鲜切皱皮木瓜饮片中齐墩果酸和熊果酸含量测定

周明星 邓改改 丁明若 罗友成 刘焱文 汪鋆植

（1.天然产物开发与利用湖北省重点实验室（三峡大学）,三峡大学化学与生命科学院,湖北 宜昌 443002；2.湖北中医学院中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室,湖北 武汉 430065）

皱皮木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles Speciosa（Sweet）Nakai的干燥成熟果实,为常用中药[1],具有平肝舒筋、和胃化湿等功效,主要用于治疗湿痹拘挛、腰膝关节酸重疼痛、吐泻、转筋、脚气水肿等症[2].湖北省长阳土家族自治县是我国皱皮木瓜道地药材主产区,产量占全国皱皮木瓜产量的60%以上.木瓜的传统产地加工方式为鲜切后自然晒干,这种加工方式受自然条件影响大,易引起木瓜霉烂变质,每年由此造成的直接经济损失高达30～70%,极大地影响皱皮木瓜的产业发展.为保证皱皮木瓜质量,笔者对皱皮木瓜产地加工技术进行了改进,建立了木瓜鲜切饮片技术.而在《中国药典》（2005年版）中,要求对木瓜中齐墩果酸和熊果酸进行检查,为评价鲜切饮片质量,实验采用高效液相色谱法（HPLC）,测定了不同方法制备的木瓜饮片中齐墩果酸和熊果酸含量,并对其HPLC指纹图谱进行了比较.

1 材料与仪器

1.1 药材

新鲜皱皮木瓜采于长阳土家族自治县榔坪镇,由长阳清江药谷有限公司提供.市售皱皮木瓜饮片购自宜昌市康鑫医药经销有限公司.经三峡大学杨进副教授鉴定为贴梗海棠Chaenomeles Speciosa（Sweet）Nakai.的果实.

1.2 仪器与试剂

仪器:高效液相色谱仪（Waters 2998）；立式蒸汽灭菌器YXQ-LS-30 SII（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；GZX-9240 MBE数显鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；双重蒸馏水器；电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）；EYELA SB-1100旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限责任公司）.

试剂:乙腈（色谱纯,美国 Tedia公司）、甲醇（色谱纯,美国J.T.Baker公司）；甲醇（分析纯,天津博迪化工）；齐墩果酸、熊果酸对照品（购于中国药品生物制品检定所）.

2 方法与结果

2.1 木瓜样品制备

鲜木瓜,取新鲜木瓜,切厚片,经冷冻干燥制成鲜木瓜片.鲜切饮片,取新鲜木瓜,在高压蒸汽灭菌锅中经蒸气预处理后,切片,烘干.传统饮片,取新鲜木瓜,按传统加工方法制成饮片.

2.2 参照物溶液制备

精密称取齐墩果酸、熊果酸对照品适量,分别用色谱甲醇制成1.0 mg/mL对照品溶液,然后稀释成浓度为0.1,0.25,0.5,0.75mg/mL对照品溶液.

2.3 供试品溶液的制备

取不木瓜样品,粉碎,过80目筛,精密取不同样品粉末各0.5 g于100 mL具塞锥形瓶中,精密吸取25mL甲醇,称重,盖好瓶塞,冷浸过夜后超声提取45 min,称量,并用甲醇补足重量,放冷至室温,过滤,取续滤液,减压浓缩后定容至5 mL,然后用 0.45μ m微孔滤膜过滤,制得样品溶液.

2.4 色谱分析条件[2-4]

2.4.1 齐墩果酸和熊果酸含量测定HPLC分析条件

Diamonsil C18（4.6mm ×250mm,5μ m）色谱柱,流动相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（265∶35∶0.1∶0.05）,进样量10μ L,流速1.0mL/min,检测波长210 nm,柱温18℃.

2.4.2 指纹图谱色谱分析条件

Diamonsil C18（4.6mm ×250mm,5μ m）色谱柱,流动相:（A）乙腈,（B）水,梯度洗脱,0～50 min（5%～35%A,95%～65%B）,50～110 min（35%～100%A,65%～0%B）,110～120 min（100%A～0%B）；进样量 10 μ L,流速 1.0 mL/min,检测 波长 215 nm.

2.4.3 精密度实验

取同一供试品溶液,连续进样5次,计算出峰时间和峰面积的精密度,结果表明各峰出峰时间的精密度RSD小于0.28%,出峰面积的精密度 RSD小于2.0%.表明实验精密度良好.

