nm23和VEGF-C在胃癌组织中的表达及意义

巩有方 董海生 张凤敏 姜卫星 张浩 赵健

胃癌是最常见的恶性消化道肿瘤。全部恶性肿瘤的第三位，胃癌的最主要的转移方式之一是经淋巴道转移，是影响患者预后的一个重要因素。血管内皮生长因子-C(VEGF-C)主要作用介导肿瘤淋巴管、血管生成和增殖，从而促进肿瘤细胞生长和侵袭，nm23是肿瘤转移抑制基因，而该基因缺失或者突变，均会促进肿瘤的生长和转移。本试验通过VEGF-C和nm23在胃癌组织中表达情况来探讨其预后的价值。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选取河北冀中能源峰峰集团总医院2005年5月至2008年12月手术切除及胃癌标本52例，所有患者术前均未行化疗和放疗。年龄32～74岁，平均年龄48．2岁;其中Ⅰ期10例，Ⅱ期24例，Ⅲ期18例，此外取24例癌旁正常组织作为对照。

1．2 方法 兔抗人多克隆VEGF-C抗体，S-P试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供，染色方法参照试剂盒说明，分别用

1．5%正常兔血清和0．01 mol/L PBS液取代第一抗体作为替代对照和空白对照。抗nm23基因产物单克隆抗体由美国Santa Cruz公司生产，免疫组化染色采用抗生蛋白链菌素-生物素标记法(LSAB)。试剂盒有丹麦DAKO公司生产，按产品说明书试验。TBS代替第一抗体作阴性对照。

1．3 结果判定 nm23阳性染色为位于细胞浆的棕黄色颗粒或团块，当阳性染色的癌细胞＜30%时定为阴性表达，即低表达;≥30%时为正常表达［1］。选染色均为癌细胞最密集区，在400倍视野下，以着色细胞占视野细胞总数的多少分为0～3级。0级:0;1级:＜25%;2级:26% ～50%;3级:＞50%。1级以上为阳性，0级为阴性。

1．4 统计学分析 计数资料采用χ2检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 nm23和VEGF-C在胃癌和癌旁正常胃组织中的表达的关系 nm23在癌细胞和癌旁正常胃组织中都可见阳性表达，但nm-23在52例胃癌组织中阳性表达23例(44．23%)，低于正常组织的83．33%(P＜0．01);VEGF-C在胃癌组织中阳性表达33 例(63．46%)，显著高于正常胃组织的 29．17%(P ＜0．01)。2．2 nm23低表达与胃癌生物学行为的关系 52例胃癌组织中nm23低表达有29例，低表达率为55．77%，而淋巴结转移组中有26例，其中低表达有10例(38．46%);在分化程度差组中，胃癌20例中低表达有5例(25．00%)。有淋巴结转移组阳性率明显低于无淋巴结转移组(P＜0．01)。在分化程度差组明显低于分化程度高组，而nm23低表达在性别、肿瘤大小和TNM分期间差异无统计学意义(P＞0．05)。见表1。

2．3 VEGF-C高表达与胃癌生物学行为的关系 52例胃癌中，VEGF-C阳性表达33例(63．46%)，淋巴结转移组中，有淋巴结转移者26例中，VEGF-C表达有19例(73．08%)，有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P＜0．05)。分化程度组中，分化程度差20例中，VEGF-C高表达18例(90%)，二者比较差异有统计学意义(P＜0．05)。而VEGF-C表达在肿瘤大小、患者性别、TNM分期关系间差异无统计学意义(P＞0．05)。见表 1。

表1 nm23低表达、VEGF-C高表达与临床各因素关系 n=52，例(%)

2．4 相关性分析 在29例nm23低表达阳性患者中，有24例VEGF-C为阳性表达。23例nm23低表达阴性患者中，VEGF-C为阴性表达8例。提示nm23低表达与VEGF-C高表达呈正相关关系(r=0．61，P ＜0．01)。

