血浆瘦素在原发性痛风性关节炎及高尿酸血症患者的表达及临床意义

江丹，周京国△，青玉凤，谢文光，杨其彬，李敏，赵明才，2

(1.川北医学院附属医院风湿免疫研究所;2.川北医学院附属医院检验科，四川 南充 637000)

血浆瘦素在原发性痛风性关节炎及高尿酸血症患者的表达及临床意义

江丹1，周京国1△，青玉凤1，谢文光1，杨其彬1，李敏1，赵明才1，2

(1.川北医学院附属医院风湿免疫研究所;2.川北医学院附属医院检验科，四川 南充 637000)

目的:检测血浆瘦素(leptin，LEP)在原发性痛风性关节炎患者(gouty arthritis，GA)、高尿酸血症者(hyperuricemia，HA)及健康体检者(normal control，NC)的表达水平，从而探讨LEP在GA和HA发病机制中可能的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测GA组(84例)、HA组(38例)和NC组(43例)血浆LEP含量，比较其差异性，分析血浆LEP与GA及HA组临床及实验室指标的相关性。结果:LEP在三组表达差异有统计学意义(F=17.78，P＜0.05)，进一步两两分析(LSD法)发现LEP在GA组的表达显著高于HA组［(436.55±246.65)pg/mL vs(306.25±173.16)pg/mL，P＜0.05］和NC组［(436.55±246.65)pg/mL vs(199.68±185.54)pg/mL，P＜0.05］，HA组显著高于NC组［(306.25±173.16)pg/mL vs(199.68±185.54)pg/mL，P＜0.05］。相关分析发现痛风患者LEP水平与体重指数(BMI)、极低密度脂蛋白(VLDL)、肌酐(Cr)均呈显著正相关(r=0.31，r=0.28，r=0.25;P均＜0.05)，而与血尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、血糖(GLU)、中性粒细胞绝对值(GR)、淋巴细胞绝对值(LY)、血沉(SR)、C反应蛋白(CRP)均无明显相关性(P均＞0.05)。高尿酸血症者LEP水平与GLU呈显著正相关(r=0.42，P＜0.05)，与UA、TG、HDL、LDL、VLDL均无明显相关性(P均＞0.05)。结论:LEP的高表达可能参与了原发性痛风性关节炎及高尿酸血症的发生发展。LEP可能主要在痛风的脂代谢障碍及肾功能损害中发挥作用，可能参与高尿酸血症的糖代谢过程。

