胃癌组织中幽门螺杆菌L型感染及骨桥蛋白检测的意义

2011-11-02于东红魏欧玉荣王爱莲承泽农

中国组织化学与细胞化学杂志 2011年1期

关键词：革兰螺杆菌幽门

周蕾于东红魏军俞岚欧玉荣王爱莲承泽农

(蚌埠医学院第一附属医院病理科;蚌埠医学院病理学教研室;安徽省感染与免疫重点实验室,蚌埠 233003)

胃癌组织中幽门螺杆菌L型感染及骨桥蛋白检测的意义

周蕾于东红＊魏军俞岚欧玉荣王爱莲承泽农

(蚌埠医学院第一附属医院病理科;蚌埠医学院病理学教研室;安徽省感染与免疫重点实验室,蚌埠 233003)

目的通过检测胃癌组织中幽门螺杆菌L(HP-L)型感染以及OPN的表达情况,探讨 Hp-L型感染对胃癌侵袭、转移生物学行为的影响及可能机制。方法 ①应用革兰染色及免疫组化(SP)法检测120例胃癌组织中的 Hp-L型感染情况;②应用免疫组化(SP)法检测胃癌组织中的OPN的表达。分析Hp-L型感染与OPN表达的关系以及和临床病理因素之间的关系。结果 ①120例胃癌组织中有88例革兰染色检出 Hp-L型,其阳性率为73.3%(88/120);免疫组化 Hp-L型抗原表达阳性率为70.8%(85/120),革兰染色 Hp-L型检出和 Hp-L型抗原表达同时阳性的病例有82例(两者同时阳性者为 Hp-L型阳性),其阳性率为68.3%(82/120)。②胃癌组织中 Hp-L型阳性组的OPN表达阳性率分别为70.73%(58/82),高于 Hp-L型阴性组表达率,且有统计学意义(P<0.005)。经四格表资料χ2检验,胃癌组中 Hp-L型阳性与OPN阳性表达呈正相关(r=0.27,P<0.001)。③胃癌中 Hp-L型阳性与肿瘤的大小、癌细胞的血管侵袭、浸润深度及淋巴结转移具有相关性(P<0.001-P<0.05)。结论 Hp-L型感染是引起胃癌侵袭、转移的重要因素之一,促进胃癌的发展,其机制可能与胃癌细胞的OPN表达量增加有关。

幽门螺杆菌L型; 胃癌; 侵袭; 转移; 骨桥蛋白; 免疫组织化学

大量研究表明幽门螺杆菌(Hp)及其L型感染与胃癌的发生密切相关,而对于 Hp及其L型感染与胃癌的侵袭、转移的关系得研究甚少。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是近年来发现的与恶性肿瘤的浸润、转移密切相关的一种蛋白。本实验主要探讨Hp-L型感染对OPN表达的影响以及它们在胃癌侵袭、转移中的作用,从而为胃癌的诊断治疗提供新思路。

材料和方法

1.材料随机挑选我科2006-2007年确诊为胃癌的手术存档蜡块120例。所有蜡块经重新切片复查,每例连续切片数张,4μm厚进行革兰染色及免疫组化染色。免疫组化主要试剂:OPN鼠抗人单克隆浓缩型抗体(sc 21742)购自于Santa Cruz生物科技公司(工作浓度为1∶100)。Hp-L多克隆抗体,由蚌埠医学院微生物教研室帮助制作。

2.革兰染色检测胃癌组织中 Hp-L型感染情况,油镜(10×100)观察并计数,每例随机观察10-15个视野,取平均数,Hp-L型和 Hp平均数≥20为阳性,<20或未查见 Hp-L型和 Hp为阴性,Hp-L型形态多样,大小不等,有巨型体、圆球体、短棒状等,革兰阴性呈红色,阳性呈紫色;Hp则呈螺旋形、“S”形或海鸥形。

