浅议总蛋白试剂盒标准品的准确性

何乐春 重庆医疗器械质量检验中心（重庆 401121）

0.引言

血浆或血清蛋白质是血浆固体成分中含量最多、组成复杂、功能广泛的一类化合物。检测许多疾病状态下的总蛋白水平变化具有重要意义。总蛋白升高往往是由于一种或多种免疫球蛋白增加所引起的，如：急性失水，代谢钠丢失，多发性骨髓瘤等；总蛋白降低大多是由于白蛋白的降低所引起，如：水钠潴留，长期营养不良，严重结核，甲亢和恶性肿瘤等。因此，临床上检测血清总蛋白及其组分，不仅可作为评价营养状态及消化功能的指标，而且对肝脏疾病、肾脏疾病、出血性疾病和免疫性疾病等的诊断、治疗和愈后判断有重要价值。

我们对于总蛋白试剂盒试剂合理性和标准品准确性的研究，不仅可以有效地节约原材料、降低生产成本、规范行业，对临床检验的准确性也大有帮助。

实验原理

双缩脲法：在碱性条件下，蛋白质分子中的肽键与二价铜离子发生双缩脲反应生成紫红色的络合物，其中每个铜离子与五至六个肽键络合，在540nm波长处有最大吸收峰，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即蛋白质含量成正比，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质的含量。该法为临床测定血清总蛋白的首选方法。

1.材料和方法

编号 生产厂家名称试剂盒1 中生北控生物科技股份有限公司试剂盒2 四川省迈克科技有限责任公司试剂盒3 上海荣盛生物技术有限公司试剂盒4 重庆百克医疗器械有限责任公司注：四种试剂盒所提供的标准液均为70.0g/L

表1. 总蛋白测定

混合均匀，在37℃下保温10分钟，以试剂空白管调零，在546nm波长下测其吸光度，得值。

1.1 仪器

半自动生化分析仪

1.2 材料

选用四个厂家生产的总蛋白测定试剂盒，见下表。

1.3 方法

采用试剂盒1提供的总蛋白标准液作为标准品，以试剂盒2、试剂盒3和试剂盒4生产的标准液作为样品，分别严格按试剂盒1的使用说明书进行操作，得到各样品的测定值，以原试剂盒提供的标准液浓度为真值，然后按以下公式计算各样品的检测误差（以70.0g/L作为各样品的真值）。

误差=（︱测定值-70︱/70）×100%总蛋白测定方法：见表1。

2.结果

表2：

表3：

3.讨论

目前，市场上有很多厂家生产的用于临床上测定人血清总蛋白的总蛋白试剂盒，可谓品种繁多，但试验原理都是采用双缩脲法，而且很多厂家在生产试剂盒的同时都相应地生产了与其对应的标准品。尽管蛋白质标准品是一个相对很稳定的试剂，双缩脲法的重复性也好，但各试剂盒对同一样品的检测仍存在误差，误差范围很大，有的不足1%，有的已大于5%（但都在 ±10%以内），这一范围太宽，与临床上正常人血清总蛋白在60～80g/L这一范围存在的差异较大。从以上结果来看，试剂盒1和3生产的蛋白质标准品可以互换，而试剂盒1和2以及试剂盒1和4的标准品不能互换。但总的来看，各厂家生产的试剂盒试剂和标准品最好不要互换。

建议一：双缩脲法是临床上测定血清总蛋白质首选最方便、最实用方法。双缩脲试剂有不同配方，大多数加入洒石酸钾钠，与Gu2＋形成稳定的络合铜离子，以防止Gu（OH）2不稳定形成沉淀。故建议酒石酸钾钠与硫酸铜之比不宜低于3：1。

建议二：各种血清蛋白与双缩脲反应显色程度基本一致，不同蛋白质特异性差异甚小。因此，可用混合血清、人血清白蛋白和牛血清白蛋白作标准。为规范目前市场上各厂家生产的试剂盒的质量及配合临床需要，建议标准品由国家统一生产发放。