野生参中多糖含量的测定及其抗氧化活性的研究

郭豫梅

(陕西理工学院化学与环境科学学院，陕西汉中723001)

野生参中多糖含量的测定及其抗氧化活性的研究

郭豫梅

(陕西理工学院化学与环境科学学院，陕西汉中723001)

测定石参中多糖含量，并对其抗氧化活性进行了研究。采用水提醇沉法从石参中提取多糖，采用分光光度计法，测得石参中多糖含量为14.93%。此外，还对石参中多糖的抗氧化活性进行了初步探究，石参中多糖对自由基及亚硝酸盐的清除作用随着多糖浓度的增大而表现出明显的量效关系。

石参，多糖，抗氧化活性

石参又名石蒜苔、崖参，属百合科独尾草属的独尾草［Eremurus chinensis］，为多年生草本植物，其根肉质，柔软，黄色或深褐色，为其食用部分，其干制加工产品呈金黄色，味甘甜，是陕西南部山区稀见的一种山野菜。然而这一宝贵资源并未被充分地开发利用，只是被当地的居民采食或简单的加工。石参中含有丰富的蛋白质和纤维素等，我国有4种，一种产自西南，三种产自新疆。其在陕西最近几年才发现，据调查其在陕西的分布仅见于略阳县境内西淮坝乡的西淮坝村、张家山等几个狭窄地带，目前野生独尾草已非常少见。据陕西省资源生物重点实验室初步测定，其含有丰富的蛋白质和纤维素，蛋白质几乎接近于大米中的含量［1－2］。但对于石参化学成分的研究目前少见报道，目前这一宝贵资源并未被充分地开发利用，没有被作为一种特色产品走向国内外市场，只是被当地的居民采食或简单的加工。本文以野生石参为材料，对其所含多糖进行了测定，然后对石参多糖的体外抗氧化活性进行了测定，并与维生素C进行了对比，为更好地开发利用石参资源提供一定的理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

石参 市售，产地汉中略阳;乙醇、蒽酮、硫酸、葡萄糖、邻苯三酚、抗坏血酸、三羟基氨基甲烷(Tris)、盐酸、邻二氮菲、硫酸亚铁、对氨基苯磺酸溶液、盐酸萘乙二胺溶液 均为分析纯。

TG328电子天平 上海天平仪器厂;722型可见分光光度计 上海精密科学仪器有限公司;101型电热鼓风干燥箱 北京科伟永兴仪器有限公司;恒温水浴锅，旋转蒸发仪，真空泵。

1.2 实验方法

精确称取8.2g预处理过的石参粉末，加入蒸馏水，煮沸2h，过滤，滤液80℃下减压浓缩至一定体积，然后加入四倍体积的95%乙醇，4℃静置过夜，离心20min，收集沉淀。然后再用少量蒸馏水溶解，离心，除去不溶物，上清液干燥后称重。蒽酮－硫酸法［3］测多糖的含量。

1.3 标准曲线的绘制

标准曲线的制作:取0.1g/L葡萄糖溶液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL，用蒸馏水补到2.00mL，然后分别加入4.00mL蒽酮试剂，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发，自水浴重新计算起，准确煮沸10min取出，用蒸馏水冷却，室温放置10min左右，于620nm下比色。以蒸馏水为空白，以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线(如图1所示)。

1.4 抗氧化活性的测定

1.4.1 对超氧自由基(O－2·)的清除作用 采用邻苯三酚自氧化法［4－6］。取0.05mol·L－1，pH8.2的Tris－HCl缓冲液4.5mL加入盛有4.2mL蒸馏水的试管中，置于25℃水浴中预热20min。分别加入不同的试样水提物溶液0.1mL，立即加入在25℃水浴中预热的3mmol·L－1邻苯三酚(由10mmol·L－1HCl配制)0.3mL，混匀后25℃水浴中准确反应4min，立即加入8mol·L－1HCl 2滴终止反应，在420nm处测定吸光度(样品管以同浓度的试样水提物溶液做参比)。模型组以0.1mL蒸馏水代替样品试液(以蒸馏水做参比)。用抗坏血酸(VC)做对照，临用前以浓度为50mmol·L－1的Tris－HCl缓冲液(pH8.0)配制。超氧自由基(O－2·)按以下公式计算清除率。

