不同种源薏苡仁中甘油三油酸酯含量比较△

任江剑，俞旭平，张斌，王志安

(1.浙江省中药研究所，浙江 杭州 310023；2.正大青春宝药业有限公司，浙江 杭州 310023)

不同种源薏苡仁中甘油三油酸酯含量比较△

任江剑1*，俞旭平1，张斌2，王志安1

(1.浙江省中药研究所，浙江 杭州 310023；2.正大青春宝药业有限公司，浙江 杭州 310023)

目的：比较21个不同种源薏苡仁中甘油三油酸酯含量。方法：采用HPLC-ELSD法，色谱柱为Discovery C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-二氯甲烷(66∶34)，流速为0.7 mL·min-1，柱温为30 ℃；采用蒸发光散射检测器，漂移管温度为45 ℃；氮气流速为1.5 L·min-1。结果：21个不同种源的薏苡仁中甘油三油酸酯含量都符合《中国药典》标准，含量最高是种子来自福建三明宁化的粳性薏苡仁，为0.793 %；含量最低是种子来自浙江缙云的薏苡仁，为0.561 %。结论：21个不同种源的薏苡仁中甘油三油酸酯含量有一些差异，种子来自同一地区的薏苡仁中甘油三油酸酯含量也有一些差异。

薏苡仁；甘油三油酸酯；种源；HPLC-ELSD法

薏苡仁为禾本科植物薏苡Coixlacryma-jobiL.var.ma-yuen(Roman.)Stapf的干燥成熟种仁，具有利水渗湿，健脾止泻，除痹，排脓，解毒散结。常用于水肿，脚气，小便不利，脾虚泄泻，湿痹拘挛，肺痈，肠痈，赘疣，癌肿[1]。现代药理研究表明，薏苡仁油具有抗肿瘤和提高机体免疫力的作用，据研究表明，薏苡仁的中性油脂显示抗肿瘤活性，薏苡仁中性油酯以三酰甘油为主要成分[2]。《中国药典》(一部)2010年版中薏苡仁含量测定采用高效液相法，以蒸发光散射仪为检测器，甘油三油酸酯作为指标来控制薏苡仁质量。我国的薏苡资源极为丰富多样，栽培历史悠久，广泛分布于南北各省，很多地区也有种植。本文共收集了21个不同地方的薏苡种子，其中浙江省9个，福建省7个，贵州省2个，湖北省1个，广西省1个，四川省1个，在浙江种植，采用相同的种植方法，薏苡采收后脱壳，采用高效液相法测定了收获的不同种源的薏苡仁中甘油三油酸酯含量。

1 材料与仪器

1.1 材料

甘油三油酸酯对照品(中国药品生物制品检定所，批号111692-200501)，21个不同地方薏苡种子，其中浙江省9个，福建省7个，贵州省2个，湖北省1个，广西省1个，四川省1个，具体见表1，经浙江省中药研究所俞旭平教授级高级工程师鉴定为薏苡Coixlacryma-jobiL.var.ma-yuen(Roman.)Stapf的干燥成熟种仁，21个不同地方薏苡种子于2008年5月统一种植在浙江省泰顺县仕阳镇，采用相同的种植方法，2008年底待薏苡成熟时收获，晒干后脱壳，得薏苡仁，备用。

表1 21份薏苡种子来源

1.2 仪器

Agilent 1100系列高效液相色谱仪及Agilent化学工作站，美国Alltech 3300蒸发光散射检测仪，KQ-100DB型数控超声波仪(昆山市超声仪器有限公司生产)。

1.3 试剂

高效液相检测用乙腈、二氯甲烷为色谱纯，提取用乙腈和二氯甲烷为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：美国Supelco Discovery C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-二氯甲烷(66∶34)；流速：0.7 mL·min-1；检测器：Alltech 3300蒸发光散射检测仪器；柱温：30 ℃；ELSD参数：漂移管温度45 ℃，氮气流速1.5 L·min-1。进样量：10 μL。甘油三油酸酯对照品和薏苡仁色谱图见图1、2。

1.甘油三油酸酯峰图1 甘油三油酸酯对照品HPLC图

1.甘油三油酸酯峰图2 薏苡仁HPLC图

2.2 对照品溶液制备

精密称取甘油三油酸酯对照品适量，加流动相制成0.142 2 mg·mL-1的对照品溶液，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.3 供试品溶液制备

