石油原油中微生物的分离及形态观察

陈绍兴,刘 杰,徐艳飞,杨 瑶,倪江勇

(红河学院生命科学与技术学院,云南蒙自661100)

石油原油中微生物的分离及形态观察

陈绍兴,刘 杰,徐艳飞,杨 瑶,倪江勇

(红河学院生命科学与技术学院,云南蒙自661100)

本研究从辽河油田(辽宁省凌海市阎家镇锦州采油厂)采集原油样品,采用LB(Luria-Bertani)培养基,好氧培养.采用稀释涂布的方法,进行菌落分离.根据各自的菌落形态,从中分离出10株菌落形态差异较大的菌株.进行革兰氏染色,Olypus CX31生物显微镜进行形态观察,结果显示:菌落形态差异较大的菌株其显微形态也不同,并且将这10个菌株分为1株革兰氏阳性菌和9株革兰氏阴性菌.

辽河油田;石油原油;石油降解;微生物

1926 年,美国的Bachman首次提出将细菌注入地层提高石油采收率[1].近40年来,世界各地进行了几千个油田试验,分离筛选出适合不同地层条件、具有不同功能的菌种,单井处理增产79%～300%,微生物驱增产12%～600%.原油经过一次采油和二次采油以后,地下剩余原油通常还会在50%以上,为了提高采收率,人们对三次采油技术越来越重视[2]随着经济的高速增长,我国石油的环境治理任务也日益紧迫[3].随着生物技术特别是分子生物技术的快速发展,人类对微生物的操纵能力正在逐日增强,充分利用微生物进行原油开采的技术必将为21世纪石油工业的发展、缓解能源危机开辟新的途径[4].

本研究组从辽宁省凌海市阎家镇锦州采油厂采集原油样品,从中分离出10个微生物菌株对其微生物的种类和形态进行初步研究,采用革兰氏染色体对菌落的显微形态进行观察.

1 材料与方法

1.1 石油样品采集

石油的原油样品采集于辽宁省凌海市阎家镇锦州采油厂,由陈吉喆提供.

1.2 培养基制作

LB(Luria-Bertani)培养基(g/L),胰蛋白胨10g,酵母抽提物5g,NaCl 5g.如需要固体培养基,加入2%的琼脂粉.121℃,20min灭菌.

1.3 革兰氏染色

参照沈萍等主编的《微生物学实验》第三版[5].

1.4 显微照相观察

采用Olypus CX31生物显微镜,油镜观察,数码相机拍照.

2 结果与分析

2.1 菌落形态观察

如图1所示,A至J分别是从辽河油田分离出来的10株菌,其菌落形态有较大的差别.A菌落呈黄色,边缘不光滑,较干燥,菌落大;B菌落呈白色,边缘不光滑;C菌落较透明,边缘呈放射状;D菌落透明,边缘光滑,比较的湿润,菌落较大;E菌落白色,边缘较光滑;F菌落不透明,边缘光滑;G菌落较小,边缘光滑,隆起;H菌落淡黄色,边缘较光滑;I菌落透明,边缘光滑;J菌落黄色,湿润,隆起.2显微形态观察

图1 菌落形态观察

如图2所示,从辽河油田分离到的10个菌株,其中C菌株(如图2 C)为革兰氏阳性,其余的9个菌株均为革兰氏阴性.B菌株(如图2 B)与G(如图2G)菌株为球状;J菌株(如图2 J)为短杆状;A菌株、C菌株、D菌株、E菌株、F菌株、I菌株(如图2 A,C,D,E,F,I)为杆状;而H菌株(如图2 H)较为特殊为长丝状.

图2 革兰氏染色及显微观察

3 讨论

本研究组从辽河油田分离到10个菌落形态各异的菌株,从菌株的菌落形态上看有圆形,边缘有整齐的或边缘不整齐的;有隆起的和不隆起的;颜色上有透明的、不透明白色、淡黄色、黄色;菌落的大小也相差较大,有小菌落和大菌落.革兰氏染色结果显示多为革兰氏阳性菌株,杆状的居多.以上结果说明了辽河油田的原油样品中蕴涵了丰富的微生物资源,在石油原油这样特殊的环境条件下也存在丰富的微生物,为从中筛选出能够降解石油污染,寻找微生物驱油的优势菌株,脱硫菌株等方面的应该提供了丰富的菌种资源;为分离高效石油降解菌株提供基础.

[1]李牧,杨红,刘宏伟等.微生物吞吐开采稠油[J].油田化学,1999,16(2):158-162.

[2]Cui Po,Shi Wen-ping.Present situation of production process and market of methyl methacrylate at homeandzbroad[J].Technique and economics of petrochemical engynology,2000,8(6):30-32.

[3]Aries E,Doumenq P,Artaud J,et al.Effects of petroleumhydrocarbons on the phospholipid fatty acid composition of aconsortium composed of marine hydrocarbon-degrading bacteria[J].Organic Geochem,2001,32:891-903.

[4]Sun Le-fang,Zhang Hong-mei.Application of biological technique in petrochemical industry[J].Modern chemical industry,2000,12(20):15-19.

[5]沈萍.微生物学实验:第三版[M].北京:高教出版社,2001.

Isolation and Morphology Observation ofM icroorgan ism from Petroleum

CHEN Shao-xing,LIU Jie,XU Yan-fei,YANG Yao,NI Jiang-yong

(College of Life Sciences,Hong he University,Mengzi 661100,China)

Diluted spreading method was used to separate the microorganism from Liao He Oil Field.This study isolated ten different morphology bacteria from Liao He Oil Field.The microscope shape of the strain was observed by Olympus CX31 under the gram staining.All the ten strain was separated into two groups:one strain gram positive,and nine strains gram negative.

Liao He Oil Field;petroleum;degradation;microorganism

Q4

A

1008-9128(2011)02-0027-02

2011-02-08

红河学院生物化学与分子生物学重点学科建设项目(071010);云南省教育厅科学研究基金(09Y0413);红河学院校级课题项目(XJ1Y0802);

陈绍兴(1979-),男,浙江龙游人,硕士,讲师。研究方向:微生物生理生化研究。

[责任编辑 张灿邦]