3.免疫组织化学染色检测OPN表达,阳性染色见于肿瘤细胞的胞质内,呈棕黄色颗粒;切片中细胞阳性数≤10%为(-),细胞阳性数>10%为(+)。Hp-L型抗原免疫组化的阳性标准为:在癌巢或间质中见到棕黄色颗粒为Hp-L型抗原表达阳性。

4.判断标准革兰染色 Hp-L型检出和免疫组化Hp-L型抗原表达同时阳性者定为 Hp-L型感染阳性。

5.统计学方法应用四格表资料χ2检验分析。P<0.05为有统计学意义。

结果

1.胃癌组织 Hp-L型感染阳性率、形态及在组织中的分布胃癌组织中有88例革兰染色检出L型,检出阳性率为73.33%(88/120),免疫组化 Hp-L型抗原表达阳性85例(见附图1,2),其阳性率为70.83%(85/120),革兰染色L型检出和 Hp-L型抗原表达同时阳性的病例有 82例,占 68.33%(82/120)(两者同时阳性被定为 Hp-L型感染阳性)。革兰染色切片发现 Hp-L型可散在分布于癌性腺腔、癌巢和间质中,亦可聚集于其中,同时可见 Hp-L型黏附于胃癌细胞表面或位于癌细胞胞质内(图1)。

2.胃癌组织 Hp-L型感染、OPN表达与临床病理指标之间的关系从表1可见,胃癌中 Hp-L型阳性、OPN阳性与肿瘤大小、癌细胞的血管侵犯、浸润深度及淋巴结转移相关,肿瘤直径大于3cm者多于小于3cm者;侵及浆膜者多于未侵及浆膜者;累及血管者多于未累及者;发生淋巴结转移者多于无转移者,以上各组经统计学处理,均有统计学意义(P<0.005-P<0.05)。

表1 Hp-L型感染、OPN阳性与胃癌临床病理指标之间的关系Table 1 The relationship among clinic pathological index of gastric carcinoma and Hp-L infection、OPN

3.Hp-L型感染与肿瘤组织中OPN表达之间的关系由表2可见,Hp-L型感染阳性组中OPN阳性(图3)例数高于 Hp-L型感染阴性组。两组之间的差异有统计学意义(P<0.005)。Hp-L型感染与OPN阳性表达率均有相关关系(r=0.27)。

表2 胃癌组织 Hp-L型感染与OPN表达的关系Table 2 The relationship between OPN expression and Hp-L infection

讨论

胃癌是我国十大恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率均居前三位。大量的研究显示幽门螺杆菌(Hp)感染是胃癌发病的重要原因[1,2]。随着人们对Hp研究的深入,发现 Hp在不利于其生长繁殖的环境中易发生细胞壁缺失而形成 Hp-L型。Hp-L型具有多样性,可呈球形、卵圆形、膨大的杆状或细丝状等。Hp-L型对环境抵抗力强,对抗生素等具有较强的抵抗力[3,4],是 Hp适应外界不良条件的一种自我保护形式。由于 Hp-L型细胞壁缺陷,表面的电荷改变、抗原性降低等,使 Hp-L型对宿主细胞黏附性明显强于 Hp,故容易侵入宿主细胞定植,并在其内生长繁殖,因此能逃避机体免疫攻击和药物作用,在宿主细胞内长期潜藏,造成宿主细胞的慢性损伤,一旦条件适宜,Hp-L型还可恢复成原菌(即Hp)。因此 Hp-L型比 Hp更具有潜伏性、侵袭性和难消除性。Hp-L型与多种恶性肿瘤尤其是胃癌的发生密切相关[5,6]。我们实验结果显示,Hp-L型阳性组中肿瘤直径>3cm、浸润到浆膜层、有血管侵犯及淋巴结转移者明显增多,数据经四格表资料χ2检验分析 P<0.05,Hp-L型阳性组和阴性组临床病理指标的差异有统计学意义。说明,Hp-L型感染可促进胃癌的侵袭和转移。

