Podoplanin在非小细胞肺癌中表达及意义

　　摘 要： 为了检测podoplanin在非小细胞肺癌（NSCLC）上的表达，探讨其临床病理学意义。作者应用免疫组织化学SP法检测50例NSCLC患者及10例癌旁正常肺组织中podoplanin的表达，分析其表达情况及与临床病理参数之间的关系。结果在NSCLC患者癌细胞中存在podoplanin表达，且明显高于癌旁正常肺组织；阳性表达与患者淋巴结转移有关（P均＜0.05），得出Podoplanin在NSCLC中存在表达，并且与肿瘤浸润转移有关的结论。
　　关键词： 非小细胞肺癌 Podoplanin 表达
　　
　　Podoplanin是一种小分子黏液样跨膜糖蛋白，在人体多种组织细胞中表达，如肾足突细胞、胎盘、肺、间皮细胞等，但主要表达在淋巴管内皮细胞，故作为淋巴管内皮的特异性标记广泛应用于组织病理学。［１］研究发现，Podoplanin在人肿瘤细胞如宫颈癌、口腔鳞癌等表达上调与患者的预后有关，［２］—［３］可见Podoplanin在肿瘤进展过程中发挥重要的作用。目前对Podoplanin在NSCLC中的研究甚少。本研究采用免疫组化的方法，通过检测NSCLC患者Podoplanin的表达，并且探讨其临床病理学意义。
　　1.材料与方法
　　1.1标本来源
　　组织标本取自 2007年3月至2010年10月德州人民医院手术切除的初诊非小细胞肺癌（NSCLC）石蜡包埋标本50例，另设15例癌旁正常肺组织作为对照。所选标本术前均未接受化疗、放疗及其他治疗。标本中男32例，女18例。诊断时平均年龄50.32岁（44—78岁）。根据1999年修正的最新“分类法”确定组织分类：鳞癌12例，腺癌32例，腺鳞癌6例；组织分化程度：5例为高分化，22例中分化，23例低分化；根据《美国联合会癌症分期手册》进行术后分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期17例，Ⅲ-Ⅳ期14例；伴有淋巴结转移者21例，无淋巴结转移者29例。
　　1.2主要试剂
　　鼠抗人Podoplanin单克隆抗体D2-40（Dako公司），免疫组化SP法检测试剂盒及DAB显色剂（北京中杉公司）。
　　1.3实验方法及步骤
　　采用免疫组织化学SP检测目的蛋白。所有标本均用10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm切片，常规脱蜡至水化，用pH6.0柠檬酸盐为修复液的微波修复方法进行抗原修复，一抗4℃过夜，二抗37℃孵育，DAB显色。每批染色均设阳性和阴性对照。
　　1.4结果判定标准
　　免疫组织化学结果判定标准：Podoplanin阳性细胞胞膜或胞浆呈均匀着色的棕黄色颗粒，背景清晰无非特异性着色。每张切片均由2位病理科医生双盲法阅片，如对临床资料均不了解，2名医师计数差10%以上，就重新计数。
　　1.5数据处理
　　采用Spss15.0统计学软件进行统计学处理。Podoplanin在NSCLC癌细胞及间质上表达的关系和与患者临床病理参数的关系采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
　　2.结果
　　2.1Podoplanin在人NSCLC标本中的表达
　　Podoplanin阳性染色主要位于细胞膜和细胞质中，为棕黄色颗粒（图1）。Podoplanin在癌细胞中存在表达18%（9/50），且显著高于正常对照组织（6.67%，P＜0.05）；在癌旁正常肺组织间质中未见有表达。
　　2.2NSCLC中Podoplanin的表达与患者临床病理参数的关系
　　见表2.
　　x2检验分析表明阳性表达与淋巴结转移相关（P＜0.05），与患者分期、分化程度均无相关性（P均＜0.05）。
　　3.讨论
　　Podoplanin首次发现于肾病鼠模型的肾小球足突细胞表面，在防止细胞黏附、维持肾小球足突细胞形态和维持肾小球通透性方面有重要作用。［４］Podoplanin还在肺成熟和淋巴管的形成过程中发挥重要作用。［５］结构上Podoplanin拥有一个诱导血小板聚集域（platelet aggregation-stimulating domain，PLAG），所以Podoplanin具有诱导血小板聚集的功能。［６］研究发现肿瘤细胞聚集血小板的功能越强，转移率越高；聚集血小板的功能越弱，转移率越低。［７］聚集的血小板围绕在癌细胞周围，可以保护癌细胞逃避免疫监视直接粘附于血管内皮，增强癌栓在循环中的阻力，促进癌细胞外渗和血行转移。［８］Suzukilnoue［９］等发现癌细胞上Podoplanin 的表达可以促进血小板的聚集，并且与癌细胞的迁徙、浸润、转移等恶性行为有关。由此可见，Podoplanin可通过诱导血小板聚集促进肿瘤的进展。在本研究中，Podoplanin在NSCLC癌细胞上表达明显高于癌旁正常肺组织，提示Podoplanin在癌细胞表达与肿瘤的恶性程度及进展有关。
　　综上所述，本研究结果显示Podoplanin在NSCLC上存在高有表达，还与患者淋巴结转移有关。因此，对Podoplanin的深入研究，可能为抑制肿瘤进展转移提供新思路。
　　
　　参考文献：
　　［1］Martin-villar E，Schollf G，Gamallo C，et al.Characterization of human PA2.26 antigen （T1alpha-2，podoplanin），a small membrane mucin induce in oral squamous cell carcinomas ［J］.Ira J Cancer，2005，113，（6）:899-910.
　　［2］Dumoff KL，Chu CS，Harris EE，Holtz D，Xu X，Zhang PJ，ACS G.Low podoplanin expression in pretreatment biopsy material predicts poor prognosis in advanced-stage squamous cell carcinoma of the uterine cervix treated by primary radiation.Mod Pathol 2006，19，（1）:708-716.
　　［3］Yuan P，Temam S，El-Naggar A，Zhou X，Liu DD，Lee JJ，Mao L.Overexpression of podoplanin in oral cancer and its association with poor clinical outcome.Cancer，2006，10，（7）：563–569.
　　［4］Raica M，Cimpean AM，Ribatti D.The role of podoplanin in tumor progression and metastasis［J］.2008，28，（58）:2997-3006.
　　［5］Schacht V，Ramirez MI，Hong YK，et al.T1alpha/podoplanin deficiency disrupts normal lymphatic vasculature formation and causes lymphedema.EMBO［J］2003，22:3546-3556.
　　［6］Kaneko，M.，Kato，Y.，Kunita，A.，Fujita，N.，Tsuruo，T.and Osawa，M.Functional silylated O-glycan to platelet aggregation on Aggrus （T1alpha/Podoplanin）molecules expressed in Chinese hamster ovary cells.J.Biol.Chem.2004，279，38838-38843.
　　［7］Luise E，Michael PS.Deadly allies:the fatal interplay between platelets and metastasizing cancer cells.Blood，2010，115，（17）：3427-3436.
　　［8］Takashi TS，Naoya，FU.Platelet aggregation in the formation of tumor metastasis［J］.Proceedings of the Japan Academy .Series B，Physical and biological science.2008，84，（6）：189-198.
　　［9］Suzuki-Inoue K，Kato Y，Inoue O，et al.Involvement of the snake toxin receptor CLEC-2，in podoplanin-mediated platelet activation，by cancer cells.J Biol Chem，2007，282，（36）：25993-6001.