鼻渊丸质量标准的研究

2011-12-23徐红霞

三峡大学学报(自然科学版) 2011年4期

熊泽徐红霞邵伟李啸胡滨仇敏

(1.三峡大学化学与生命科学学院,湖北宜昌 443002;2.湖北民康制药有限司,湖北宜昌 443002)

鼻渊丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第六册第202 页,该方是由苍耳子、辛夷、金银花、茜草、野菊花五味药材制成的复方制剂,具有祛风宣肺、清热解毒、通窍止痛之功效,临床用于鼻塞鼻渊,通气不畅,流涕黄浊,嗅觉不灵,头痛,眉棱骨痛.2006 年根据国家药品标准提高行动计划中成药品种增修订项目任务表要求,本研究在制定鼻渊丸质量标准过程中,对照《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第六册第202 页中“鼻渊丸”一章,对“鼻渊丸”质量标准进行了修订及提高.中药成方制剂第六册中对该药仅有显色反应和丸剂通则检查,为保证药品疗效,有必要建立定量分析方法,以便更好地控制药品质量.本研究对其处方中各味药材进行了鉴别、分析,其主药苍耳子中主要含有脂肪油,而油类所含成份比较复杂,一种挥发油中常常含有几十种到一、二百种成份,故不易做定量分析,而其另一主要成份辛夷,本研究在参考2005 年版《中国药典》一部的基础上,探索用HPLC 方法测定其活性成份木兰脂素含量的方法,取得很好的结果.在薄层鉴别方面,制定出药方中主药辛夷、苍耳子、金银花、野菊花的薄层鉴别方法[1].

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

烘箱(DHP-781 型,湖北省黄石市医疗器械厂生产),紫外灯(365 nm ,上海科艺光学仪器厂生产),点样器(25 μL,上海安亭微样进量器厂生产).

日本岛津液相色谱仪:泵LC-10A T ;检测器SPD-M10VP;乙睛为色谱纯,四氢呋喃,甲醇、乙醇为分析纯,水为重蒸馏水.

鼻渊丸(批号为060301、060302、060303)由湖北民康制药有限公司提供.

木兰脂素对照品(批号:882-200102),绿原酸对照品(批号:110753-200413),两种对照品均由中国药品生物制品检定所提供.

1.2 定性鉴别方法

1.2.1 辛夷

取本品3.0g,研成细粉,加乙酸乙酯30mL,浸泡20 min 后,超声处理10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1 mL 使溶解,作为供试品溶液.取辛夷花对照药材0.5 g ,同法制成对照药材溶液.另取木兰脂素对照品,加甲醇制成每1 mL 含1 mg 的溶液,作为对照品溶液.照薄层色谱法(中国药典2005 版一部附录V I B)试验,吸取上述三种溶液各5 μL ,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以二氯甲烷-乙酸乙酯(9 ∶1)为展开剂,展开,取出, 晾干, 喷以10%硫酸乙醇溶液, 在90 ℃加热至显色清晰.

1.2.2 苍耳子

取本品适量,研细,称取5 g,加甲醇30 mL,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水适量使溶解,加于已处理好的D101 型大孔吸附树脂柱(内径10 ～15 mm ,湿法装柱5 cm,水50mL 预洗)上,先用水100 mL 洗脱,弃去水洗液,再用20%甲醇100 mL 洗涤,收集甲醇洗脱液,蒸干,残渣加甲醇1 mL 使溶解,作为供试品溶液.另取苍耳子对照药材2 g,加50%甲醇40 mL 回流提取2 h,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇20 mL 微热使溶解,浓缩至约2 mL ,滤过,滤液作为对照药材溶液.照薄层色谱法(中国药典2005 年版一部附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各10 μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G 薄层板上,以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水-甲酸(3 ∶10 ∶2 ∶2 ∶2)的下层溶液(2 ～10 ℃放置过夜)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘蒸气中显色.

1.2.3 金银花、野菊花

取本品细粉5 g,用水湿润,加醋酸乙酯20 mL ,超声处理5 min,弃去醋酸乙酯液,残渣自“加醋酸乙酯20 mL”起同法重复处理1 次,残渣加入1 mol/L 盐酸5 滴,加醋酸乙酯20mL,超声处理5 min,取醋酸乙酯液,残渣自“加醋酸乙酯20 mL”起同法重复处理2次,合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣用1mL 乙醇溶解,作为供试品溶液.另取绿原酸对照品,加乙醇制成每1 mL 含0.5 mg 的溶液,作为对照品溶液.照薄层色谱法(《中国药典》2005 年版一部附录VIB)试验,吸取上述两种溶液各1 μL ,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1 ∶15 ∶1 ∶1 ∶2)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视.

1.3 HPLC法测定木兰脂素含量

1.3.1 色谱条件

色谱柱COSM OSIL PACKED COLUM N for HPLC C18 250*4.6 mm ,5 μm;流动相:乙睛-四氢呋喃-水(38 ∶2 ∶62)[2-3];流速1.0 mL/min;检测波长278 nm;进样量10 μL .

1.3.2 对照品溶液的制备

精密称取在60 ℃减压干燥至恒重的木兰脂素对照品适量,加甲醇制成每1 mL 含木兰脂素15 μg 的溶液,即得对照品溶液.

1.3.3 供试品溶液制备[4-5]

取重量差异项下本品,研细,取约5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇25 mL, 密塞, 称定重量,超声处理20 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5 mL,加于中性氧化铝柱(100-200 目2 g,内径10 mm,湿法装柱,用甲醇预洗)上,用甲醇洗脱,收集洗脱液,置25 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得供试品溶液.

1.3.4 阴性对照溶液的制备

按质量标准中处方比例配成缺辛夷药材的样品,然后按供试品溶液的制备方法,制成阴性对照溶液.

1.3.5 标准曲线绘制

精密称取在60 ℃减压至恒重的木兰脂素对照品15 mg,用甲醇溶解并定容至100mL(0.15 mg/mL)摇匀,再分别精密量取1 mL ,4 份,制成5 个不同浓度的标准品溶液(0.006 04,0.015 10,0.030 20,0.075 50,0.151 0mg/mL),分别精密吸取上述各溶液10μL,按色谱条件测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,木兰脂素的进样量为横坐标,绘制曲线,计算得回归方程.

1.3.6 回收率试验

采用加样回收法精密称取5 g 已知含量、同一批号鼻渊丸(重复性试验样品0.32 mg/g)粉末6 份,分别加入对照品(0.2 mg/mL)各8.0 mL,按供试品溶液制备和样品测定项下方法操作,用1.3.1 色谱条件测定,结果见表2.

1.3.7 样品测定

精密称取以下10 个批号浓缩鼻渊丸粉末5.0 g,按供试品溶液的制备和样品的测定项下方法操作测定,在上述色谱条件下,对十批样品进行测定,以确定本品木兰脂素含量下限.