补金片质量标准研究

姜泽，李东飞，姚维民，王琦，孙玉滨*

(1.吉林农业大学，吉林 长春 130118；2.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

补金片质量标准研究

姜泽1，李东飞2，姚维民2，王琦1，孙玉滨2*

(1.吉林农业大学，吉林 长春 130118；2.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

目的：完善补金片的质量标准。方法：采用TLC对红参、陈皮、当归、桔梗进行了鉴别；采用HPLC测定了红参中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re含量。结果：样品TLC色谱中，红参、陈皮、当归、桔梗的鉴别斑点清晰，重现性好。对红参中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re进行了含量测定，结果人参皂苷Rg1在0.18～2.01 μg、人参皂苷Re在0.20～2.20 μg，呈良好线性关系(r=0.999 9)，人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的平均回收率分别为98.5 %(RSD=1.3 %)和100.1 %(RSD=1.6 %)。结论：本方法结果准确、操作简便，为该制剂的质量控制和标准提升提供了科学依据。

补金片；TLC;HPLC;质量标准

补金片是由红参、陈皮、桔梗等18味中药组成的复方制剂,具有补肾益肺，健脾化痰，止咳平喘的功效。用于治疗肺结核，慢性支气管炎，肺气肿，肺心病等疾病。原标准只收载了片剂项下的检查项目，为有效地控制其内在质量,本文采用HPLC对处方中红参中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re进行了含量测定,并对红参、陈皮、桔梗、蛤蚧、当归进行了薄层色谱鉴别。所建立的方法简便可行,重现性好,对控制和评价补金片产品质量提供了依据，具有实际应用价值。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津-2010A、Agilent1100 series高效液相色谱仪。

1.2 试药

人参皂苷Re、Rg1、Rb1对照品(批号分别为：110754-200421，110734-200726，110704-20042，中国药品生物制品检定所，供含量测定用)。红参对照药材(批号：121045-200503)、陈皮对照药材(批号：120969-200406)、当归对照药材(批号：120927-200411)、桔梗对照药材(批号：121028-200304)均购自中国药品生物制品检定所。

薄层板(天津思利达科技有限公司，批号：090608，规格：10 cm×10 cm)，薄层硅胶G板(青岛海洋化工厂，批号：20090304，规格：10 cm×10 cm)。

乙腈为色谱纯；水为经MILLIPOR纯水器所得纯化水；其他试剂均为分析纯。

补金片样品(集安益盛制药业集团有限公司，批号：091107，20100227，20100321；吉林茂祥药业有限公司，批号：20090401；通化华晨药业有限公司，批号：0900201，20100102，20100103；通化百信药业有限公司，批号：20100103，20100104；吉林天泰药业有限公司，批号：090201)。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 红参的鉴别 取本品10 g，研细，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL溶解；置分液漏斗中，用三氯甲烷提取2次，每次20 mL，弃去三氯甲烷液；水溶液用水饱和的正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨试液轻轻摇洗2次，每次20 mL,弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 mL,弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品，加甲醇制成1 mL各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。再取红参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验[1]，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10 %硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显一个相同颜色的斑点，见图1。置紫外光灯(365 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点，见图2。

1.人参皂苷Rb1，2.人参皂苷Re，3.人参皂苷Rg1，4.红参对照药材，5.供试品(通化百信药业有限公司，批号：100104)6.供试品(通化华辰药业股份有限公司，批号：091201)7.供试品(通化百信药业有限公司，批号：091107) 8.阴性样品图1 红参薄层色谱图

1.人参皂苷Rb1，2.人参皂苷Re，3.人参皂苷Rg1，4.红参对照药材，5.供试品(通化百信药业有限公司，批号：100104)6.供试品(通化华辰药业股份有限公司，批号：091201)7.供试品(通化百信药业有限公司，批号：091107) 8.阴性样品图2 红参薄层色谱图(紫外365 nm)

2.1.2 陈皮的定性鉴别[2]取本品5 g，研细，加乙醇40 mL，置水浴上加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，置分液漏斗中，用乙醚提取2次(15 mL,10 mL)，弃去乙醚液，再用水饱和正丁醇提取4次(15,10,10,10 mL)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取橙皮苷对照品，加甲醇制成1 mL各含1 mg溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇(5∶1∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 %三氯化铝乙醇溶液，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，见图3。

1.橙皮苷，2.陈皮对照药材，3.供试品(通化华辰药业股份有限公司，批号：091201);4.供试品(通化百信药业有限公司，批号：091107)5.供试品(吉林省集安益盛药业股份有限公司，批号：100227)6.阴性样品图3 陈皮薄层色谱图(紫外365 nm)

2.1.3 当归的定性鉴别 取本品10 g，研细，加乙醚40 mL，冷浸1 h，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液10 μL，对照药材溶液5 μL,分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-醋酸乙酯(85∶15)为展开剂，展开，展距8 cm，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，见图4。

1.供试品(通化华辰药业股份有限公司，批号：100102)2.供试品(吉林省集安益盛药业股份有限公司，批号：091107)3.供试品(通化华辰药业股份有限公司，批号：091201)4.阴性样品 5.当归对照药材图4 当归薄层色谱图(紫外365 nm)

2.1.4 桔梗的定性鉴别 取本品5 g，研细，加乙醇30 mL，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取桔梗对照药材1 g，加乙醇20 mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述2种溶液各5 μL，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %硫酸乙醇溶液，在105 ℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图5。

1.桔梗对照药材 2.供试品(吉林省集安益盛药业股份有限公司，批号：100321)3.供试品(通化百信药业有限公司，批号：100104)4.供试品(通化华辰药业股份有限公司，批号：091201)5.供试品(通化百信药业有限公司，批号：091107) 6.阴性样品图5 桔梗薄层色谱图

