定喘汤对支气管哮喘大鼠气道重塑及嗜酸粒细胞的影响*

于 鸿 计忠宇 赵 辉 卢丽艳

河北医科大学沧州中西医结合临床医学院（河北沧州 061001）

定喘汤对支气管哮喘大鼠气道重塑及嗜酸粒细胞的影响*

于 鸿 计忠宇 赵 辉 卢丽艳

河北医科大学沧州中西医结合临床医学院（河北沧州 061001）

目的 观察定喘汤抑制支气管哮喘大鼠模型气道重塑和嗜酸粒细胞浸润的作用。方法50只健康大鼠按随机数字表法分成正常对照组、哮喘模型组、定喘汤低、中、高剂量组，以卵白蛋白（OVA）致敏激发制备大鼠哮喘模型，观察各组大鼠肺组织病理学改变，测定外周血中总IgE水平和肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞计数。结果哮喘模型组肺组织病理学改变明显；对外周血中总IgE水平，肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞计数的影响，定喘汤各剂量组与哮喘模型组比较有显著差异，定喘汤低、中、高剂量组比较无显著差异。结论定喘汤治疗支气管哮喘的机制部分可能是通过抑制气道重塑和减少嗜酸粒细胞浸润而实现的。

定喘汤 哮喘 气道重塑 嗜酸粒细胞

定喘汤是以豁痰利肺，降逆平喘为法而组方的自拟中药汤剂，经临床实践治疗支气管哮喘疗效满意。本实验通过观察定喘汤对大鼠哮喘模型外周血中总IgE水平，肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞计数（EOS）及肺组织病理学改变等指标，旨在探讨定喘汤治疗哮喘的机理。

1 材料与方法

1.1 实验动物 普通杂种大鼠50只，雌雄兼用，体质量150～200g，由沧州中西医结合医院动物中心提供。

1.2 药物 定喘汤（射干、麻黄、紫菀、款冬花、半夏、陈皮、厚朴、桑白皮、茯苓、瓜蒌、杏仁等组成）按常法水煎2次混合后，按低、中、高剂量分别浓缩至每毫升含生药1、2、4g的药液备用，由沧州中西医结合医院制剂室提供。

1.3 试剂与仪器 卵蛋白（OVA）为美国Sigma公司生产；百日咳杆菌由北京生物研究所提供；IgE酶联免疫试剂盒由上海锐谷生物科技有限公司提供。超声雾化器为北京亚都YD-800型；Avant30低温高速离心机为Beckman公司制造。

1.4 哮喘模型制备[1]以10%OVA 1mL，氢氧化铝干粉100mg，灭活百日咳杆菌疫苗2mL（5×109个）腹腔注射致敏大鼠，2周后将大鼠置于密闭容器中，给予1%OVA溶液30mL雾化吸入激发哮喘，每次20min左右，连续3d后隔日再激发1次，以大鼠出现呼吸加快，口唇发绀，腹肌痉挛，点头呼吸及站立不稳等表现为激发成功。

1.5 分组与给药 大鼠分成5组，每组10只。正常对照组用生理盐水3mL灌胃；哮喘模型组于每次激发前用生理盐水3mL灌胃；定喘汤低、中、高剂量组分别于每次激发前30min给3mL相应剂量定喘汤灌胃。各组连续灌胃2周。

1.6 标本采集与检测 （1）血清总IgE含量测定：以氯胺酮麻醉实验动物，从大鼠眼球取血0.5mL，经3000r/min离心后分离血清，采用ELISA法测量IgE浓度，按试剂盒说明书操作。（2）支气管肺泡灌洗液（BALF）检测：大鼠眼球取血后，再行股动脉放血，切开气管，插管，用一次性注射器取生理盐水8mL作肺泡灌洗，重复3次，回收全部的BALF，要求回收率大于75%且无血液混入。每份样本经4℃，2000r/min离心10min，取上清液1～2mL，采用瑞氏姬姆沙染色，镜下计数100个白细胞中的嗜酸粒细胞，求出百分率，进行统计分析。（3）病理学观察：各组大鼠在肺泡灌洗完毕后处死，经肺动脉插管灌注4%多聚甲醛固定肺组织，取肺组织酒精脱水石蜡包埋切片，厚度为5μm，行苏木精伊红（HE）染色，镜下观察肺组织气道炎症性细胞浸润，气道平滑肌增厚等病理学改变。

