高效毛细管电泳法用于麻保沙星的测定

李志伟,崔 哲,刘 波,赵云超

(1.河北科技大学化学与制药工程学院,河北石家庄 050018;2.河北远征药业有限公司,河北石家庄 050041)

高效毛细管电泳法用于麻保沙星的测定

李志伟1,崔 哲1,刘 波2,赵云超1

(1.河北科技大学化学与制药工程学院,河北石家庄 050018;2.河北远征药业有限公司,河北石家庄 050041)

建立了一种高效毛细管电泳法测定麻保沙星原料药含量的方法。采用未涂层石英毛细管柱,以15 mmol/L硼酸钠缓冲液 (p H值为9.2)为电泳介质,分离电压为20 kV,采用高度差进样10 s,检测波长为295 nm,麻保沙星在10～100μg/m L范围内线性良好,平均回收率为100.2%,RSD值为0.97%。

麻保沙星;原料药;高效毛细管电泳;测定

图1 麻保沙星的结构Fig.1 Structure of marbofloxacin

麻保沙星(marbofloxacin)(结构式见图1)是一种动物专用的第3代氟喹诺酮类抗菌药,具有抗菌谱广、抗菌活性强的特征,其生物利用度高,且毒性低,较安全,被列为动物专用药[1-2]。目前已有 HPLC法[3-8]、LC-M S法[9-10]测定麻保沙星的报道。毛细管电泳是一种经济、快速、高效的分离分析方法,笔者建立了专属性强、精确高效的毛细管电泳法测定麻保沙星原料药含量的方法,为麻保沙星的质量监控提供参考。

1 实验部分

1.1 仪器及试剂

毛细管电泳仪,北京彩陆科学仪器有限公司提供;CL102型紫外检测器,HW-2000型色谱工作站,石英毛细管,河北永年锐沣色谱器件公司提供。

硼酸钠,磷酸二氢钠,磷酸氢二钠,磷酸,均为分析纯;水为重蒸水。所有样品及缓冲液均经0.45μm滤膜过滤。

麻保沙星样品,批号为 20091002,20091005,20091008,实验室自制;麻保沙星对照品,批号为Y0000819,ID0035Y7,购自欧洲药典委员会。

1.2 操作步骤

1.2.1 色谱条件

毛细管柱为未涂层石英毛细管柱(75μm×70 cm),运行缓冲液为15 mmol/L的硼酸钠缓冲液 (p H值为9.2,使用前先脱气),采用高度差进样10 s,分离电压为20 kV,检测波长为295 nm,室温下操作。

1.2.2 毛细管柱的平衡

新柱使用前先用1 mol/L的NaOH于室温冲洗60 min,用重蒸水冲洗30 min,再用运行缓冲液冲洗30 min。柱使用完毕,用0.1 mo l/L的NaOH冲洗5 m in,用重蒸水冲洗5 min,再用空气吹干毛细管柱。

每次进样前依次用1 mol/L的NaOH、重蒸水、运行缓冲液分别冲洗10 min,实验过程中每2次进样后用水、0.1 mol/L的NaOH、水各冲洗2 min,用运行缓冲液冲洗5 min。

1.2.3 溶液配置

15mmol/L硼酸钠缓冲液 精密称取硼酸钠2.860 g于500 m L容量瓶中,加水溶解定容,使其浓度为15 mmol/L,过0.45μm滤膜,取滤液超声10 min,待用。

图2 标准曲线Fig.2 Standard curve

1 mg/m L的麻保沙星样品溶液 精密称取麻保沙星10 mg,放入10 m L容量瓶中,加水溶解定容,使其质量浓度为1 mg/mL。精密移取该溶液,依次加水稀释得到一系列质量浓度的溶液:100,80,60,40,20,10 μg/m L。

1.2.4 线性范围

依次将1.2.3项下配制好的一系列质量浓度的麻保沙星溶液进样,以质量浓度(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归,得到的回归方程为 Y=362.75X+159.11,r=0.999 3(n=6),标准曲线如图2所示。

结果表明,在此方法下麻保沙星在10～100μg/m L范围内线性良好。

表1 精密度Tab.1 Precision

1.2.5 精密度

在上述实验条件下,将80μg/mL的麻保沙星样品溶液重复进样6次,考察此方法的精密度,结果如表1所示。由表1可知,RSD值为1.2%,表明该方法的精密度较高。

1.2.6 回收率实验

精密称取0.64,0.80,0.92 g麻保沙星对照码,分别制成64,80,92μg/m L的溶液,测其峰面积,再加入80μg/mL样品溶液1 mL,测其峰面积,结果如表2所示。由结果计算可知,该方法的平均回收率为100.2%,RSD值为0.97%。