关节炎;痛风;高尿酸血症;瘦素

痛风(gout)是由于嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少而导致尿酸盐沉积并伴随组织损伤的一组疾病。临床可表现为急性复发性关节炎、痛风石形成、痛风石性慢性关节炎、尿酸盐肾病、尿酸性尿路结石，严重者可出现关节致残、肾功能不全。近年来，随着社会富裕程度的提高，人们饮食结构的改变，痛风发病率和患病率呈逐渐增加的趋势。高尿酸血症(hyperuricemia，HA)是痛风最重要的生化基础，约5%～12%的HA最终可发展为痛风［1］，血尿酸的升高不仅与痛风发病密切相关，而且可能增加患心血管疾病的危险［2］。研究证实，痛风患者常伴发肥胖、高血压、糖尿病及高脂血症［3］。瘦素(leptin，LEP)是一种主要由脂肪细胞分泌的激素样细胞因子，其结构与IL-6、IL-12等Ⅰ型细胞因子家族成员相似，在摄食调节、能量代谢、炎症及免疫调节过程中发挥重要作用［4］。本文通过检测原发性痛风性关节炎患者(gouty arthritis，GA)、高尿酸血症者及健康体检者(normal control，NC)血浆LEP的表达，结合临床及实验室指标从而探讨LEP在GA和HA发病中可能的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集川北医学院附属医院风湿血液科2009年1月至2011年3月门诊或住院符合1977年美国风湿病学会(ACR)诊断标准［5］的GA患者84例，排除由其他原因所致的继发性痛风患者，所有患者均为急性发作期男性，年龄23～74岁，平均年龄(46±11)岁。HA和NC均来自我院2010年1月至2011年3月的体检人群。HA组为38名UA＞420 μmol/L的男性体检者，年龄27～79岁，平均(45±12)岁，均排除血液系统及肝肾功能损害。NC组为43名男性健康体检者，年龄21～69岁，平均(42±11)岁，均无实验室指标异常。HA及NC组均无痛风既往史及家族史。所有研究对象均排除其他自身免疫性疾病、感染性疾病及肿瘤性疾病。该实验得到当地伦理委员会支持，且所有参与者均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 血浆LEP水平检测所有研究对象禁食8 h以上，次日晨抽取约5 mL空腹静脉血，3000 r/min离心10 min分离血浆，－20℃保存标本。人LEP酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自美国R＆D公司。操作步骤按说明书:在已包被LEP抗体的酶标板上，每孔加入100 μL血浆或标准品，36℃孵育90 min，洗涤液洗涤5次，加100 μL生物素化抗体工作液，36℃孵育60 min，洗涤液洗涤5次，加100 μL酶结合物工作液，36℃孵育30 min，再用洗涤液洗涤5次，加底物，36℃避光孵育15 min，加终止液。然后在酶标仪上，以450 nm为测量波长，620 nm为参考波长测定其吸光度(A)值。根据标准品吸光度及浓度做标准曲线，求出待测血浆的LEP水平。

1.2.2 临床及实验室常规指标的测定实验室常规指标测定均在我院检验科完成，血细胞分析采用美国Beckman公司生产的LH750血细胞分析仪，血生化仪分析采用美国Beckman公司生产的DxC800全自动生化仪，酶比色法检测血尿酸浓度。由专人测量研究对象常规站立位身高(m)及体重(kg)，并计算体重指数［BMI=体重(kg)/身高(m)2］，血压采用标准水银柱式血压计测量，由专人按照《中国高血压防治指南》中血压测量要求测量。

1.3 统计学分析

以SPSS13.0统计软件进行统计分析，计量资料以x－±s表示，三组间比较，方差齐同，组间差异采用方差分析，进一步两两比较采用LSD法;方差不齐，组间差异采用秩和检验。血浆LEP水平与各项实验室指标的相关性分析采用Spearman相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组LEP的表达水平及差异

血浆LEP在GA组为(436.55±246.65)pg/mL，HA组为(306.25±173.16)pg/mL，NC组为(199.68±185.54)pg/mL，三组表达差异有统计学意义(F=17.78，P＜0.05)。GA组血浆LEP水平显著高于HA组和NC组(P均＜0.05)，HA组血浆LEP水平显著高于NC组(P＜0.05)。

2.2 三组临床及实验室指标比较

三组在年龄、性别和BMI构成比上差异均无统计学意义(P均＞0.05)。三组UA、舒张压(DBP)、GLU、白细胞(WBC)、GR、TG、LDL、VLDL、载脂蛋白A1(apoA1)表达水平差异有统计学意义(P均＜0.05)，UA、DBP、GLU、WBC、GR、TG、VLDL分别在GA组、HA组和NC组表达呈逐步降低趋势，而LDL和apoA1表达呈逐步升高趋势，见表1。

表1 三组临床及实验室指标比较s)

表1 三组临床及实验室指标比较s)