2.4.4 稳定性实验

取同一供试品溶液,分别在0,4,8,12,24 h进样,计算各峰的保留时间和峰面积（以齐墩果酸为1,熊果酸为2,齐墩果酸出峰在熊果酸前,且较熊果酸峰大）.结果显示供试品溶液的指纹图谱在24 h内很稳定,各峰相对保留时间的RSD为0.19%,相对峰面积的RSD小于2.0%.

2.4.5 重现性实验[5]

取同一编号药材粉末5份,照前述处理方法制得供试品溶液,分别进样测定.实验表明本法重现性良好.

2.5 结果

2.5.1 标准曲线制作

齐墩果酸标准曲线线性回归方程:y=-0.03684+0.000316639x,R=0.9994,n=5；熊果酸标准曲线线性回归方程:y=-0.04266+0.000309155x,R=0.9997,n=5；x为吸收峰面积,y为质量浓度.

2.5.2 样品中齐墩果酸和熊果酸含量

样品中齐墩果酸和熊果酸含量见表1.

表1 样品中齐墩果酸和熊果酸含量表

2.5.3 木瓜饮片HPLC检测3D图

结果显示,各成分在检测波长215 nm下均有吸收.实验共检测120min,其中 0～10min除溶剂峰外没有其它峰,而在35～65 min基本没有峰,10～120 min共有27个共有峰,共有峰的峰位和峰形表明4批不同样品在组分上差异较小.但不同加工方法样品的共有峰和各峰峰面积存在着一定差异,药材特征峰的峰面积大小有较明显差异,说明不同加工来源样本所含的化学成分含量有差异.

图3 木瓜饮片总提物HPLC检测3D图

2.5.4 木瓜药材HPLC指纹图谱分析结果

木瓜药材HPLC指纹图谱分析结果见图4～7.

3 讨 论

“资丘皱皮木瓜”规范化的GAP药材种植基地建设为保证木瓜种质、规范栽培、田间管理、采收等生产环节提供了保障.但木瓜产地加工技术沿用传统方法,易引起木瓜霉烂变质,极大地影响了商品质量和药效.因此为保证木瓜饮片质量,对皱皮木瓜饮片生产技术进行改进势在必行.本文建立的木瓜鲜切饮片技术,保证了木瓜加工过程中的质量.鲜切饮片与传统饮片相比成分基本一致,标示成分含量明显高于传统饮片.

目前多数中药先在产地加工成中药材后再运输到异地加工成饮片,不但增加了生产成本,而且药材按传统产地加工方式加工,由于技术和条件限制,易造成损耗、变质和药效成分流失,严重地影响了中药质量.而社会的发展使得交通运输日以便利,中药行业的发展使许多中药在产地直接加工成饮片成为可能.这样既可降低饮片加工成本,又可保证确保饮片来源,稳定饮片质量[6-7].本文为探讨中药饮片新的加工方法,完善中药产业链提供了一种可行的方法.

皱皮木瓜鲜加工饮片由于由鲜果直接加工成饮片,干燥速度快,表皮皱缩较轻,与传统饮片相比性状差别较大.而人们对饮片质量的把握性状是最直观的指标.因中药鲜切饮片能否代替传统饮片进入市场,一方面需要得到药品管理部位和经营使用单位认可,另一方面进行药效学比较.

[1]中国医学科学院药物研究所.中药志（第3册）[M].2版.北京:人民卫生出版杜,1993:215.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:化学工业出版社,2010:57.

[3]陈丰连,黄锦茶,梁欣健.HPLC法测定凉粉草中齐墩果酸和熊果酸含量[J].中药新药与临床药理,2010:21（4）:416-418.

[4]黄志军.木瓜水溶性部位高效液相色谱法指纹图谱研究[J].时珍国医国药,2006,17（10）:1869.

[5]屠鹏飞.高效液相色谱法制定中药材中中药注射剂特征指纹图谱的探讨[J].中成药,2000,22（7）:516.

[6]肖永庆,张 村,李 丽.中药饮片行业发展问题与展望[J].医学研究杂志,2009,28（12）:3-6.

[7]肖永庆,张 村,李 丽.浅谈中药饮片规范化生产和过程控制[J].医学研究杂志,2010,39（9）:11-14.