甲基丁香酚微乳的制备及质量评价

白 波，宋晓平，吴明明，付明哲

（西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌712100）

甲基丁香酚（methyleugenol）属苯丙素类化合物，主要存在于肉豆蔻、香茅和细辛等植物中，可作为桔小实蝇等农业害虫的引诱剂，是潜在的植物源杀虫剂［1］。但甲基丁香酚不溶于水，目前尚缺乏适宜的药物制剂。微乳（microemulsion）是由表面活性剂、助表面活性剂、油相及水相在一定比例自发形成的一种透明、低粘度、各向同性且热力学稳定的油水混合系统［2］。微乳粒径小而均匀，可以提高脂溶性药物的溶解度，并能提高药物的生物利用度，是理想的新型药物载体［3］。本试验采用伪三元相图法，进行甲基丁香酚微乳配方筛选、制备和稳定性试验，旨在为进一步开发利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器 甲基丁香酚，齐尔普医药化工有限公司；油酸乙酯（EO），阿拉丁试剂有限公司；聚乙二醇400（PEG400）、吐温－80（Tween－80），天津市博迪化工有限公司；辛酸葵酸甘油三酯（GTCC）、聚氧乙烯醚（40）氢化蓖麻油（RH40）、聚氧乙烯醚（35）蓖麻油（EL35），北京凤礼精求商贸有限责任公司；JEM1230型透射电子显微镜，日本日立电子公司；Zetasizer Nano ZS型激光粒度分析仪，英国Malvern Instrument公司。

1.2 甲基丁香酚溶解性考察 量取EO、GTCC、霍霍巴油、液体石蜡、乙醇、异丙醇、1，2－丙二醇、丙三醇、PEG400、Tween－80、RH40、EL35 等 辅 料 各 1 mL，分别加甲基丁香酚1mL混合，3 500r/min离心1min［4］，未见分层为完全溶解。不能完全溶解时，继续加辅料2～9mL或10～99mL。在1mL～不到10mL辅料中完全溶解为易溶，10mL～不到30mL辅料中完全溶解为溶解，30mL～不到100 mL辅料中完全溶解为略溶［5］。

1.3 空白微乳处方的筛选

1.3.1 油相的筛选 以Tween－80为表面活性剂、乙醇为助表面活性剂（表面活性剂与助表面活性剂的质量比Km＝2∶1），混合表面活性剂（表面活性剂与助表面活性剂的合称）与油相按9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9混合，在室温磁力搅拌下用蒸馏水滴定，观察体系的变化，记录临界加水量［6－7］，用 Origin7.5软件绘制伪三元相图，选出微乳形成区域较大的油相。

1.3.2 表面活性剂的筛选 以“1.3.1”筛选出的油为油相，乙醇为助表面活性剂，Km＝2∶1，选择“1.2”中对甲基丁香酚“易溶”和“溶解”的表面活性剂，按照“1.3.1”中的方法绘制伪三元相图，选出微乳形成区域较大的表面活性剂。

1.3.3 助表面活性剂的筛选 以“1.3.1”筛选出的油为油相，“1.3.2”筛选出的表面活性剂为表面活性剂，Km＝2∶1，选择“1.2”中对甲基丁香酚“易溶”和“溶解”的助表面活性剂，按照“1.3.1”中的方法绘制伪三元相图，选出微乳形成区域较大的助表面活性剂。

1.4 甲基丁香酚微乳的制备及质量评价

1.4.1 制备方法 根据“1.3”选出的辅料，以 Km＝2∶1、混合表面活性剂与油相的比例为9∶1，分别称取表面活性剂24g、助表面活性剂12g，搅拌混匀，再加入油相4g，搅拌混匀，然后加入甲基丁香酚5g，充分搅拌溶解，再逐滴滴加蒸馏水，边滴加边搅拌，直至体系澄清。

1.4.2 质量评价 （1）类型鉴定：取甲基丁香酚微乳2份，分别加入亚甲蓝和苏丹红染料，如果亚甲蓝的扩散速度快于苏丹红的扩散速度，则为O/W型微乳，反之为 W/O型。（2）形态观察：甲基丁香酚微乳用去离子水稀释，取1滴稀释液滴在覆有支持膜的铜网上，自然晾干，再滴加2%磷钨酸溶液于铜网上负染15min，自然晾干后在电子显微镜观察。（3）粒径及分布：取一定量5%甲基丁香酚微乳溶液，以激光粒度分析仪测定粒径大小及分布。

1.5 甲基丁香酚微乳的稳定性考察

1.5.1 离心稳定性试验 取甲基丁香酚微乳适量于离心管内，4 000r/min离心30min，观察是否分层［8］。

1.5.2 热贮和冷藏试验 取甲基丁香酚微乳适量，置安瓿瓶中密封，共测试15个样品，每批5份，分别在54℃的恒温箱中、4℃和－20℃的冰箱中贮存15 d，于0、5、10、15d观察微乳外观变化情况［9］。

1.5.3 长期稳定性试验 取甲基丁香酚微乳适量，置安瓿瓶中密封，共测试5个样品，于常温下放置6个月，分别于1、2、3、4、5、6个月后观察有无浑浊、沉淀及相分离现象［10］。

2 结果

2.1 甲基丁香酚溶解性考察 甲基丁香酚在油相EO、GTCC和霍霍巴油中易溶，在液体石蜡中略溶；在表面活性剂Tween－80、RH40和EL35中易溶；在助表面活性剂乙醇、异丙醇和PEG400中易溶，在1，2－丙二醇、丙三醇中略溶。

