辽宁境内迁徙候鸟（2009—2010）高致病性禽流感病毒流行病学调查分析

袁文泽 ，贾 赟 ，蔡晓萍 ，肇慧君 ，孙艳峰 ，简中友 ，胡传伟 ，吴 斌

（1. 辽宁出入境检验检疫局， 辽宁大连 116001；2. 大连机场出入境检验检疫局，辽宁大连 116001）

为了明确野生候鸟是否是引起家禽爆发禽流感的直接原因，我们希望能够在中国辽宁境内边境地区迁徙侯鸟的禽流感病毒流行病学方面获得更多的信息。为此，本研究对2009—2010年辽宁境内边境地区迁徙的野生侯鸟进行了流感病毒的流行病学分析。

1 实验材料

1.1 检测样本收集

从2009年1月到2010年12月，我们根据野生候鸟的迁徙时间和路线，在春秋两季分别在辽宁省的大连、丹东、东港、营口、葫芦岛、锦州、盘锦等七个城市的野生候鸟聚居地（包括池塘、湖泊、海边以及经济生产禽类附近的水禽管理区城），共采集了野生候鸟和水禽的血清样品和拭子样品，其中白鹭血清共80份，拭子样品840份。

1.2 标准抗原和其他诊断试剂

各亚型禽流感病毒标准抗原H5、H7、H9亚型均购自中国农科院哈尔滨兽医研究所国家禽流感诊断实验室。禽流感病毒通用型荧光RT-PCR试剂盒和H5、H7、H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR试剂盒为深圳匹基生物科技公司产品。

2 实验方法

2.1 血凝抑制试验（HI）

HI实验按照国家标准：高致病性禽流感诊断技术（GB/T 18936-2003）规定的操作方法进行。

2.2 病原检测（采用禽流感病毒荧光RT-PCR方法）

按照GB/T18936-2003规定的荧光RT-PCR方法操作规程对离心后的拭子样品进行检验。

3 实验结果

3.1 迁徙候鸟类和水禽禽流感病毒的血清学调查

运用HI方法总共检测了80份血清样本的禽流感抗体水平，根据OIE建议的禽流感抗体阳性标准（HI抗体≥41og2），所检测的血清样本对H5、H7、H9等亚型都呈阴性（表1）。

表1 不同品种鸟类血凝抑制实验结果（HI抗体≥41og2判为阳性）

3.2 迁徙候鸟类和水禽禽流感病毒的病原检测

从2009到2010年，我们从840只野生候鸟和水禽中采集了840份咽拭子和肛拭子。采集拭子的鸟类品种和数量分别是：红嘴鸥95、白鹭110、夜鹭75、绿头鸭 68、鸿雁 82、灰雁 80、绿翅鸭 80、燕鸥 95、斑头雁75。采集的各种野生候鸟和禽类拭子样品通过2500 r/min离心10 min，按照GB/T18936-2003规定的荧光RT-PCR方法操作规程对离心后的拭子样品进行检验，检测结果均为阴性。

4 讨论

自2003年以来，H5N1亚型高致病禽流感相继在一些东南亚国家如柬埔寨、中国、印度尼西亚、日本、韩国、朝鲜、泰国、越南中暴发，导致严重的经济损失，并威胁人类的健康。据中国农业部发布的信息了解到从2004年1月到2005年8月，中国大陆（主要集中在东南部）共有17个省暴发了78次HPAI。中国科学家们就迁徙的鸟类是否是引起家禽禽流感大暴发的直接原因引起激烈争论。尽管禽流感对于动物和人都具有重要的生态学意义，一些研究结果暗示野生鸟类为禽流感病毒的自然储存宿主[1]。尤其是意大利，美国等国家在此方面研究较为深入，他们证实禽流感病毒的各亚型都已从野生水鸟中分离到，但是中国对于野生水鸟与禽流感病毒传播之间的关系研究甚少，为了调查自2009年1月到2010年12月辽宁境内迁徙路线上的野生侯鸟在AIV传播中的作用，我们进行了针对AIV的流行病学调查分析。我们总共调查了10种迁徙水鸟，它们分别聚居和迁徙在辽宁境内的候鸟迁徙路线上（大连，丹东，东港，葫芦岛，锦州，盘锦，营口）7个边境地区的候鸟密集活动区内。所采集的血清样本对H5、H7、H9亚型禽流感抗原都呈阴性，说明在被检的野生候鸟样品中，A型流感病毒（H5、H7、H9亚型）在野生候鸟体内可能以低水平传播，以至用常规的血清学方法检测不到抗体。也可能是由于某些禽流感病毒比较低的免疫原性，或者较低的敏感性以至不能检测低水平的抗体滴度。

在病原检测方面通过对2009—2010年辽宁境内10种迁徙野生候鸟和水禽采集肛拭子和咽拭子，进行禽流感病原检测，未能检测到H5、H7亚型高致病禽流感病毒。鉴于以上研究结果，虽没有检测高致病性禽流感病毒，但我们仍需要继续深入研究中国境内迁徙水鸟与流感病毒的相互关系以证实家禽流感暴发和迁徙野生水鸟作为流感病毒自然储存宿主之间的关系。

目前全球范围的HPAI H5Nl的暴发与流行可能包含了“野鸟—家禽—野鸟—家禽”的反复性传播链接，而且每次移转宿主、每一个反复都可能使病毒的毒性增强。LPAI可以在家禽和野鸟中循环变异直到HPAI疫情发生。HPAI病毒对家禽及最初缘起的野鸟都是致命的。所以要密切监测野鸟携带的禽流感毒株是否为高致病性的病毒，一旦发现要立即采取措施保护野生鸟类，同时也要严格控制毒株传入家禽中。

5 结论

从研究和监测数据表明，在2009—2010年期间，在辽宁边境地区迁徙停留的野生候鸟和水禽未发现携带高致病性禽流感病毒。没有直接证据证明辽宁境内和相邻省区家禽发生的禽流感和高致病禽流感与辽宁边境地区迁徙野生候鸟有直接关系，由于监测时间和监测样品有限，未建立辽宁边境地区野生候鸟和高致病性禽流感流行的直接关系，需进一步开展更大范围的针对边境地区野生候鸟携带高致病性禽流感的溯源性调查研究。

[1]Sharp C B，Kawaoka Y，Jones D J，et al.Coinfection of wild ducks by inflenza A distribution patterns and biological signif i cance. J Virol，1997，71 ：6128-6135.

[2]张太翔，李峰，田国华，等.家禽和野鸟中高致病性禽流感的风险分析[J].中国动物检疫，2009，26（2）：66-67.

[3]赵全邦，马睿麟，蔡金山，等.青海湖地区野（候）鸟禽流感流行病学监测[J].中国动物检疫，2008，25（11）：39-40.