2.2 红参的含量测定研究

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取在105 ℃干燥12 h的人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品30片，去包衣，精密称定，研细，精取3.0 g，置于索氏提取器中，加石油醚(30～60 ℃)50 mL，加热回流2 h，弃去石油醚，挥干药渣溶剂，加甲醇45 mL，回流提取至无色，定量转移至50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，备用。精密吸取25 mL，水浴蒸干，残渣加水15 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按照处方量制得不含红参的阴性对照溶液，依上述方法测定。

2.2.4 系统适用性试验 色谱柱：Alltima扩展C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱,以乙腈-水(19∶81)为流动相，流速0.8 mL·min-1进行洗脱，检测波长为203 nm，理论板数不低于6 000。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性样品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，色谱图见图6。

A. 红参对照品，B. 补金片样品，C.缺红参阴性对照品图6 补金片、红参对照品、阴性对照品HPLC图

2.2.5 标准曲线制备 精密称取人参皂苷Re、Rg1混合对照品适量，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg10.182 8 mg、Re 0.206 6 mg的溶液，分别精密吸取1，3，5，7，9，11 μL测定，以对照品溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，人参皂苷Rg1Y=499 520.55X+15 768.69，r=0.999 7；人参皂苷ReY=417 758.68X+11 893.68,r=0.999 7。结果表明人参皂苷Rg1在0.18～2.01 μg、人参皂苷Re在0.20～2.20 μg，呈良好线性关系，符合外标法定量测定的要求。

2.2.6 精密度试验 精密吸取供试品溶液5 μL(集安益盛药业样品，批号：20100227)，注入液相色谱仪，重复进样6次，测定其色谱峰面积，人参皂苷Rg1的RSD=0.35 %，人参皂苷Re的RSD=1.07 %，结果表明所用仪器具良好的精密性。

2.2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液5 μL(集安益盛药业样品，批号：20100227)，按上述色谱条件，在1，2，3，4，5，6 h进行测定，记录其峰面积，人参皂苷 Rg1的RSD=0.28 %，人参皂苷Re的RSD=2.13 %，结果表明6 h内供试品溶液中人参皂苷Rg1、Re的含量基本稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批号样品(集安益盛药业样品，批号：20100227)，按上述色谱条件测定6次，人参皂苷Rg1平均含量为0.444 mg/片，RSD=1.51 %；人参皂苷Re平均含量为0.079 mg/片，RSD=1.79 %，结果表明本法具有良好的重复性。

2.2.9 回收率试验 精密称取已知含量的供试品(集安益盛药业样品，批号：20100227，含量：人参皂苷Rg11.605 4 mg·g-1、人参皂苷Re 0.285 5 mg·g-1)6份，每份1.5 g，分别精密加入对照品溶液人参皂苷Rg1(0.590 1 mg·mL-1)2 mL、人参皂苷Re(0.556 2 mg·mL-1)1 mL，挥干溶剂，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1、2。

表1 人参皂苷Rg1回收率试验

注：人参皂苷Rg1对照品加入量均为1.180 2 mg

表2 人参皂苷Re回收率试验

注：人参皂苷Re对照品加入量均为0.556 2 mg

2.2.10 样品含量测定结果 取不同生产批号的样品，分别依上述色谱条件测定10批样品，结果见表3。

表3 10批补金片样品中人参皂苷Rg1、Re总和测定结果 /mg/片

注：n=2

3 讨论

3.1 薄层鉴别

红参的薄层色谱鉴别，对于展开剂的选择，通过预实验，比较三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10 ℃以下放置的下层溶液和以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置的下层溶液，结果显示以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置的下层溶液为展开剂，效果较好。桔梗的薄层色谱鉴别，对于展开剂的选择，比较三氯甲烷-醋酸乙酯(2∶1)与三氯甲烷-醋酸乙酯(3∶1)结果显示，以三氯甲烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂，效果较好。

3.2 红参的含量测定

进行了提取方法的考察，比较加热回流至无色、超声处理1 h，正丁萃取法、回流3 h，正丁萃取法。结果表明，加热回流至无色的方法提取效果最好。对色谱柱进行了比较，Alltima HC C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱和Venuswl ASB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱能在60 min内将人参皂苷Re、Rg1混合对照品溶液完全分离，Diamansil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱超过100 min，说明其对色谱柱有一定的选择性。

[1] 苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2007：26.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社,2010：213.

TheStudyonQualityStandardofBujinTablet

JIANG Ze1,LI Dong-fei2, YAO Wei-min2, WANG Qi1, SUN Yu-bin2

(1.CollegeofChineseMedicinalMaterials,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China;2.JilinInstituteforFood&DrugControl,Changchun130033,China)

Objective: To perfect the quality standard of Bujin tablets.Methods: Identified red ginseng, dried tangerine peel, angelica, and balloonflower by TLC. The content of ginsenoside Rg1and ginsenoside Re in red ginseng were determined by HPLC.Results: In TLC chromatography, the spots of red ginseng, dried tangerine peel, angelica, and balloonflower were clear and have a good reproducibility. In the content determination experiments, the results showed that it has a good linear relationship when ginsenoside Rg1was in 0.18～2.01 μg and ginsenoside Re was 0.20～2.20 μg (r=0.999 9). The average recovery of ginsenoside Rg1is 98.5 %(RSD=1.3 %). The average recovery of ginsenoside Re is 100.1 %(RSD=1.6 %).Conclusion: The results of this method are accurate and convenient which provide a scientific basis for the quality control and standards enhancing of Bujin tablets.

Bujin tablet; TLC; HPLC; Quality standards

*孙玉滨，Tel：(0431)87913255,E-mail：syb5151@163.com

2010-09-13)