG抗-c合并抗-D1例；母血清中的IgG抗-D效价介于128～2048，IgG抗-E效价介于64～256；患儿血清中游离的IgG抗-D效价介于2～512，IgG抗-E效价介于4～32。结论直接抗人球蛋白实验和放散实验对于诊断Rh系统溶血病具有重要意义；特殊反应要综合分析处理，获取真实结果；临床输血或换血治疗时，要根据患儿体内的抗体情况进行血液选择。

新生儿溶血病；Rh血型；直接抗人球蛋白试验；放散实验；输血

新生儿溶血病 (Hemolytic disease of the newborn，HDN)是临床引起新生儿病理性黄疸主要原因之一，常因母婴(胎)血型不合所导致。多见于ABO血型系统和Rh血型系统。其中，Rh血型系统新生儿溶血病伴随的临床症状较重，治疗不及时常可导致新生儿核黄疸的发生甚至死亡，应当引起临床重视。新近我们对12例Rh血型系统新生儿溶血病进行了研究，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 病例资料 收集2010年9月至2011年5月在本所检测的Rh新生儿溶血病标本12例，其中男性患儿8例，女性患儿4例，患儿年龄最小2d，最大为22d。同时收集患儿母亲血液标本12例。

1.2 方法

1.2.1 新生儿溶血病三项实验 按《中国输血技术操作规程》(血站部分)[1]进行直接抗人球蛋白实验、游离抗体检测、抗体放散实验。

1.2.2 血型鉴定 患儿ABO血型采用正定型实验，母亲ABO血型定型采用正定型和反定型，RhD抗原检测按照常规血清学方法进行，但对于直抗试验强阳性的特殊标本，则根据美国血库协会技术操作手册中的叙述和方法进行轻度热放散试验后，再进行RhD抗原检测实验[2]。

1.2.3 Rh血型抗原分型 配制1%的红细胞悬液，采用Rh血型抗原分型卡对Rh血型系统的C、c、E、e进行检测，所有操作严格按照试剂说明书进行。

1.2.4 抗体筛选和抗体鉴定 对患儿血清、放散液和产妇血清采用抗体筛选细胞进行不规则抗体筛选实验，实验阳性者进一步行抗体鉴定。

1.2.5 抗体效价检测 采用倍比稀释法，以试管中出现凝集强度达到2+的最后一管稀释倍数的倒数作为本次测定的抗体效价。

2 结果

2.1 母亲和患儿血型涵盖了ABO系统的4种血型抗原和Rh系统的5种抗原。其中，O型母亲6例，占所检测标本中的50%；ccdee型母亲6例，占50%；O型新生儿7例，占58%。11号患儿标本RhD血型在放散前直接定型为阴性，经过热放散处理后，定型为阳性。所有检测标本中，新生儿溶血病三项实验均为阳性，其中直接抗人球蛋白实验呈阳性(3+～4+)，游离抗体检测和抗体放散实验均提示含有ABO血型系统外的不规则抗体。具体见表1。

2.2 在母亲血清、新生儿血清和放散液均检出了相应的不规则抗体。其中，IgG抗-D检出9例，占75%；IgG抗-E检出2例，占16.6%；检出IgG抗-c合并抗-D1例。母血清中的IgG抗-D效价介于128～2048，IgG抗-E效价介于64～256；患儿血清中游离的IgG抗-D效价介于2～512，IgG抗-E效价介于4～32。具体资料见表1。

表1 产妇、新生儿血型血清学实验结果

3 讨论

在新生儿溶血病中，Rh系统引起的溶血病约占14.6%[3]。当由父亲遗传给胎儿的Rh抗原恰为母亲所缺少时,胎儿红细胞通过胎盘进入母体可刺激母体产生免疫性Rh抗体,此抗体再通过胎盘进入胎儿体内使胎儿红细胞溶血。在实验诊断方面，直接抗人球蛋白实验和放散实验为HDN的确诊实验。Rh系统溶血病直抗实验阳性率和强度远高于ABO溶血病，直抗实验出现阳性(3+～4+)，放散实验阳性，孕妇和患儿ABO同型时，应当高度警惕不规则抗体引发的溶血病，尤其是IgG抗-D引起的溶血病。本研究中，所有标本直抗实验均为阳性，放散实验阳性，进一步证实了这两个实验的重要性。

除了单一抗体引发外，Rh系统的HDN还有合并抗体引起的溶血病，主要是Rh血型系统内的合并性抗体或Rh系统合并ABO系统的溶血病。本研究中，有1例多次妊娠的孕妇(G5P1A3),体内检出IgG抗-c合并IgG抗-D，两者效价分别为64和2048，远远高于临界值，最终导致了死胎和流产。在孕妇和患儿ABO和Rh系统均不同型时，要注意Rh系统合并ABO系统的溶血病鉴别诊断实验的要点，防止漏诊和误诊的发生[4]。