表2 回收率Tab.2 Recovery

2 结果与讨论

2.1 缓冲液p H值的选择

图3 麻保沙星样品在p H值为9.2时高效毛细管电泳图谱Fig.3 Chromatogram of sample of marbofloxacin as p H is 9.2

在相同质量浓度下比较了硼酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液和硼砂-磷酸盐缓冲液3种缓冲液体系,实验发现硼酸钠缓冲液对麻保沙星的分离较为理想,所以实验选择硼酸钠为毛细管电泳的缓冲液。

一般溶液p H值的大小影响毛细管表面特性及柱壁与溶质的电荷差异,改变其相互作用,进而改变分离效果。实验考察了在15 mmol/L硼酸钠溶液中加入磷酸调节p H值为8.0,8.5,9.2和用0.1 mol/L的NaOH调节p H值为10.0。结果表明,当p H值为9.2时峰型较好,出峰时间适中(见图3)。当p H值较低时电渗流较小,迁移时间较长;而p H值大于9.2时电渗流较大,出峰时间缩短但峰型较差。最终选择p H值为9.2的硼

酸钠溶液作为缓冲液。

2.2 缓冲液浓度的选择

图4 分离电压-时间关系曲线Fig.4 Separation voltage-time curve

缓冲液浓度是一个很重要的指标,它的作用比较复杂,增加浓度,使离子强度增加,因此明显地改变缓冲液的容量,减少溶质和管壁之间、被分离的粒子和粒子之间的相互作用,从而改善分离[11]。但是在大多数情况下,随着浓度的增加,电渗流降低,溶质在毛细管内的迁移速度下降,因此迁移时间延长。实验考察了不同浓度硼酸钠缓冲液对分离效果的影响。结果表明,随着缓冲液浓度的增加,迁移时间也随之增加。实验选择了10,15,25,30 mmol/L的硼酸钠溶液作为缓冲液。随着浓度的增大,麻保沙星出峰时间延长,但浓度较大时电流过大,焦耳热增大,使峰型不稳,所以选择15 mmol/L的硼酸钠溶液作为缓冲液。

2.3 分离电压的选择

在毛细管电泳中,分离电压是控制电渗流的一个重要参数,也是控制分离度、分析时间的重要因素。高电压是实现快速、高效的前提,实验选择了10,15,20,25 kV的电压进行实验。结果表明,随着电压的增大,出峰时间缩短(电压与出峰时间曲线见图4),当分离电压大于20 kV时焦耳热过大,使柱效率降低,峰型变差。所以本次实验选择20 kV的分离电压,进样时间为10 s。

2.4 样品测定

取3批麻保沙星样品,在选定的电泳条件下分别进行测定,结果如表3所示。

表3 3批样品的测定结果Tab.3 Detection of three samp les

3 结 语

选用毛细管电泳法分析麻保沙星,缓冲液为15 mmol/L的硼酸钠溶液,p H值为9.2,进样时间为10 s,分离电压为20 kV。在此条件下麻保沙星迁移时间适中,分离度较高,峰型较好,精密度较高,在10～100 μg/m L范围内线性良好,检测限较灵敏,回收率较高,在此条件下测得麻保沙星的质量分数约为99.2%。该方法柱效率较高,分析时间较快,使用样品、溶剂量较少,为麻保沙星的分析测定提供了一种良好的分析方法。

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Determination of marbofloxacin by high perfo rmance capillary zone electrophoresis

L IZhi-wei1,CU IZhe1,L IU Bo2,ZHAO Yun-chao1

(1.College of Chemical and Pharmaceutical Engineering,Hebei University of Science and Technology,Shijiazhuang Hebei 050018,China;2.Hebei Yuanzheng Pharmaceutical Company Limited,Shijiazhuang Hebei 050041,China)

A high performance capillary zone electropho resis method was established for the determination of marbofloxacin drug substance.An untreated fused-silica capillary was used w ith 15 mmol/L sodium bo rate buffer(p H 9.2)as running buffer at the detection wavelength of 295 nm,separation voltage of 20 kV and the injection volumeof samp le for 10 s.The calibration curve for marbofloxacin is linear in the concentration range of 10～100μg/m L.The average recovery is 100.2%w ith RSD of 0.97%.

marbofloxacin;drug substance;high performance capillary electropho resis;determination

R914

A

1008-1542(2011)01-0075-03

2010-09-20;

2010-11-03;责任编辑:张士莹

李志伟(1977-),男,河北唐县人,副教授,主要从事药物分析方面的研究。