取样品粉末约0.6 g(过三号筛)，精密称定，精密加入流动相50 mL，称定重量，浸泡2 h，超声处理30 min，取出，放冷，称定重量，加流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.4 线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液3，5，7，10，15，20，25 μL，分别注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标，以对照品进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程Y=1 263.17X-561.56，r=0.993 5。结果表明甘油三油酸酯在0.426 6～3.55 μg呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液10 μL，重复进样6次，结果平均峰面积为1 106.12，RSD=0.78 %(n=6)。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，依上述色谱条件，分别于0，3，5，7，28 h各进样10 μL注入液相色谱仪，测定峰面积，结果峰面积RSD=1.86 %(n=5)，表明供试品溶液在室温下28 h内稳定。

2.7 重复性试验

分别取同一批薏苡仁样品(浙江泰顺刘宅村)6份，每份约0.6 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备，照上述色谱条件各进样10 μL测定，结果薏苡仁中甘油三油酸酯平均含量为0.595 %，RSD=1.24 %(n=6)。

2.8 加样回收率试验

取6份已知含量的供试品约300 mg，精密称定，分别添加甘油三油酸酯对照品2.301 mg，按供试品溶液制备方法制备，依上述色谱条件进行，结果见表2。

表2 薏苡仁中甘油三油酸酯回收率试验

注：甘油三油酸酯对照品加入量均为2.301 mg

2.9 样品含量测定

将21个不同种源的薏苡仁样品，按上述方法进行测定，结果见表3。结果表明，21个样品中甘油三油酸酯含量都符合《中国药典》2010年版(一部)规定标准，不同薏苡仁中甘油三油酸酯含量有一些差异，含量最高是种子来自福建三明宁化的粳性薏苡仁，达到0.793 %，含量最低是种子来自浙江缙云的薏苡仁，为0.561 %。

表2 不同薏苡仁中甘油三油酸酯含量 /%

注：n=2

3 讨论

3.1 流动相的选择

参照陈勇等研究结果[3]，主要考察了乙腈-二氯甲烷流动相的不同比例和流速，当乙腈-二氯甲烷比例为(65∶35),流速为1 mL·min-1时，流速快导致基线噪音比较大；流动相比例调整为(59∶41),流速为0.5 mL·min-1时，基线噪音变小，但出峰比较迟。综合考虑基线噪音、出峰时间和分离效果等因素，调整流动相比例为乙腈-二氯甲烷(66∶34)、流速为0.7 mL·min-1时取得了较好的分离效果，见图1。

3.2 不同薏苡仁中甘油三油酸酯含量比较

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：353-354.

[2] 李大鹏，黄洁敏，苏维埃，等.薏苡仁油脂的化学成分分析[J].中药新药与临床药理，1999，10(2)：99-101.

[3] 陈勇，陈碧莲，何云珍，等.高效液相色谱法测定薏苡仁中甘油三油酸酯的含量[J].中国现代应用药学杂志，2005，22(3)：246-247.

ComparingofGlycerolTrioleateinSemenCoicisofDifferentProvenances

REN Jiang-jian1，YU Xu-ping1，ZHANG Bin2，WANG Zhi-an1

(1.ZhejiangResearchInstituteofTraditionalChineseMedicine,Hangzhou310023,China；2.ChiataiQingchunbaoPharmaceuticalCo.,LTD,Hangzhou310023,China)

Objective:To compare the content of glycerol trioleate in 21 Semen Coicis of different provenances.Methods: The Discovery C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used with mobile phase of acetonitrile-dichloromethanol(66∶34).The mobile phase flow rate was 0.7 mL·min-1. The column temperature was controlled at 30 ℃.The ELSD was used.The tube temperature was 45 ℃, and the flow rate of nitrogen was 1.5 L·min-1.Results: The content of glycerol trioleate in 21 semen coicis of different provenances were in line with Chinese pharmacopeia, and the highest content was japonica Semen Coicis which seeds from Ninghua, Sanming and Fujiang, which was 0.793 %; the lowest content was the sample which seeds from Jinyun and Zhejiang, which was 0.561 %.Conclusion: The content of glycerol trioleate in 21 Semen Coicis of dirrerent provenances is different，and the content of glycerol trioleate in Semen Coicis which seeds from the same area is also different.

Semen Coicis; Glycerol trioleate; Germplasm; Provenances; HPLC-ELSD

国家科技攻关计划(2004BA721A21)，国家科技重大专项(2009ZX09308-002)，国家科技支撑计划(201107011)

*任江剑， E-mail：jjren@163.com

2010-09-14)