*:方差分析的F值，#:秩和检验的Z值;a:GA组与HA组相比差异有统计学意义，b:GA组与NC组相比差异有统计学意义，c:HA组与NC组相比差异有统计学意义。

843843年龄(岁)46±1145±1241±112.76*＞0.05 BMI(kg/m2)26±327±724±62.90*＞0.05收缩压(mmHg)131±16134±17127±104.57#＞0.05例数(n)舒张压b(mmHg)87±1183±1280±94.40*＜0.05 WBCab(×109/L)8.29±2.636.97±1.286.87±1.3611.97#＜0.05 GRab(×109/L)5.42±2.483.96±0.913.86±0.8220.10#＜0.05 LY(×109/L)2.20±0.902.25±0.532.29±0.582.70#＞0.05 MO(×109/L)0.58±0.200.57±0.150.52±0.163.20#＞0.05 TGbc(mmol/L)2.51±1.722.44±1.461.16±0.2642.73#＜0.01 TC(mmol/L)4.79±0.934.53±0.804.44±0.413.31#＞0.05 HDL(mmol/L)1.22±0.401.20±0.551.28±0.280.38*＞0.05 LDLbc(mmol/L)2.35±0.932.36±0.742.36±0.7411.67#＜0.01 VLDLbc(mmol/L)1.10±0.751.07±0.540.52±0.1335.45#＜0.01 apoA1b(mmol/L)1.13±0.331.23±0.321.24±0.1712.63#＜0.01 apoB100(mmol/L)0.88±0.240.82±0.180.81±0.154.78#＞0.05 GLUb(mmol/L)5.88±1.515.40±1.105.15±0.4412.19#＜0.01 UAbc(mmol/L)494.39±149.96478.04±44.01336.49±48.4767.12#＜0.05 Ur(μmol/L)5.12±1.735.19±1.064.58±1.071.62*＞0.05＞0.05 Cr(μmol/L)99.78±98.3788.36±16.6879.68±8.451.17*

2.3 LEP与临床及实验室指标的相关性分析

GA患者血浆LEP与BMI、VLDL和Cr均呈显著正相关(P＜0.05)，HA患者血浆LEP水平与GLU均呈显著正相关(P＜0.05)，见表2。

表2 血浆LEP与GA组和NC组各项临床及实验室指标相关性分析

3 讨论

LEP是一种由肥胖基因编码的蛋白质，主要由脂肪细胞分泌，可通过与下丘脑的瘦素受体结合，抑制神经肽Y基因的表达以减少机体摄食和能量消耗，与2型糖尿病、骨质疏松症等代谢性疾病的发生发展密切相关［6－7］。随着研究的不断深入，LEP在炎症和免疫调节过程中的作用也逐渐被人们所认识，LEP可与单核巨噬细胞、NK细胞、T淋巴细胞等表面的长型受体结合激发炎症免疫应答，参与自身免疫性疾病的发生发展［8］。痛风除是代谢性疾病外，同为临床上常见的自身炎性疾病［9］，本课题研究发现LEP在原发性痛风性关节炎患者血浆的表达显著增高，与Inokuchi等［3］报道相符，提示LEP可能在痛风的发生发展中发挥作用。

近年来流行病学调查显示，痛风发病率和患病率呈逐渐增加的趋势，发病人群以中年男性和绝经期后女性更为多见，高尿酸血症是痛风最重要的生化基础，在血尿酸水平持续增高的人群中，大多数为无症状高尿酸血症，说明痛风发病原因较为复杂，除机体代谢异常外，尚有其它因素参与调节人体血尿酸溶解度、尿酸盐结晶的识别、炎症激活及免疫调节等过程，本研究发现血浆LEP在痛风患者较高尿酸血症者是显著增高的，进一步相关性分析发现痛风患者血浆LEP的水平与SR、WBC、GR、LY等炎性指标无相关性，而与VLDL等代谢指标呈显著正相关，提示LEP可能未参与原发性痛风的炎症反应，而与痛风患者的脂代谢障碍相关，痛风性关节炎急性发作时，机体的高代谢状态可引起脂肪酸水平上升从而诱导LEP释放入血，痛风性关节炎患者血浆LEP较高尿酸血症者高表达。有研究指出，LEP可能通过促进肾小球内皮细胞增生和刺激系膜细胞产生胶原等加重肾脏损害，减少尿酸的排泄，引起血尿酸浓度增高［10］，而经尸检证实90%～100%的痛风患者存在肾脏损害［11］，本研究发现，GA组血浆LEP水平与Cr呈显著正相关，提示LEP可能参与了原发性痛风患者的肾功能损害。肾脏是尿酸排泄的主要器官，痛风患者体内的尿酸盐结晶沉积于肾脏可表现为慢性尿酸盐肾病、尿酸性尿路结石等，严重者可出现肾小球滤过功能下降，肾功能不全，而瘦素主要由肾脏清除，肾功能受损会进一步升高血瘦素水平。本研究还发现GA组LEP水平显著高于HA组，进一步明确高水平LEP参与痛风的发生发展或痛风性关节炎导致LEP高表达，对认识痛风发病机制可能具有重要意义。