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是近年来发现的与恶性肿瘤的浸润、转移密切相关的一种蛋白。肿瘤的发生、发展、转移和侵袭是一个多因素多步骤的过程,而OPN所具有的一些功能正是这些肿瘤事件中所需要的。OPN的可能作用机制主要有以下几个各方面:①OPN含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列,该序列与细胞黏附密切相关,可与肿瘤细胞表面的整合素受体相结合,激活一系列细胞内信号,促进了肿瘤细胞增殖及侵袭转移[7];②与血管内皮生长因子(VEGF)、血管通透因子(VPF)协同作用,促进肿瘤生长,加快肿瘤迁移[8];③通过肿瘤细胞表面的CD44,尤其是CD44v6介导细胞黏附与迁移[9];④以自分泌形式促进自身生长,并与自身细胞表面受体结合,导致细胞移动能力增强,蛋白溶解酶分泌增加,引起基质降解[10];⑤抑制激活的巨噬细胞产生一氧化氮(NO),提高肿瘤细胞存活能力[11]。本次实验结果发现OPN表达阳性者肿瘤直径>3cm、浸润到肌层和浆膜层、有血管侵犯及淋巴结转移者明显增多,说明OPN的表达可促进胃癌的侵袭和转移。

我们对 Hp-L型感染和OPN表达的关系进行研究和分析,发现 Hp-L型阳性组中OPN表达阳性的例数较Hp-L型阴性组中OPN和表达阳性的例数明显增多,数据采用卡方检验分析 P<0.05,两组之间的差异有统计学意义。说明 Hp-L型感染可促进胃癌组织中OPN的表达。

综上所述,Hp-L型感染可导致胃癌侵袭和转移能力增强,其机制之一可能是增加胃癌细胞侵袭和转移相关蛋白OPN的表达。

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图版说明

图1 胃癌癌巢内的 Hp-L型,箭头处为 Hp-L型位于癌细胞胞质内(革兰染色 ×1000)

图2 胃癌中 Hp-L型抗原表达阳性(SP法×400)

图3 胃癌细胞OPN蛋白表达阳性(SP法×400)

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 Hp-L form of stomach carcinoma. Gram’s staining ×1000

Fig.2 Hp-L form positive picture of stomach carcinoma. SP method×400

Fig.3 The expression of OPN in the gasric carcinoma cells.SP method×400

Effect of helicobacter pylori L-form infection and expression of osteopontin on gastric carcinoma and its significance

Zhou lei,Yu Donghong＊,Wei Jun,Yu Lan,Ou Yurong,Wang Ailian,Cheng Zenong

(The f irst A f f iliated Hospital of Bengbu Medical College,Department ofPathology,Bengbu Medical College,A nhui Key L aboratory of Inf ection and Immunology,Bengbu233003China)

Objective To detect the helicobacter pylori L-form(Hp-L)infection and the expression of Osteopontin(OPN)in gastric carcinoma tissues,and to discuss the probable machanism between Hp-L infection and the progression of gastric carcinoma.Methods Gram’s staining and immunohistochemical staining(SP method)were used to detect Hp-L in 120 gastric carcinoma cases.Immunohistochemical staining was also used to evaluate the expression of OPN.Results Hp-L was found in 88 and 85 cases of 120 gastric carcinoma tissues by Gram’s and immunohistochemical staining,respectively. 82(68.3%)cases were Hp-L positive by both Gram’s and immunohistochemical staining. In the Hp-L positive group,58(58/82,70.73%)cases were OPN positive,while in the Hp-L negative group,16 cases were OPN positive,which had relationships to the size,invasion and metastasis of the tumor.Conclusion The infection of Hp-L plays an important role in the progression of gastric carcinoma.The increase in the intracellular levels of OPN may be one of the mechanisms.

Helicobacter pylori L-form; Gastric carcinoma; Invasion; Metastasis; OPN;Immunohistochemistry