猪细小病毒ELISA检测报告

夏新智 （青岛农业大学动物科技学院 山东 青岛 266109）



猪细小病毒ELISA检测报告

夏新智 （青岛农业大学动物科技学院 山东 青岛 266109）

利用猪细小病毒IgG抗体检测ELISA试剂盒对某猪场妊娠母猪的38份血清进行检测。结果表明，该样本中34份血清为阳性，3份假阳性，1份阴性，阳性率达到89.5%。

猪 细小病毒 ELISA IgG抗体

猪细小病毒(PPV)是以引起胚胎和胎儿感染及死亡而母体本身不显症状的一种猪繁殖障碍性传染病。该病仅发生在初产母猪，对经产母猪往往呈隐性带毒状态。临床主要表现为胎儿感染死亡，产出死胎、畸形胎、木乃伊胎及不孕等症状。近年来，随着我国规模化养猪产业的发展，该病毒给许多猪场造成了巨大的经济损失，这种现象也引起了国内外很多学者的关注[1]。目前，PPV的检测方法很多，病毒分离鉴定是基本的检测方法，尽管RT-PCR技术发展很快，但对大多数猪场还是很难达到这种条件进行检测。而ELISA方法因其特异性强，灵敏度高备受养殖者们的青睐。本报告利用猪细小病毒IgG抗体检测ELISA试剂盒对某猪场妊娠母猪的38份血清进行检测，阳性率达到89.5%。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 被检材料与试剂盒 38份妊娠母猪血清采自潍坊某猪场；猪细小病毒IgG抗体检测ELISA试剂盒由东莞市天辰生物科技有限公司生产(产品批号10041303)

1.1.2 主要试剂

表1 主要试剂

1.1.3 试剂配制 浓缩洗涤液应恢复至室温并使沉淀的结晶物质溶解，用去离子水1:25倍稀释。

1.2 试验方法

（1）使用前将试剂盒置室温30min，恢复常温。（2）取所需要用量包被微孔板条，设空白、阴性及阳性对照各2孔。（3）阴性、阳性对照空分别加阴性、阳性对照血清100μl(阴阳性对照血清不用稀释，直接使用)；样品孔每孔先加样品稀释液90μl，再加样品10μl(或样本1:10稀释后加100μl)；空白对照不加。混匀，置37℃温育30min。（4）扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置60s后弃去，重复洗涤5次，拍干。（5）每孔加酶标记物100μl(空白对照孔除外)。置37℃温育30min。（6）洗涤，同上。（7）每孔(包括空白对照孔)依次加显色液A、显色液B各50μl，混匀，37℃避光反应10min。（8）每孔(包括空白对照孔)加终止液50μl，混匀，置酶标仪450nm处测各孔OD值。

2 结果

2.1 被检样品的OD值

表2 38份血清ELISA检测结果

2.2 结果判定

正常情况下本试验中满足阴性对照孔OD450nm值≤0.1；阳性对照孔OD450nm值≥0.4的条件时，试验所得数据才有效。计算时，临界值=0.15+阴性对照孔均值；所有阴性、阳性对照和样品OD450nm值均须减去空白平均值后作为计算值；阴性对照孔OD450nm值大于0.10时应舍弃，如所有阴性对照孔OD450nm值都大于0.10时须重复试验；阴性对照孔低于0.05时以0.05计算。

检测标本OD450nm值≥临界值判定为本试验阳性；检测标本OD450nm值<临界值判定为本试验阴性。

本试验中空白对照平均值=(0.108+0.103)/2=0.1055，阳性对照OD450nm值=2.005-0.1055=1.8995＞0.4，阴性对照OD450nm值=0.098-0.1055=-0.0075<0.1。

所以本试验验结果有效，即所得试验数据为有效数据。根据上述方法计算可以得到12号样品为阴性；9,10,11号样品呈假阳性；其余样品均为阳性。

3 讨论与分析

用ELISA方法检测血清抗体具有快速，准确，特异性好，灵敏度高等特性，很适合现在一些猪场做常规的检测[2]。通过对送检38份血清的检测，其中34份血清中细小病毒IgG抗体呈阳性，阳性率达89.5%。经了解，该猪场曾免疫过细小病毒疫苗，由此可见免疫效果很好，免疫保护率很高。但其中有3份血清中细小病毒IgG抗体呈假阳性，可能是由于给仔猪免疫细小病毒弱毒疫苗时，仔猪体内母源抗体水平比较高，疫苗与母源抗体中和而使疫苗的免疫效果大打折扣。为保证猪场以后各种免疫都达到很好的效果，建议除了加强饲养管理，提高猪群的免疫力外，猪场中的技术人员还应定期做一些血清学检测，随时了解猪体内的各种抗体含量，这对以后制定一项适合本猪场的免疫程序会有很大的帮助。

[1] 冯春复, 罗玉均. 猪细小病毒检测技术进展研究[J]. 广东畜牧兽医科技, 2008, 33:3-4.

[2]刘俊辉, 郭福生, 龚振华等. 用ELISA检测猪细小病毒血清抗体[J].中国动物检疫, 2004, 21: 26-27.

（2011–03–04）

S858.28

A

1007-1733(2011)04-0004-02