3 讨论

3．1 nm23 1988年nm23基因由美国国立癌症研究所的Steeg等［2］应用克隆杂交技术首先从小鼠的黑色素瘤细胞中分离得到。该基因定位于人类染色体17q22，产物为152个氨基酸组成的17 kd核内及胞浆蛋白，该蛋白与二磷酸核苷激酶(nucleotide diphosphate kinase，NDPK)的氨基酸序列具有高度同源性。目前认为nm23可能是一种具有NDPK功能的基因，并由此可能抑制肿瘤的转移能力，NDPK一方面参与细胞骨架微管蛋白的多聚化以调节细胞运动，并参与细胞分裂时纺锤体的形成来调节细胞分化，另一方面通过影响G蛋白的信号传递发挥负调节作用［3－5］。nm23基因表达与多种肿瘤好转呈负相关［4］。本研究发现:胃癌组织中nm-23的表达(55．77%)显著低于正常组织的87．5%(P ＜0．05)。在组内比较中，nm-23在分化程度、有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P＜0．05)。这提示nm-23基因在抑制肿瘤细胞的活性，在胃癌的发生发展过程中起一定的作用。本实验说明，nm-23基因具有抑制肿瘤细胞的活性，该基因缺失、突变或失活均会促进胃癌的发生及转移，可以作为肿瘤预后的一项指标。

3．2 VEGF-C VEGF-C通过旁分泌方式特异地作用于表达VEGF-C的血管内皮细胞，使血管内皮细胞分裂增殖，从而形成新生血管。在没有血管形成时，大多数肿瘤生长的直径很少超过1 mm。目前研究VEGF-C作用机制是选择性作用于血管内皮细胞膜上2种受体:flt-1、KDR，通过磷酸肌醇特异性磷酸酯酶c使胞内IP3浓度升高而发挥作用。VGEF-C的表达与肿瘤复发、转移呈正相关，可以作为肿瘤预后的预测因素之一。目前研究VEGF-C在术前预测甲状腺癌［6］、结肠癌的淋巴结转移方面的可能性;而胃癌方面结论仍有争论;有研究发现人胃癌细胞中VEGF-C的表达与性别、年龄、大小无关，但与肿瘤细胞浸润深度、淋巴结转移密切相关［7］。狄茂军等［8］经研究发现VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表达随临床分期的升高其表达有增强的趋势，但均未达到统计学意义的差别。Onogawa等［9］研究发现，VEGF-C表达与胃癌浆膜浸润、淋巴结转移有关。Amioka等［10］通过研究胃癌标本发现VEGF-C与浸润深度、淋巴结转移有关，VEGF-C阳性组胃癌淋巴管密度明显高于阴性组。因此，在胃癌的生长及转移过程中，VEGF-C是一项不可或缺的因素之一。

本研究表明，在有可能影响胃癌生物学行为的因素当中，VGEF-C高表达在淋巴结转移、分化程度间差异有统计学意义(P＜0．05)。亦可能与肿瘤细胞的生物学特性有关，这需要以后进一步研究。最新研究患者应用抗VEGF-C抗体能明显抑制肿瘤生长和转移，这也从另一方面提示VEGF-C在肿瘤发生转移中的作用。

1 张声，叶乐华，杜华．P53过表达和nm23低表达与胃癌淋巴结转移关系的探讨．中华肿瘤杂志，1995，17:418-420．

2 Steeg PS，Bevilacqua G，Kopper L，et al．Evidence for a novel gene association with low metastatic potential．J Natl Cancer Inst，1998，80:200．

3 Demirbas S，Sucullu I，Yildirim S，et al．Influence of the c-erbB-2，nm23，bcl-2 and p53 protein markers on colorectal cancer．Turk J Gastroenterol，2006，17:13-19．

4 Steeg PS．Perspectives on classic article:metastasis suppressor genes．J Natl Cancer Inst，2004，96:E4．

5 Wang LB，Jiang ZN，Fan MY，et al．Changes of histology and expression of MMP-2 and nm-23-H1 in primary and metastatic gastric cancer．World J Gastroenterol，2008，14:1612-1616．

6 巩有方，赵现斌，张浩，等．甲状腺乳头状癌组织中CD105、VEGF-C表达与其转移的关系．中国医师杂志，2009，11:1253-1255．

7 钱立元，魏源水，张翼，等．VEGF-C在胃癌组织中的表达与淋巴管生成及淋巴结转移的相关性研究．中国普通外科杂志，2007，16:915-918．

8 狄茂军，王卫星，兰明银，等．VEGF-C与VEGFR-3在胃癌组织中的表达及意义．临床消化病杂志，2008，20:150-152．

9 Onogawa S，Kitadai Y，Amioka T，et al．Expression of vascular endothelial growth factor-C and D(VEGF-C and VEGF-D)in early gastric carcinoma:correlation with clinicopathological parameters．Cancer Lett，2005，226:85．

10 Amioka T，Kitadai Y，Tanaka S，et al．Vascular endothelial growth factor-C expression predicts lymph node metastasis of human gastric carcinomas invading the submucosa．Eur J Cancer，2002，38:1413-1419．