1.4.2 对羟基自由基(·OH)的清除作用 用邻二氮菲－Fe2+氧化法［7－8］测定 Fe2+/H2O2体系中产生的羟基自由基。依次加入邻二氮菲1.5mL，pH7.4的PBS溶液3.8mL及试样总黄酮溶液1mL(损伤管及未损伤管不加试样多糖溶液)混匀，再加 FeSO4溶液1.5mL，立即混匀，最后加 H2O21mL(未损伤管不加)。最终浓度邻二氮菲 0.75mmol·L－1、FeSO40.75mmol·L－1、H2O20.01%，总体积9mL(不足用蒸馏水补足)。各管置于37℃恒温水浴箱保温60min，分别测定各管A536值(样品管以同浓度的试样水提物溶液做参比，损伤管及未损伤管以蒸馏水做参比)。用抗坏血酸(VC)做对照，临用前以蒸馏水配制。羟基自由基按以下公式计算清除率。

1.4.3 对亚硝酸盐的清除作用［9］取已知浓度的提取液2mL于25mL容量瓶，加入5μg/mL的NaNO2标准溶液3mL，加入柠檬酸－磷酸缓冲溶液(pH3.0)5mL，37℃下反应15min，立即加入2mL 0.4%对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3～5min后，加入1mL 0.2%盐酸萘乙二胺溶液，加蒸馏水至刻度，混匀，静置15min，以5mL提取液为空白，在544nm处测吸光度。用抗坏血酸(VC)做对照。按下式计算的清除率。式中的溶液吸光度;A－样品的吸光度。

2 结果与分析

2.1 石参多糖含量的测定

绘制葡萄糖标准曲线，由图1得标准曲线的回归方程:Y=37.357X+0.0348(R=0.9975)，将测定的吸光度值代入回归方程，得到石参中粗多糖浓度，再计算求得样品中多糖的含量为14.93%。

图1 葡萄糖标准曲线

2.2 抗氧化性的研究

图2 石参多糖对超氧自由基(·)的清除率

图3 VC对超氧自由基(·)的清除率

2.2.2 对羟基自由基(·OH)的清除作用 根据方法1.4.2，配制五种不同浓度的样品溶液，测定其吸光度，并计算其对·OH的清除率，见图4。以抗坏血酸为对照，同法测定其吸光度，并计算其对·OH的清除率，见图5。

图4 石参多糖对羟基自由基(·OH)的清除率

2.2.3 对亚硝酸盐(NO2－)清除作用 根据方法

1.4.3 ，配制五种不同浓度的样品溶液，测定其吸光度，并计算其对NO的清除率，见图6。以抗坏血酸为对照，同法测定其吸光度，并计算其对NO的清除率，见图7。

图5 VC对羟基自由基(·OH)的清除率

图6 石参多糖对亚硝酸盐(NO－2)清除率

图7 VC对亚硝酸盐(NO－2)清除率

测得石参中多糖含量为14.93%;石参多糖浓度为3.760g/L时，对超氧自由基(O·)的清除率为29.87%;石参多糖浓度为0.3040g/L时，对羟基自由基(·OH)的清除率为39.61%;石参多糖浓度为0.1640g/L时，亚硝酸盐的清除率为37.56%。

3 结论

通过对石参多糖清除自由基能力的测定，确定其具有较强的清除超氧自由基(O·)、羟基自由基(·OH)及亚硝酸盐(NO)的能力，可将其作为抗氧化剂应用到食品和药品行业中，这也将为进一步地促进天然抗氧化剂的研究与开发提供一定的理论依据。

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［3］王黎明，夏文水.蒽酮－硫酸法测定茶多糖含量的研究［J］.食品科学，2005，26(7):185－188.

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Determination of polysaccharide in Eremurus chinensis and its antioxidition activity

GUO Yu－mei
(School of Chemistry＆Environmental Sciences，Shaanxi University of Technology，Hanzhong 723001，China)

The aim was to determine polysaccharide in Eremurus chinens and study its antioxidant.The polysaccharide in Eremurus chinens were obtained by extraction，ethanol precipitation，removing protein by the ultrasonic method.It was demonstrated that the content of polysaccharide was 14.93%by spectrophotometer.The antioxidant activities of polysaccharide were studied.With the increasing of polysaccharide，the removal effect on free radical and nitrite became increasingly obvious.

Eremurus chinensis;polysaccharide;antioxidant activity

TS201.1

A

1002－0306(2011)06－0093－03

2010－04－07

郭豫梅(1975－)，女，研究生，讲师，主要从事综合化学实验教学和研究工作。

陕西理工学院专项科研基金项目(SLGQD0711)。