内蒙古地区蒙古族原发性高血压与人类心钠素基因的相关性

赵 平 张永平 赵 美 (内蒙古自治区医院心血管内科，内蒙古 呼和浩特 0007)

原发性高血压(EH)是由遗传和环境因素共同作用而引起的多基因病，流行病学调查和家系研究表明大约30%～40%的高血压的危险因素是遗传性的〔1〕。在我国高血压普遍存在着患病率高、死亡率高、残疾率高的“三高”和知晓率低、治疗率低、控制率低的“三低”特点，我国已经成为世界上高血压危害最严重的国家之一。目前，高血压遗传学研究的一个主要任务就是阐明血压升高的遗传机制，也就是寻找高血压致病相关基因。蒙古族是我国高血压患病率较高的民族之一，识别蒙古族EH的易感基因对于其高血压的防治具有重要的意义。在众多的高血压相关基因中，其病理生理作用是不同的。其中人类心房利钠肽(hANP)通过影响肾脏钠水代谢，进而影响血压的调节，hANP被认为是EH重要的候选基因。在本研究中我们将研究hANP与蒙古族EH的关系。

1 对象与方法

1.1 对象 采用病例-对照研究。所有对象均为来自内蒙古自治区杭锦后旗的蒙古族，在本地生活3代以上，无血缘关系，无异族通婚史，年龄20～70岁。调查650人，均经知情同意。其中EH患者350例，高血压的诊断标准按照1999年WHO/ISH标准:收缩压≥140 mmHg和(或)舒张压≥90 mmHg，进行高血压药物治疗的患者也被列入高血压组。常规检查排除继发性高血压，排除过量饮酒，排除服用避孕药史，无糖尿病及肝肾疾病史。对照组300例，入选标准:查体健康者，3次测量血压，收缩压＜140 mmHg和/或舒张压＜90 mmHg，无服用降压药史，无高血压家族史及其他器质性心脏病史。两组性别、年龄匹配，无血缘关系。所有研究对象均记录病史并且进行常规检查，包括测量血压、身高、体重、血脂。

1.2 方法

1.2.1 血压测量 采用国际通用方法，血压测量仪采用台式毫米汞柱血压仪。测压前15 min不吸烟，不饮酒，不饮茶或者咖啡，避免劳累、紧张和兴奋，背靠静坐5 min。裸露右侧上臂置于和心脏同一水平线位置。每次重复测血压3次，间隔2 min，取平均值。血压测量在标准状态下进行，即每天同时间、同侧臂、同血压计，专人测量。

1.2.2 基因组DNA的提取 用2%EDTA抗凝真空管采清晨空腹外周静脉血3 ml，置－20℃冰箱中储存，应用低渗溶血-盐析法提取所有入选受试者的全血DNA，DNA纯度达到 A260∶A280≥1.8。

1.2.3 基因多态性分析 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和琼脂糖凝胶电泳方法鉴定hANP基因C2664G基因型，其引物由上海生工生物工程服务有限公司合成:上游序列5'-AACAGCAACGGAAGAAATGA-3，下游序列5'-ATCCAACCCCCAAATAGAAGTA-3'(由上海生工生物技术服务有限公司合成)。TaqMan(DNA聚合酶)5 U/μl为宝生物工程(大连)有限公司产品。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外灯下观察结果。CC型:仅有157 bp的带型;GG型:有134 bp和23 bp两种带型;CG型具有157 bp、134 bp和23 bp三种带型。

1.3 统计学处理 应用SPSS11.5统计软件分析。所得出的基因型及等位基因的频率检测是否符合 H-W平衡定律，计量资料用±s表示，两组间比较采用t检验，计数资料组间比较采用χ2检验，两个计量资料之间有无相关采用相关分析。

2 结果

2.1 临床资料比较 蒙古族EH组与正常对照组一般临床资料比较见表1，EH组收缩压、舒张压均高于正常对照组(P＜0.01)。两组年龄、体重指数(BMI)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白(LDL-C)比较，有显著差异(P＜0.01)。

