肝硬化患者血浆同型半胱氨酸水平的临床研究

刘 芳，刘 欢，于美丽

（天津第三中心医院，天津 300170）

肝硬化患者血浆同型半胱氨酸水平的临床研究

刘 芳，刘 欢，于美丽

（天津第三中心医院，天津 300170）

目的 探讨血浆总同型半胱氨酸（tHCY）含量在肝硬化疾病的临床价值。方法 测定并分析47例肝硬化患者及55例健康者血浆tHCY含量，以及肝硬化患者血清丙氨酸转氨酶（ALT）、门冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、胆碱酯酶（CHE）、白蛋白（ALB）、前白蛋白（PALB）、葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）含量、血浆中20种氨基酸水平。结果 肝硬化患者血浆tHCY水平（12.98±3.73μmol/L）与正常对照组（10.29±1.96）μmol/L相比有所升高，差异有统计学意义，肝硬化Child-pugh C级患者中HCY水平明显升高（14.96±4.74μmol/L），与对照组、肝硬化Child-pugh A级患者、肝硬化Child-pugh B级患者相比差异具有统计学意义。tHCY变化与血清ALT、AST、ALB、TBIL、PALB、BUN、Cr、BCAA/AAA无相关性，而与氨基酸分析中蛋氨酸（MET）成正相关，且具有统计学意义。结论 HCY可作为评价肝硬化病情严重程度的一项新的生化指标。

肝硬化；同型半胱氨酸；高效液相色谱检测

同型半胱氨酸又称为高半胱氨酸（Homocysteine，HCY），它不属于组成蛋白质的20种氨基酸，在体内不能合成，只能依赖于蛋氨酸的分解代谢，是甲硫氨酸代谢而形成的一种含硫氨基酸。目前研究认为慢性肝病患者血浆Hcy水平显著升高，可作为肝功能损害的预测指标［1］。而肝硬化患者由于肝脏病变不同，临床表现、并发症以及治疗方法也不同，及时、准确地了解肝功能对评价肝硬化患者合理治疗、判断预后以及预测并发症等具有重要的临床意义。因此，通过检测肝硬化患者血浆总同型半胱氨酸（total homocysteine，tHCY）水平，可以评估肝硬化病情变化。

1 材料和方法

1.1 材料

收集200710-200910在天津第三人民医院住院治疗的肝硬化患者47例，其中男32例，女15例，年龄27～77（52.48±13.25）岁，肝硬化的诊断标准符合2004年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的肝病诊断标准。同时期体检的健康人群55例作为对照组，均无急慢性肝病、上腹部B超检查肝内未见明显病变、肝脏生化检查均在正常范围，其中男23例，女32例，年龄35～73（55.3±8.15）岁。各组间年龄及性别差异无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 血样采集

在入院时对所有入选研究对象进行清晨空腹肘静脉采血3mL，一次性试管中注入含抗凝剂EDTA30μL，于采血后2h内以3 000r/min离心15min，分离血浆，置于-80℃冰箱保存待测。

1.2.2 检测Hcy

采用美国Waters-600 E型高效液相色谱仪配备日本岛津公司RF-10A型荧光检测仪，CR-1B色谱数据处理机和Eorbax C18（250mm×4.6mm ID）分析柱进行所有入选研究对象血浆HCY检测，以美国Sigma公司提供的HCY标准品作对照；通过日立835-50氨基酸自动分析仪进行血浆中蛋氨酸（MET）、精氨酸（ARG）等20种氨基酸检测，应用全自动生化分析仪进行血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、门冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、胆碱酯酶（CHE）、白蛋白（ALB）、前白蛋白（PALB）、葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）检测。

1.2.3 统计学分析

应用SPSS 12.0统计软件，计量资料以均数±标准差（x¯±s）表示，多个样本均数比较采用单因素方差分析，组间样本均数间两两比较采用q检验，相关性分析采用Pearson相关分析，P=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 肝硬化组及正常对照组血浆tHCY检测结果比较

肝硬化组空腹血浆tHCY水平为12.98±3.73μmol/L，正常对照组血浆tHCY水平为10.29±1.96μmol/L，在肝硬化患者中血浆tHCY水平显著升高，两组比较具有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 肝硬化患者间血浆tHCY差异比较

15例Child-Pugh分级A级患者血浆tHCY值为11.57μmol/L，B级患者12例血浆tHCY值为11.98μmol/L，20例C级患者血浆tHCY值为14.96μmol/L，呈进行性增加趋势，即肝硬化程度越重，血浆tHCY水平越高。Child-Pugh C级患者与对照组、肝硬化Child-pugh A级、B级患者相比较差异具有统计学意义（P＜0.05），而肝硬化Childpugh A级、B级患者间血浆tHcy水平比较无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 血浆tHcy水平与主要肝功能指标的相关性

在传统Child-Pugh A、B、C组中的肝功能的诸项指标中，血清白蛋白、前白蛋白、血小板水平逐渐下降，胆红素水平逐渐升高，凝血酶原活动度逐渐延长。将血浆tHCY水平与主要肝功能指标进行相关性回归分析，结果提示tHCY与ALT、AST、ALB、PALB、BCAA/AAA呈负相关，与 TBIL、BUN、Cr、MET呈正相关，但上述结果不具有统计学意义（P＞0.05），即tHCY水平仅与MET相关性具有统计学意义（P＜0.05），结果见表3。