在抗体效价检测方面，母体血浆中的IgG抗-D效价大于32、IgG抗-E大于8时，就有发生HDN的风险。本研究中，在产后母体血浆中检测的IgG抗-D效价最低为128，最高为2048；IgG抗-E最低为64，最高为256，均远高于危险临界值。检测结果也证实了溶血病的发生。

在新生儿溶血病检测中，尤其要注意新生儿Rh血型的定型。本研究中的11号标本，母亲产前检查为RhD阴性，体内检出IgG抗-D，效价达512，产后效价为256。患儿直抗实验强阳性，血清和释放液均检出IgG抗-D，然而试管法定RhD时却呈阴性，与前述实验结果矛盾。考虑到是因为患儿红细胞上的D抗原表位已全部被IgG抗-D占位致敏，IgM型单克隆抗体无法再与红细胞结合，导致定型为阴性。将其红细胞进行热放散后，再次定型，则出现了2+的凝集反应，证实患儿的真实血型应该是RhD阳性。

临床治疗HDN方面，除了光照疗法，还可能涉及输血或换血，这就牵涉到血液的选择问题。就单一的Rh抗体所致的HDN而言，若新生儿体内还存在致溶血病的游离抗体时，切不可选择与新生儿Rh同型的血液，应当选择Rh与母血同型、ABO与新生儿同型的洗涤红细胞输注，血浆宜选AB型血浆；若为Rh系统抗体合并ABO系统抗体时，则应该选择Rh与母血同型的O型洗涤红细胞和AB型血浆。

为减少母婴Rh血型不合引起的新生儿Rh溶血病的发生,对于既往有不明原因的死胎、流产、新生儿重度黄疸史的孕妇及其丈夫均应进行ABO、Rh血型检查，不合者进行孕妇血清中的抗体检测，以期及早发现新生儿溶血病并为尽早采取相应治疗措施提供实验依据。孕妇体内有高效价抗体者应定期监测抗体效价并进行相应治疗，如采用中草药抑制抗体产生或通过血浆置换使母体抗体效价降低至适宜范围,从而尽可能地预防和降低HDN的发生[5,6]。

[1]卫生部.中国输血技术操作规程(血站部分)[M].天津：天津科学技术出版社，1998：79-86.

[2]American Association of Blood Bank.AABB Technical Manual[M].15th edition.USA：AABB,2005:740-743.

[3]薛辛东，杜立中.儿科学[M].北京：人民卫生出版社，2005：139.

[4]骆 宏，汪传喜，罗广平，等.IgG抗-D合并IgG抗-B所致新生儿溶血病的试验诊断[J].中国输血杂志,2009,22(10):799-801.

[5]闰东河，赵月凯.34例孕产妇Rh抗体免疫血液学检查分析[J].中国优生与遗传志,2007,15(9):72.

[6]林甲进.Rh(D)阴性孕妇产前免疫抗体水平与新生儿溶血病的关系[J].中国优生与遗传杂志,2007,15(12):78.

Experimental diagnosis and special test result analysis for hemolytic disease of newborn of Rhesus blood group

LUO Hong,MO Chunyan,ZHANG Runqing,et al.Institute for Clinical Transfusion Medicine,Guangzhou Blood Center,Guangzhou 510095,China

ObjectiveTo discuss the experimental diagnosis for hemolytic disease of the newborn of Rhesus system and the analysis of special test results.MethodsThe 12 newborn patients'and theirmother's ABO and Rhesus blood group were typed with serologic method after the specimens had been collected.The direct antiglobulin test,free antibody determination test and elution test were done for newborns'specimens.Irregular antibody screen test and identification test were performed with patients'sera,elutions and mothers'sera,and then antibody titrations were determined.ResultsOne patient's Rhesus D serotype was different in pre-and post-elution.Tests for hemolytic disease were positive in all specimen,9 patients were provoked due to anti-D,2 patients due to anti-E,while 1 patient was provoked due to anti-c in combination with anti-D.The anti-D titration were various from 128 to 2048 in mothers'sera while from 2 to 512 in newborns'sera.The anti-E titrations were diverse from 64 to 256 in mothers'sera but from 4 to 32 in newborns'sera.Conclusions The direct antiglobulin test and elution test were important for diagnosing hemolytic disease of the newborn of Rhesus system.Special test results should be analyzed and dealt comprehensively.Irregular antibodies titration should be considered in the blood selection for transfusion or exchange transfusion.

Hemolytic disease of the newborn；Rhesus blood group；Direct antiglobulin test； Elution test；Transfusion

R457.1+1，R556.6+3

A

1674-1129(2012)04-0334-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.04.004

广州市医药卫生科技项目（编号：201102A212001）

骆宏，男，1974年8月出生，毕业于中山大学中山医学院，医学硕士，主治医师，研究方向：血型的分子遗传机制。通讯作者：罗广平