2.2 基因型频率和等位基因频率的比较 hANP基因C2664G基因型频率和等位基因的频率符合H-W平衡定律。EH组和正常血压组间hANP基因C2664G基因型频率和等位基因频率分布比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。

表1 EH组与对照组临床资料比较(±s)

表1 EH组与对照组临床资料比较(±s)

与对照组比较:1)P＜0.01;HDL-C:高密度脂蛋白胆固醇

组别 n 年龄(岁)男/女(n) BMI SBP(mmHg)DBP(mmHg)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)TC(mmol/L)EH组 350 51.0±18.0 166/184 24.9±4.41)160.3±281)104.5±161)1.86±1.411)1.52±0.94 3.65±1.061)5.48±2.321)对照组 300 42.0±16.0 130/170 22.5±5.5 109.±12 71.4±9.0 1.23±1.00 1.54±0.66 2.45±1.02 3.34±1.47

表2 EH组和对照组hANP基因C2664G基因型频率和等位基因频率比较

3 讨论

EH的病因和发病机制非常复杂，目前认为与遗传易感基因和多种环境因素相互作用有关。已经证实多种基因的多态性与EH相关。流行病学调查表明，蒙古族是原发性高血压高发民族之一〔2〕。目前已有研究报道，EH与盐敏感性相关基因的变异有关〔3〕;但是 hANP基因多态性是否参与了蒙古族EH的发病机制尚未见报道。本研究选择内蒙古自治区杭锦后旗，寒冷气候，远离工业发达地区，交通不便，很少与外界通婚，人口流动性小，遗传背景单一;在饮食上蒙古族居民肉类、食盐摄入均相对较高，蔬菜摄入量较低;当地的医疗卫生水平及人们群众的卫生知识水平相对较低，对高血压的知晓率及治疗率低，特别适于进行EH的遗传流行病学和分子流行病学研究，是一个较为理想的人群。

心房利钠肽又称心钠素，具有强大的利钠利尿、扩张血管的作用。当机体血容量增加或血压升高时，ANP可直接或间接地通过改变肾脏血流动力学及中枢与外周神经体液因子使肾脏的排钠作用发生改变，从而维持水盐平衡，降低血压。

ANP基因位于染色体1P36.21，由3个外显子和2个内含子组成。已有多项研究显示ANP基因与盐敏感性高血压相关，但来自不同地区、不同人群的研究结果并不一致，在阿拉伯人群的研究中〔4〕显示ANP第2个内含子的基因变异不是阿拉比人群高血压的关键因素。在日本人群的研究中〔5〕揭示5'非翻译区的C2664G与高血压有显著性相关(P＜0.05)，在该人群中C等位基因者患高血压的相对风险率高于G等位基因者。

在本研究中，我们随机选择了650例内蒙古自治区杭锦后旗的牧民为研究对象。基因型频率和等位基因频率在EH组和正常对照组之间差异无显著性。本研究结果未发现hANP C2664G多态性和蒙古族EH明显相关。hANP和EH的相关性需要在更多人群中进行验证。

1 Longini IM，Higgins MW，Hinton PC，et al.Environmental and genetic sources of familial aggregation of blood pressure in Tecumseh，Michigan〔J〕.Am J Epidemiol，1984;120(1):131-44.

2 全国血压抽样调查协作组.中国各民族高血压患病情况调查〔J〕.高血压杂志，1995;3(增刊):24-30.

3 Li T，Liang H，Lu J，et al.Transplantation of atrial natriuretic peptide-expressing fibroblasts reduces blood pressure and increases urine volume in spontaneously hypertensive rats〔J〕.Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao，2010;26(5):643-8.

4 Frossard PM，Obineche EN，Lestringant GG，et al.Association study be-tween the ANF gene and hypertension in a Gulf Arab population〔J〕.Am J Hypertens，1997;10(11):1308-10.

5 Kato N，Sugiyama T，Morita H，et al.Genetic analysis of the atrial natriuretic peptide gene in essential hypertension〔J〕.Clin Sci(Lond)，2000;98(3):251-8.