脂肪组织分泌的多种脂肪因子包括脂联素、LEP等在代谢综合征的发病机制中起重要作用［12］。高尿酸血症与肥胖、高血压、糖尿病、脂代谢紊乱等代谢综合征的组成成分密切相关［13］。本研究也提示，三组GLU、TG、LDL、VLDL、apoA1表达差异有统计学意义(P均＜0.05)，GLU、TG、VLDL分别在GA组、HA组和NC组表达水平呈逐步降低趋势，而LDL和apoA1的表达呈逐步升高趋势。本研究发现高尿酸血症组血浆LEP水平明显高于正常对照组，与Lin等［12］的报道一致，提示LEP可能参与了高尿酸血症的发生发展过程。进一步相关分析发现，高尿酸血症者LEP水平与GLU呈显著正相关，而GLU水平在GA组、HA组和NC组表达水平呈逐步降低趋势，有研究指出血浆瘦素与机体的胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生发展密切相关［14］，LEP可能参与高尿酸血症者的糖代谢障碍。

总之，本研究表明LEP的高表达可能参与了原发性痛风性关节炎及高尿酸血症的发生发展。LEP可能主要在原发性痛风的脂代谢障碍及肾功能损害中发挥作用，可能参与高尿酸血症的糖代谢过程。进一步对参与本实验的原发性痛风患者以及高尿酸血症者进行随访，设立自身对照，检测痛风患者在不同时期(急性发作期、间歇期及慢性期)的血浆LEP水平，同时比较发展为痛风的高尿酸血症者不同时期血浆LEP表达水平的差异，深入研究LEP与原发性痛风和高尿酸血症的关系，可能为痛风以及高尿酸血症发病机制提供新的理论依据，为诊断、预防和治疗痛风及高尿酸血症提供新思路。

［1］Andrew J，Lu K，Peter A.Epidemiology of Hyperuricemia and Gout［J］.The American Journal of Managed Care，2005，11(15):435－442

［2］Kim SY，Guevara JP，Kim KM，et al.Hyperuricemia and coronary heart disease:a systematic review and meta-analysis［J］.Arthritis Care Res(Hoboken)，2010，62(2):170－180

［3］Inokchi T，Tsutsumi Z，Takahashi S，et al.Increased frequency of metabolic syndrome and its individual metabolic adnormalities in Japanese patients with primary gout［J］.J Clin Rheumatol，2010，16(3):109－112

［4］Zhang F，Basinsiki M，Beals J，et al.Crystal structure of the obese protein leptin-E100［J］.Nature，1997，387(6629):206－209

［5］Wallace SL，Robinson H，Masi AT，et al.Preliminary criteria for the classification of the acute arthritis of the acute arthritis of primary gout［J］.Arthritis Rheum，1977，20(3):895－900

［6］Levin N，Nelson C，Gurney A，et al.Decreased food intake does not completely account for adiposity reduction after ob protein infusion［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，1996，93(4):1726－1730

［7］Thomas T，Gori F，Khosla S，et al.Leptin act on human marrow stromal cell to enhance differentiation to adipocytes osteoblasts and to inhabit differentiation to adipocytes［J］.Endocrinology，1999，140(4):1630－1638

