番荔枝不同部位醇提物对S180荷瘤小鼠的抑瘤和一般毒性作用

邓旭坤, 赵湘培, 米 雪, 李 环, 符若男

(中南民族大学 药学院，武汉 430074)

我国有24属，103种番荔枝科植物(Annonaceae)，资源丰富，民间用其果实治疗恶疮肿瘤.目前从番荔枝科植物中寻找抗肿瘤药物主要集中在紫玉盘属(Uvaria)、哥纳香属(Goniotnalamus)、番荔枝属、暗罗属等植物[1-4].番荔枝科含生物碱类、萜类、黄酮类、番荔枝素、多氧环己烯和苯乙烯内酯等成分.其中苯乙烯内酯类、多氧环己烯类、二萜类及番荔枝内酯类具有抗肿瘤活性，如多氧环己烯类对多药抗性的肿瘤细胞有显著杀伤作用[1-3]；番荔枝内酯类抗癌活性极强，能抑制肿瘤细胞生长及逆转肿瘤多药耐药性[5-7]；番荔枝素(polyketides) 和乙酞精宁(AGs)也是特有的抗肿瘤活性成分[8].

基于目前对番荔枝属植物的体内肿瘤药理学研究较少，笔者采集了海南番荔枝属植物番荔枝，考察其叶、枝、种子三个部位的醇提物对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用，并利用给药前后小鼠的体重、胸腺和脾重量变化评价其一般毒性，为寻找番荔枝抗肿瘤的活性部位和开发抗肿瘤新药提供依据.

1 材料与方法

1.1 药品和试剂

海南番荔枝的叶、枝、种子由海南省琼山市演丰镇采集，经中南民族大学万定荣教授鉴定为番荔枝科番荔枝属植物番荔枝.顺铂(Cisplatin,CDDP)注射粉针剂 (809021CE，齐鲁制药公司)，氯化钠注射液(090325505，武汉滨湖双鹤药业有限责任公司).其它为市售分析纯试剂.

1.2 实验动物及瘤株

SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～25g，购于湖北省疾病预防控制中心，许可证号：NO.00005069.S180腹水瘤细胞购于武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC).

1.3 样品制备

浸膏的提取：将番荔枝的叶、枝、种子烘干并粉碎， 枝、种子各称取1 kg，叶0.77 kg，用10倍95%的乙醇浸泡2 d后得澄清液，其残渣用70%的乙醇浸泡2 d，将2次澄清液混合浓缩，得叶、枝、种子的浸膏分别为：55，116，170 g.

药液的配制：17.5，35，70 mg种子和300，600 mg枝、叶原药材加入生理盐水各配成20 mL混合物.

1.4 S180荷瘤小鼠模型的建立

取生长旺盛无溃破的荷S180腹水瘤小鼠，颈椎脱臼处死，从腹腔无菌抽出乳黄色瘤液，经台盼兰染色确认细胞状态良好后，将瘤液用无菌生理盐水稀释成106个/mL的细胞悬液，每只小鼠于右前肢腋窝皮下接种0.2 mL.

1.5 动物处理与分组

50只小鼠随机分5组，每组10只，雌雄各半.分别为空白组(0.95%NS,ig)，顺铂组(3mg/kg,ip)，叶、枝组(300，600 mg/kg，ig)、种子组(17.5，35，70 mg/kg，ig) .接种瘤液24 h后按0.02mL/g给药，每天1次，连续10 d，观察记录各组小鼠生存状况并称重.

1.6 指标检测

末次给药24 h后，将小鼠处死，迅速剥取瘤块、脾脏和胸腺并称重.按以下公式计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数[9]：

抑瘤率=

脾脏指数=脾脏重(mg)/小鼠体重(g)×100%，

胸腺指数=胸腺重(mg)/小鼠体重(g)×100%.

1.7 数据处理

2 结果与分析

2.1 番荔枝不同部位醇提物对S180荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用

番荔枝不同部位醇提物对S180荷瘤小鼠抑瘤作用见表1.由表1可见，番荔枝的叶、枝醇提物组的瘤重与空白组比较无显著性差异(P>0.05)，说明其对小鼠体内肿瘤无抑制作用.而种子醇提物各剂量组瘤重较空白组明显减轻(P<0.05)，是番荔枝抗肿瘤的主要活性部位，其中高剂量组(70 mg/kg)的抑瘤率达53.31%.

表1 番荔枝不同部位的醇提物对S180荷瘤小鼠抑瘤作用

2.2 番荔枝不同部位醇提物对S180荷瘤小鼠一般毒性作用

番荔枝不同部位醇提物对S180荷瘤小鼠体重和免疫器官(胸腺、脾)的影响结果见表2.由表2可见，空白组荷瘤小鼠体重增加，而顺铂组小鼠体重降低.番荔枝的叶、枝醇提物使荷瘤小鼠体重增加，体重增长率与空白组无显著性差异(P>0.05)，说明枝、叶毒性较低；种子醇提物各组较空白组体重减轻(P<0.01)，但减轻程度较顺铂少(P<0.01或P<0.05)，说明种子是番荔枝的主要毒性部位，但毒性较顺铂小.

就番荔枝对荷瘤小鼠的免疫器官影响而言，其叶、枝醇提物组胸腺指数和脾指数与空白组相当(P>0.05)；而种子醇提物组和顺铂组均使胸腺指数和脾指数降低(P<0.01)，且两者无显著性差异(P>0.05)，说明种子醇提物对小鼠免疫器官有一定的毒性.

表2 番荔枝不同部位醇提物对S180荷瘤小鼠体重，胸腺指数和脾指数的影响

3 结语

本研究通过建立S180荷瘤小鼠模型，考察了番荔枝的叶、枝和种子醇提物对肿瘤的抑瘤率，小鼠体重、胸腺指数和脾指数的影响.结果表明，番荔枝的种子醇提物对小鼠S180肿瘤生长有明显抑制作用，70 mg/kg时抑瘤率达51.31%；并能使体重减轻，胸腺指数和脾指数显著减小；而其叶和枝醇提物对S180荷瘤小鼠的肿瘤生长无抑制作用，对体重和免疫器官指数无影响.说明种子是番荔枝抗的肿瘤活性部位和毒性部位，将进一步通过化学分析明确成分，为番荔枝在抗肿瘤开发和临床应用提供实验依据.

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