2.2 空白微乳处方的筛选

2.2.1 油相的筛选 油相EO形成微乳区域最大，其次为GTCC（图1），而霍霍巴油不能形成微乳。因此，选择EO为油相制备微乳。

图1 不同油相对微乳形成区域的影响

2.2.2 表面活性剂的筛选 不同表面活性剂形成微乳区域大小依次为EL35＞RH40＞Tween－80（图2）。由于EL35形成的微乳不稳定，因此，选择RH40为表面活性剂制备微乳。

图2 不同表面活性剂对微乳形成区域的影响

2.2.3 助表面活性剂的筛选 不同助表面活性剂形成微乳区域大小依次为PEG400＞异丙醇＞乙醇（图3）。其中PEG400易出现混浊，因此，选择异丙醇为助表面活性剂制备微乳。

图3 不同助表面活性剂对微乳形成区域的影响

2.3 甲基丁香酚微乳的制备及质量评价 制备的5%甲基丁香酚微乳澄清、透明，亚甲蓝扩散速度明显快于苏丹红，表明所制备的微乳为O/W型。在透射电镜下观察，甲基丁香酚微乳呈球形（图4），激光粒度分析测定的平均粒径为18.2nm，粒径较均一，多分散系数PDI为0.018（图5）。

图4 甲基丁香酚微乳的透射电镜照片（100 000×）

2.4 甲基丁香酚微乳的稳定性 经离心稳定性试验、热贮和冷藏试验及长期稳定性试验，所制备的甲基丁香酚微乳仍澄清透明而均一，无分层现象。

图5 甲基丁香酚微乳的粒度分析

3 讨论

伪三元相图中微乳区域的大小是微乳处方筛选的主要依据，但在实际筛选时，尚须结合微乳形成后的稳定性来综合判定［10］。本试验发现，表面活性剂EL35比RH40形成的微乳区域大，助表面活性剂PEG400比异丙醇形成的微乳区域大，但EL35和PEG400所形成的微乳静置一段时间后易出现混浊而不稳定，故选择RH40为表面活性剂，异丙醇为助表面活性剂。据此优选出空白微乳体系RH40－异丙醇－油酸乙酯－水，其所形成的微乳区域较大，且具有良好的稳定性。制备的载药微乳均需进行质量评价［11］，本试验以6∶3∶1的RH40、异丙醇和油酸乙酯制备的5%甲基丁香酚微乳在高速离心、热贮、冷藏条件下及常温长期保存时均未出现分层现象，平 均粒径18.2nm，PDI为0.018，表明该载药微乳的分散性和稳定性良好。

微乳具有提高难溶性药物的溶解度和生物利用度等特点［12］。Chong－Kook Kim 等［13］将联苯双酯（BDD）制成微乳，显著提高了BDD的溶解度，其最大血药浓度Cmax提高了9.8倍。焦成美等［14］将地西泮（DZ）制成微乳，与市售DZ注射液相比，生物利用度也显著提高。我们前期研究发现，甲基丁香酚对动物螨具有显著杀灭活性，将其制成微乳不仅可进一步提高生物利用度，而且还将为兽医临床应用提供一种新的杀螨剂。

［1］ Huang Y，Ho S H，Lee H C，etal.Insecticidal properties of eugenol，isoeugenol and methyleugenol and their effects on nutrition ofSitophiluszeamaisMotsch.（Coleoptera：Curculionidae）andTriboliumcastaneum（Herbst） （Coleoptera：Tenebrionidae）［J］.J Stored Prod Res，2002，38：403－412.

［2］ 梁文平.乳状液科学与技术基础［M］.北京：科学出版社，2001：211.

［3］ 陆彬.药物新剂型与新技术［M］.北京：人民卫生出版社，2005：72－73.

［4］ 李国栋，范伟，陆国浩，等.月见草油自乳化制剂处方研究［J］.第二军医大学学报，2004，25（3）：320－322.

［5］ 陆彬.药剂学实验［M］.北京：人民卫生出版社，1994：1－2.

［6］ 崔正刚，殷福珊.微乳化技术及应用［M］.北京：中国轻工业出版社，1999：128－136.

［7］ 潘国梁，贾晓斌，魏惠华，等.药用微乳伪三元相图的几种制备方法比较研究［J］.中国药房，2006，17（1）：21－23.

［8］ 刘根新，张继瑜，吴培星，等.O/W 型药用微乳的制备及评价［J］.中国农业科学，2009，42（9）：3328－3333.

［9］ 熊翼.印楝油微乳的制备及其体外杀螨活性研究［D］.雅安：四川农业大学，2008.

［10］刘根新，张继瑜，吴培星，等.不同助表面活性剂对药用微乳形成的影响［J］.中国医院药学杂志，2009，29（3）：177－180.

［11］胡婵娟，赵秀丽，胡海洋，等.β－榄香烯微乳的制备及理化性质考察［J］.沈阳药科大学学报，2009，26（6）：415－422.

［12］于巍，王春龙，赵广荣.微乳给药系统研究进展［J］.医药导报，2006，25（11）：1177－1179.

［13］Kim C K，Cho Y J，Gao Z G.Preparation and evaluation of biphenyl dimethyl dicarboxylate microemulsions for oral delivery［J］.J Control Rel，2001，70（1－2）：149－153.

［14］焦成美.地西泮微乳鼻腔给药的研究［D］.沈阳：沈阳药科大学，2008.