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HPLC法测定不同产地芍药中丹皮酚的含量

2011-10-20湘潭职业技术学院李俊雅

河南科技 2011年8期
关键词:丹皮芍药回收率

湘潭职业技术学院 李俊雅 李 君

河南羚锐制药股份有限公司 袁德先

HPLC法测定不同产地芍药中丹皮酚的含量

湘潭职业技术学院 李俊雅 李 君

河南羚锐制药股份有限公司 袁德先

芍药药材来源于毛茛科植物芍药(Paeonia lacilfora Pall)的干燥根,收载于《中国药典》2010年版1部。中医临床用于治疗头痛眩晕,肋痛、腹痛,四肢挛痛,血虚萎黄,月经不调,自汗、盗汗。现代研究证明丹皮酚是芍药药材主要活性成分之一。本文,笔者以丹皮酚含量变化为依据,用高效液相法测定不同产地芍药中丹皮酚的含量。

一、仪器与样品

仪器为岛津LC-20AT高效液相色谱仪,SPD-20A型紫外检测器,CTO-10A S vp型柱温箱,CBM-102型工作站。样品为丹皮酚对照品(中国药品生物制品检定所,批号0708-9704),芍药样品于2010年11月—2011年1月分别采于湖北十堰、安徽亳州、四川雅安、河南南阳、湖南怀化等地。甲醇、异丙醇、乙腈为色谱纯,所用其他试剂均为分析纯。

二、方法与结果

1.色谱条件与系统适用性试验。色谱柱SHMADZU shim-pack-vp-ODS 150mm×4.6mm(column size)serial NO 8042464,柱温:室温。流动相:甲醇-水(60∶40)。流速:1.0m l·min-1。检测波长:274nm,理论塔板数按丹皮酚峰计算应不低于5 000。在此条件下,丹皮酚与相邻成分达到基线分离,与其他相邻色谱峰分离度大于1.5,符合分离要求。(图1,图2)

2.溶液的制备。

(1)对照品溶液制备。取丹皮酚对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1.0mL含0.02mg(实配为0.032mg/mL)的溶液,即得丹皮酚对照品溶液。

(2)样品溶液制备。取芍药药材研细,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇,密塞,超声处理(功率250W,频率33kHz)45min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

3.线性关系考察。分别精密吸取对照品溶液(0.032 0mg/ mL)5.0uL,7.0uL,10.0uL,12.0uL,15.0uL依次进入色谱仪,记录色谱图,以峰面积为纵坐标(Y),含量为横坐标(X)得回归方程为:Y=7×106X+8384.5,r=0.9999,表明丹皮酚在0.16~0.48μg范围内具有良好的线性关系。

4.精密度实验。精密吸取同一丹皮酚对照溶液(0.032 0mg/ mL)10μL,按上述色谱条件下,连续进样6次,以峰面积计算RSD值,得对照品溶液的RSD为0.55%,表明精密度良好。

5.稳定性实验。取样品制成供试品溶液,精密量取10μL,分别在0,1,2,4,8,12h进样,记录色谱峰面积,计算RSD值,测得样品的RSD值为0.97%,表明样品的稳定性良好。

6.重复性实验。同一批样品精密称取5份,分别按样品测定方法测定,进行HPLC分析,计算RSD值,测得供试品RSD值为1.24%,表明样品的重现性良好。

7.加样回收率实验。精密称取芍药干燥根粗粉5份,加入一定量的丹皮酚对照品,制备样品液,进行HPLC分析,计算加样回收率,测得供试品RSD值为1.35%,表明样品的加样回收率良好。

8.样品测定。以HPLC法分别测定采收于湖北十堰、安徽亳州、四川雅安、河南南阳、湖南怀化等地芍药中丹皮酚的含量。结果见表1。

表 1 不同产地丹皮酚含量测定结果

三、讨论

1.经紫外线扫描,丹皮酚在274nm波长处有最大吸收,在此波长处,丹皮酚吸收灵敏,基线平稳,且阴性对照无干扰,故本实验选定274nm为测定波长。

2.本实验曾选用乙腈-水-冰醋酸(33∶65∶2)、甲醇-醋酸-水(60∶2∶38)、甲醇-水(80∶20)等作流动相,发现分离效果差,丹皮酚峰变宽。经实验探索,反复调整甲醇-水的比例后,发现采用甲醇一水(70∶30)为流动相,丹皮酚出峰时间约为4.5min,与相邻成分达到基线分离,出峰时间、峰形、柱效均较为满意,且阴性对照无干扰。

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