紫甘薯叶总贡酮对四氯化碳致小鼠慢性肝损作的保护作

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

FPSPL 乙醇提取，AB－8大孔吸附树脂纯化，总黄酮含量72.3%;联苯双酯滴丸北京协和药厂，批号09040104;ALT、AST、TP、ALB、SOD、MDA 试剂盒

南京建成生物工程研究所，批号均为20100310;昆明种雄性小鼠 SPF级，体重(20±2)g，解放军军事医学科学院实验动物中心提供，许可证号:SCXK－(军)2007－004;其它试剂均为国产分析纯。

Multiskan Spectrum酶标仪、991#4超低温冰箱美国Thermo公司;SB25－12DTDN型超声波清洗器、超声波细胞粉碎机宁波新芝生物科技股份有限公司;电热恒温水浴锅天津欧诺仪器仪表有限公司;PB－10酸度计德国赛多利斯股份公司。

1.2 实验方法

1.2.1 药物配制 a.用蒸馏水将FPSPL配制成5、10、20mg/mL 浓度的溶液［5］。b.用蒸馏水将联苯双酯滴丸配制成20mg/mL浓度的悬浮液。c.用橄榄油将CCl4配制成 7%(V/V)的 CCl4－橄榄油溶液［6］。

1.2.2 动物分组与建模小鼠适应1周后，按体重随机分为空白组、模型组、阳性组(联苯双酯组)、FPSPL高、中、低剂量组，每组12只［7］。采用腹腔CCl4注射建立小鼠慢性肝损伤模型。空白组小鼠腹腔注射橄榄油，其余各组均腹腔注射7%的CCl4－橄榄油溶液，10mL/kg·bw，每周 2 次，持续 6 周［8］。建模期间不限饮食量，自由饮水。

1.2.3 药物处理建模第2周开始灌胃［9］。空白组、模型组灌胃蒸馏水，阳性组灌胃联苯双酯悬浮液，FPSPL高、中、低剂量组分别灌胃5、10、20mg/mL浓度的FPSPL溶液。10mL/kg·bw，1d 1次，持续5周。

1.2.4 指标检测末次给药后，小鼠禁食不禁水24h，摘眼球取血，离心取血清，按照试剂盒说明书采用赖氏法测定ALT和AST活性、采用溴甲酚绿比色法测定ALB含量、采用考马斯亮兰法测定TP含量;取肝脏称重，计算肝脏指数LI(每10g体重的肝脏克数)，制备10%的肝组织匀浆，按照试剂盒说明书采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性、采用硫代巴比妥酸法测定MDA含量。

2 结果与分析

2.1 FPSPL对小鼠LI的影响

如表1所示，模型组小鼠LI极显著高于空白组(P＜0.01)。与模型组比较，阳性组与FPSPL各剂量组LI均极显著降低，说明FPSPL对慢性肝损伤小鼠的LI升高有明显的抑制作用。

表1FPSPL对小鼠LI的影响(±s，n=8)

注:与空白组比较:**P＜0.01;与模型组比较:##P＜0.01;表2同。

组别 LI(g/10g) 组别 LI(g/10g)空白组 4.12±0.58 高剂量组4.67±0.48##模型组 5.90±0.19** 中剂量组 5.07±0.29##阳性组 4.94±0.90## 低剂量组5.12±0.47##

2.2 FPSPL对小鼠血清ALT和AST活性的影响

肝脏中的细胞色素 P450可将 CCl4激活为·CCl3和·Cl，这些自由基经过一系列复杂的反应，可以破坏肝脏细胞膜结构，使其通透性增加，导致ALT、AST等转氨酶渗入血液，使血清中转氨酶的活性显著升高［10］。

如表2所示，模型组小鼠血清中ALT与AST活性显著高于空白组(P＜0.01)，说明小鼠慢性肝损伤模型建立成功。与模型组比较，阳性组与FPSPL各剂量组均可显著抑制CCl4导致的血清ALT、AST活性升高，其中高、中剂量组对ALT活性的降低效果更显著。说明FPSPL能保护肝脏细胞膜的稳定性，抑制CCl4导致的小鼠血清中ALT、AST活性升高。

表2FPSPL对小鼠血清ALT和AST活性的影响(±s，n=8)

组别 ALT(U/L) AST(U/L)空白组19.44±11.56 37.76±24.30模型组 528.61±60.90** 245.97±16.68**阳性组 203.24±66.47## 178.95±40.17##高剂量组 397.57±31.11## 135.98±41.38##中剂量组 423.69±16.55## 165.19±26.89##低剂量组455.84±12.71## 199.17±18.50##