3 讨论

HCY是一种含硫的氨基酸，是蛋氨酸去甲基后形成的中间产物，通常HCY在细胞内代谢途径有3条。①转甲基途径：HCY在蛋氨酸合成酶（Methionine synthase，MS）及辅酶维生素B12参与下，与5-甲基四氢叶酸合成蛋氨酸和四氢叶酸；其替代途径局限于肝细胞内，甜菜碱（betaine）供甲基并在甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶作用下合成蛋氨酸。②转硫途径：HCY在胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine β-Synthase，CBS）及辅酶维生素B6参与下，与丝氨酸缩合成胱硫醚，进一步断裂成半胱氨酸和α-酮丁酸。转硫途径被认为是体内清除HCY的主要途径［2］，这一过程是不可逆的。③HCY在细胞内形成后排出至血浆参加循环。正常血浆中HCY以结合形式或游离形式存在，统称为总HCY。生理条件下，在人体血浆中只有极少量HCY（＜0.3μmol/L）以游离态存在，绝大部分以HCY-二硫化物结合态存在［3］。

临床上严重的高同型半胱氨酸血症主要见于与HCY代谢相关基因突变，即遗传性胱硫醚β合成酶和N5，N10-亚甲基四氢叶酸还原酶的基因突变。在体内，胱硫醚β合成酶基因的表达主要是在肝、肾、胰腺和大脑等，其中在肝脏中表达最强，因此，肝脏被认为是代谢HCY的主要器官［2］。另外，叶酸、VitB12、Vit B6缺乏也是影响血浆tHCY水平的主要因素，而肝脏不仅仅是叶酸和B族维生素的主要储存部位，而且近85％的HCY转硫作用是在肝脏中进行的，因此当肝实质细胞损伤时，将引起HCY代谢障碍。这可能是通过产生过量氧化物及过氧化物本身对肝脏产生损伤，导致肝脏三羧酸循环的障碍，干扰谷胱甘肽合成，使得谷胱甘肽防止细胞成分氧化的作用、对血管产生保护功能降低，进而阻碍体内DNA、蛋白质、多糖、胆碱和儿茶酚氨等的甲基化转反应过程，影响细胞的发育、分化［4］。这些因素又加重对肝脏损伤［5-9］，两者形成恶性循环，加速了肝脏疾病的进展。

在我们的研究中，血浆tHCY水平显著升高（12.98±3.73μmol/L），与正常对照组（10.29±1.96μmol/L）比较具有显著性差异（P＜0.05）。本研究同时提示，随着肝硬化组患者Child-Pugh分级的增加，其血浆tHCY水平明显升高，呈进行性增加趋势，即肝硬化程度越重，血浆tHCY水平越高。肝硬化Child-pugh C级患者与对照组、肝硬化Child-pughA级B级患者间比较具有统计学意义（P＜0.05），与Ventura及石胜等［10-11］的研究结果相一致，因此我们提出失代偿期肝硬化患者进行血浆中tHCY水平检测，可能有助于在临床中对肝硬化患者病情的严重程度加以判断及监测。

表1 血浆tHCY水平与各生化指标间的关系

HCY在体内合成依赖蛋氨酸的分解代谢，在HCY代谢过程中，HCY通过转甲基途径形成蛋氨酸，二者构成代谢循环，相互转化［12］。在本研究分析肝硬化患者血浆tHCY水平与主要肝功能指标的相关性中，提示tHcy变化仅与MET有显著相关性，统计学分析P＜0.05，具有统计学意义，可能与上述观点有关。而血浆tHcy水平与ALT、AST、ALB、PALB、BCAA/AAA成负相关，与TBIL、BUN、Cr成正相关，但不具有统计学意义（P＞0.05）。

因此，我们认为，血浆tHCY水平可以作为评价肝硬化病情严重程度的一项新的生化指标。针对失代偿期的肝硬化患者，监测tHCY水平变化可能有助于理解疾病的演变，为在临床工作中合理制定治疗方案及估计预后将有一定意义。但在该研究存在样本量偏小，尚缺乏病理组织学的对照研究，还希望在以后的研究中加以进一步验证。

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〔编辑 杨德兵〕

Clinical Study of Plasma Homocysteine Levels in Cirrhosis Patients

LIU Fang，LIU Huan，YU Mei-li
（Tianjin Third Central Hospital，Tianjin，300170）

ObjectiveTo investigate the clinical significance of plasma total homocysteine（tHcy）in cirrhosis.MethodsPlasma total homocysteine level were measured in 47 cirrhosis patients and 55 healthy controls during 2007/20-2009/10.Serum ALT，AST，TBIL，CHE，ALB，PALB，GLU，BUN，Cr and amino acid levels in cirrhosis patients were also detected.ResultsPlasma tHcy levels in cirrhosis patients（12.98±3.73 μmol/L）were higher than healthy controls（10.29±1.96）μmol/L（P＜0.05）.Plasma tHcy levels in Childpugh C patients（14.96±4.74）μmol/L was significantly higher than Child-pugh A and B patients（P＜0.05）.There were no correlation between plasma tHcy levels and ALT，AST，ALB，TBIL，PALB，BUN，Cr，BCAA/AAA，but there was significantly positive correlation between tHcy and Methionine（P＜0.05）.ConclusionsPlasma tHcy levels in cirrhosis disease may be a new biochemistry measurement.

cirrhosis；homocysteine；high performance liquid chromatography

R575.2

A

1674-0874（2011）03-0051-03

2010-11-22

刘芳（1970-），女，山西阳高人，硕士，主治医师，研究方向：肝胆疾病。