杜香提取物抑制荷瘤H22小鼠生长的实验研究

刘海军 孙晋民 贾兰玲 (中国医科大学实验技术中心一部暨中药工程实验室，辽宁 沈阳 000)

细叶杜香(Ledum palustre L.Var.Angustum E.Busch)是杜鹃花科杜香属(Ericaceae ledum)常绿直立小灌木，主要分布于我国东北(大、小兴安岭，长白山)、朝鲜、日本、西伯利亚、北美、欧洲等地，生于比较湿润的沟谷和水甸子，种子繁殖。细叶杜鹃的叶、枝、花和果实中含有挥发油。挥发油可以入药，有镇咳、祛痰、平喘、扩张血管、降压、杀菌止痒等作用，对慢性支气管炎、结肠炎、急性鼻炎、流感、咳嗽、皮肤病有一定疗效〔1，2〕。我国对杜香油的利用始于60年代，主要用于医药、香料行业。关于其体内外抗肿瘤作用至今未见报道。本研究主要探讨杜香提取物熊果酸的抗肿瘤作用。

1 材料与方法

1.1 主要材料与试剂 H22小鼠肝癌细胞株由中国医科大学肿瘤研究所提供，用昆明种小鼠传代保种;实验动物用昆明种小鼠60只，雌雄各半，体质量18～22 g，由中国医科大学实验动物中心提供;杜香采集地为黑龙江省加格达奇克河地区，由齐齐哈尔大学生命科学与工程学院刘庆华教授馈赠。

1.2 杜香提取物熊果酸的制备 采用水蒸气蒸馏法，置杜香于圆底烧瓶内于67℃回流提取，合并流液，过滤冷藏备用。

1.3 H22荷瘤小鼠模型建立 取H22细胞，加入含10%胎牛血清的RPMI1640培养液，调整细胞密度为5 ～6×106/ml，取0.2 ml细胞悬液接种于昆明种小鼠背部皮下，建立实体瘤小鼠模型。

1.4 动物实验 建立实体瘤小鼠模型后，将小鼠平均分成4组，每组15只，实验组(熊果酸组)腹腔分别注射0.25、0.5、1.0 mg/kg熊果酸;正常对照组给予生理盐水，按0.1 ml/g等容注入。连续给药5 d后停药，观察20 d，取皮下接种的实体瘤组织称重，计算肿瘤抑制率，实体瘤肿瘤抑制率(%)=(对照组小鼠瘤质量-实验组小鼠瘤质量)/对照组小鼠瘤质量×100%。

2 结果

腹腔注射杜香提取物对小鼠荷瘤H22腹水瘤的生长具有明显抑制作用，呈一定剂量依赖关系，且对荷瘤动物的体重增长没有影响，提示杜香提取物无毒性。见表1。

表1 杜香提取物对小鼠荷瘤H22腹水瘤的生长抑制作用(± s，n=15)

表1 杜香提取物对小鼠荷瘤H22腹水瘤的生长抑制作用(± s，n=15)

与对照组比较:1)P＜0.05

组别 剂量(g/kg)动物体重用药前 用药后瘤重(g)抑瘤率(%)对照组 － 19.1 30.5 3.456±0.929 －实验组 0.25 18.6 28.6 2.456±0.7431) 25.93 0.50 18.9 29.9 1.862±0.8061) 44.39 1.00 20.0 28.9 1.862±0.8061)65.56

3 讨论

谈华等〔3〕报道杜香挥发油对青霉菌和金黄色葡萄球菌有抑制和杀灭作用，不同菌类、菌体对杜香挥发油的敏感程度不同，酵母菌最敏感，青霉菌和金黄色葡萄球菌次之。Tomohiko〔4〕等研究发现杜香中熊果酸提取物对人舌鳞癌细胞株有抑制作用;Murakami〔5〕等认为杜香成分中含有一种抗氧化活性成分。关爽等〔6〕研究表明杜香熊果酸提取物对遗传损伤有保护作用。Thaloor等〔7〕发现熊果酸能抑制细胞微管的形成和破坏已形成的微管，降低53 kD和72 kD金属蛋白酶的明胶降解活性，减少72 kD金属蛋白酶的转录和表达，认为熊果酸的抗血管生成作用是通过调节血管生成中蛋白水解酶的活性而实现的。杜香熊果酸提取物能降低细胞微核的发生率，实验结果表明不同浓度杜香提取物0.25、0.5、1.0 mg/kg对荷瘤H22小鼠腹水瘤的生长有明显的抑制作用，且与阴性对照组有显著差异，可见在不同剂量下，杜香提取物有明显抗肿瘤作用。

有关中药杜香有效成分的抗肿瘤实验研究已经有一定成果，但仍然存在不足，如中药有效成分的分离和纯化还需进一步加强，以及中药有效成分抗肿瘤机制尚需进一步阐明等;这是我们后续探究的重点。

1 林克勤.杜香生物活性物质〔J〕.国土与自然资源研究，1995;17(1):73-6.

2 Huang MT，Ho CT，Wang ZY，et al.Inhibition of skin tumorigenesis by rosemary and its constituents carnosol and ursolic acid〔J〕.Cancer Res，1994;54(3):701.

3 谈 华，刘庆华.细叶杜香挥发油抑菌和杀菌作用的研究〔J〕.齐齐哈尔大学学报，2005;21(3):33-6.

4 Tomohiko Kutsuna，Zheng HC，Hekmat Osman Abdel-Aziz，et al.High JC virus load in tongue carcinomas may be a risk factor for tongue tumorigenesis〔J〕.Virchows Archiv，2008;452(4):405-10.

5 Murakami S，Takashima H，Sato-Watanabe M，et al.Ursolic acid，an antagonist for transforming growth factor TGF-1〔J〕.FEBS Lett，2004;566(1):55-9.

6 关 爽，卢 静，刘 静.杜香熊果酸提取物对小鼠遗传损伤的保护作用〔J〕.癌变畸变突变，2009;21(1):68-9.

7 Thaloor D，Singh K，Sidhu GS，et al.Inhibition of angiogenie differentiation of human umbilieal vein endothelial cells by cureumin〔J〕.Cell Growth Differ，1998;9(4):205-12.