2.3 FPSPL对小鼠血清ALB和TP含量的影响

ALB几乎全部由肝细胞合成，肝细胞受损，ALB含量必然降低，一般ALB降低程度与肝细胞受损程度成正比。因此，ALB含量变化可以作为了解肝脏功能情况的一个参考指标。

如表3所示，模型组小鼠ALB和TP含量极显著低于空白组(P＜0.01)。与模型组比较，阳性组与FPSPL高、中剂量组均可显著抑制CCl4导致的血清ALB含量降低，且FPSPL高剂量组对ALB含量的升高效果最显著;阳性组与FPSPL各剂量组均可显著抑制CCl4导致的血清TP含量降低。说明FPSPL对CCl4导致的小鼠血清ALB、TP含量降低有明显的抑制作用。

表3 FPSPL对小鼠血清ALB和TP含量的影响(±s，n=8)

注:与空白组比较:**P＜0.01;与模型组比较:#P＜0.05，##P＜0.01;表4同。

组别 ALB(mg/mL) TP(mg/mL)空白组52.83±1.06 0.71±0.03模型组 45.47±2.26** 0.64±0.05**阳性组 50.27±1.61## 0.70±0.03#高剂量组 50.34±3.83## 0.70±0.03#中剂量组 48.10±1.96# 0.69±0.05#低剂量组46.21±1.88 0.69±0.05#

2.4 FPSPL对小鼠肝匀浆SOD活性和MDA含量的影响

SOD是氧自由基清除剂，MDA是脂质过氧化反应的最终产物［11］。肝细胞受损时，SOD活性降低，而MDA含量升高。两者的变化情况可以反映肝脏细胞损伤程度和脂质过氧化反应的强弱程度。

如表4所示，模型组小鼠SOD活性极显著低于空白组(P＜0.01)，MDA极显著高于空白组(P＜0.01)。与模型组比较，阳性组与FPSPL各剂量组SOD显著升高，MDA显著降低，且FPSPL高剂量组对MDA含量的降低效果最显著。说明FPSPL有显著的清除自由基、抗脂质过氧化的作用。

表4 FPSPL对小鼠肝匀浆SOD活性和MDA含量的影响(±s，n=8)

组别 SOD(U/mgprot) MDA(nmol/g)空白组132.26±18.30 0.66±0.15模型组 60.20±10.69** 1.86±0.22**阳性组 82.85±10.53## 1.00±0.19##高剂量组 96.49±14.75## 0.66±0.13##中剂量组 76.52±6.53# 1.45±0.30##低剂量组75.70±9.26# 1.56±0.18#

3 结论

与慢性肝损伤小鼠比较，FPSPL可以显著降低LI，降低血清中ALT和AST活性，升高ALB和TP含量，升高肝组织中SOD活性，降低MDA含量。表明FPSPL对CCl4导致的小鼠慢性肝损伤有一定的保护作用，作用机理可能是通过提高氧自由基清除能力，抑制脂质过氧化反应，维持肝脏细胞膜的结构完整，从而起到护肝的作用。

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Protective effect of total flavonoids of purple sweet potato leaves on carbon tetrachloride－induced chronic liver injury in mice

LV Xiao－ling，TAO Dong－chuan*，MA Tian－jiao，LIU Ying－wang，WEN Juan，ZHANG Xin－wei
(College of Food Engineering and Biotechnology，Tianjin University of Science and Technology，Tianjin 300457，China)

The protective effect of total flavonoids of purple sweet potato leaves(FPSPL)on carbon tetrachlorideinduced chronic liver injury in mice was studied.The chronic liver injury model was induced by administration of 7%carbon tetrachloride and mice were treated of FPSPL at 50，100 or 200mg/kg to examine the changes of liver index(LI)，alanine aminotrasferase(ALT)，aspartate aminotrasferase(AST)，albumin(ALB)，total protein(TP)in serum，superoxide dismutase(SOD)and malondialdehyde(MDA)in liver homogenate.The results showed that FPSPL significantly decreased LI，the activity of serum ALT and AST，the level of MDA in liver homogenate.It also increased the concentration of serum ALB and TP，the activity of SOD in liver homogenate.FPSPL had protective effect on mice with chronic liver injury induced by carbon tetrachloride.

FPSPL;CCl4;chronic liver injury

TS201.4

1002－0306(2011)06－0371－03

2010－07－20 *通讯联系人

吕晓玲(1960－)，女，硕士，教授，博士生导师，主要从事食品添加剂与营养调控方面的研究。