［8］Matarese G.Leptin and the immune system:how nutritional status influences the immune response［J］.Eur Cytokine Netw，2000，11(1):7－14

［9］Richette P，Bardin T.Gout［J］.Lancet，2010，375(9711):318－328

［10］Wolf G，Chen S，Han DC，et al.Leptin and renal disease［J］.Am J Kidney Dis，2002，39(1):1－11

［11］Meyer C，Robson D，Rackousky N，et al.Role of the kidney in human leptin metabolism［J］.Am J Physiol，1997，273(5 Pt 1):903－907

［12］Lin JD，Chiou WK，Chang HY，et al.Serum uric acid and leptin levels in metabolic syndrome:a quandary over the role of uric acid［J］.Metabolism，2007，56(6):751－756

［13］Inoue M，Yano M，Yamakado M，et al.Relationship between the adiponectin－leptin ratio and parameters of insulin resistance in subjects without hyperglycemia［J］.Metabolism，2006，55(9):1248－1254

［14］Kieffer TJ，Habener JF.The adipoinsular axis:effects of leptin on pancreatic beta-cells［J］.Am J Physiol Endocrinol Metab，2000，278(1):1－14

Expression and significance of plasma leptin in patients with primary gouty arthritis and hyperuricemia

JIANG Dan1，ZHOU Jing-guo1△，QING Yu-feng1，XIE Wen-guang1，YANG Qi-bin1，LI Min1，ZHAO Ming-cai1，2
(1.Institute of Rheumatology and Immunoloy;2.Department of Clinical Laboratory，the Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College，Nanchong 637000，Sichuan，China)

Objective:To investigate the expression levels of plasma leptin(LEP)in patients with primary gouty arthritis(GA)and hyperuricemia(HA)respectively，as well as to explore the pathogenesis of GA and HA.Methods:ELISA was used to determine the levels of plasma leptin in 84 GA，38 HA，and 43 normal control(NC)patients.Correlation analysis was used to evaluate the relationship between the levels of LEP and the data which were collected from clinical and laboratory samples.Results:Plasma concentrations of leptin were significantly different in the three groups(F=17.78，P＜0.05).The expression levels of plasma leptin were significantly higher in GA than that in HA(436.55±246.65 pg/ml vs 306.25±173.16 pg/ml，P＜0.05)and NC(436.55±246.65 pg/ml vs 199.68±185.54 pg/ml，P＜0.05)，and the expression levels of plasma leptin in HA increased significantly when compared to the NC(306.25±173.16 pg/ml vs 199.68±185.54 pg/ml，P＜0.05).In GA patients，the levels of leptin were positively correlated with BMI，VLDL and Cr(r=0.31，r=0.28，and r=0.25;P＜0.05)，but there was no correlation between UA，TG，HDL，LDL，GLU，GR，LY，SR，CRP and the expression levels of leptin(P＞0.05).The levels of leptin were positively correlated with GLU(r=0.42;P＜0.05)，but there was no relationship between UA，TG，HDL，LDL，VLDL(P＞0.05).and the expression levels of leptin in HA.Conclusion:The increased expression of the leptin is involved in the metabolic disturbance of lipid and the functional lesion of the kidney in primary gouty arthritis.It has a relationship with glycometabolism in hyperuricemia，and may play a key role in the pathogenesis of primary gouty arthritis and hyperuricemia.

Arthritis;Gout;Hyperuricemia;Leptin

1005-3697(2012)06-0566-05

R589.7

A

10.3969/j.issn.1005-3697.2012.06.012

四川省教育厅科研基金(10ZA081)

2012-06-12

江丹(1985－)，女，四川安岳人，硕士研究生，主要从事自身免疫性疾病基础与临床研究。

△通讯作者:周京国，E-mail:jgzhou@nsmc.edu.cn网络出版时间:2012-11-1217∶11

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20121112.1711.015.html