1.7 统计学处理 采用 SPSS15.0软件，数据以（±s）表示，两两比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组血清总IgE含量比较 见表1。定喘汤各剂量组与正常对照组比较有显著差异（P＜0.05）；定喘汤各剂量组、正常对照组与哮喘模型组比较有显著差异（P＜0.05）；定喘汤低、中、高剂量组比较无显著差异（P＞0.05），但随着定喘汤剂量增加，血清总IgE水平呈下降趋势。

表1 各组血清总IgE含量及EOS比较 （±s）

表1 各组血清总IgE含量及EOS比较 （±s）

与正常对照组比较，*P＜0.05；与哮喘模型组比较，△P＜0.05。

EOS（%）3.96±0.98△29.16±2.81 5.73±1.99*△5.08±1.32*△4.79±1.11*△组 别 n 血清总IgE（IU/mL）正常对照组 10 10.82±1.33△哮喘模型组 10 32.51±1.93定喘汤低剂量组 10 14.48±1.07*△定喘汤中剂量组 10 13.07±1.65*△定喘汤高剂量组 10 12.19±1.41*△

2.2 各组肺泡灌洗液中EOS比较 见表1。由表1可见，定喘汤各剂量组与正常对照组比较有显著差异（P＜0.05）；定喘汤各剂量组、正常对照组与哮喘模型组比较有显著差异（P＜0.05）；定喘汤低、中、高剂量组比较无显著差异（P＞0.05），但随着定喘汤剂量增加，肺泡灌洗液中EOS逐渐减少。

2.3 HE染色 见图1。光镜下观察，大鼠哮喘模型组气管上皮细胞增多，基底膜、管壁平滑肌增厚，管腔狭窄，管壁内有肥大细胞、淋巴细胞和大量嗜酸粒细胞浸润，气管外层结缔组织亦可见增生。定喘汤各剂量组大鼠小气道壁黏膜及周围组织仅见少量肥大细胞、淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润，气道上皮细胞增生不明显。而正常对照组则无上述病理改变。

图1 各组肺组织病理组织图（HE，×200）

3 讨 论

支气管哮喘是由多种炎症细胞和炎症介质参与的气道慢性炎症[2]。其炎症细胞包括肥大细胞、EOS、T淋巴细胞、巨噬细胞等，而其中EOS是关键的效应细胞。气道炎症细胞释放的各种活性物质导致患者气道损伤，随之而来的是气道的修复和重塑，气道重塑是哮喘具特征性的病理改变。表现为气道平滑肌的增厚、气道基底膜增厚、炎症细胞浸润和腺体肥大，其结果导致相对不可逆的气道狭窄。笔者自拟定喘汤有确定的临床疗效，但治疗哮喘的病理机制尚不清楚，因此通过观察定喘汤对大鼠哮喘模型气道重塑和嗜酸粒细胞浸润的抑制作用，说明定喘汤治疗支气管哮喘的机制部分是通过抑制气道重塑和减少嗜酸粒细胞浸润而实现的。

[1]王文建，杨莉，王西华，等.川芎嗪对大鼠支气管哮喘模型气道重塑的影响及机制[J].中华结核和呼吸杂志，2004，27（12）：833-836.

[2]陈灏珠.实用内科学[M].11版.北京：人民卫生出版社，2004：1556.

Research of Dingchuan Decoction on Airway Remodelling and Eosinophil of Asthmatic Rats

YU Hong，JI Zhong-yu，ZHAO Hui，et al
Combination of Traditional Chinese and Western Hospital of Cangzhou City，Hebei Medical University（Cangzhou061001，Hebei）

Objective：To observe the effect ofDingchuan Decoctionon the airway remodelling and inhibition of inflammatory cells in rats with asthmatic.Methods：50 rats were randomly divided into 5 groups：the normal group，the model group，theDingchuan Decoctionlow-dose group，theDingchuan Decocitonmedium-dose group and theDingchuan Decocitonhigh-dose group.The chronic asthmatic model was established by repeated inhalation of ovalbumin.Rats were compared the morphological change of bronchial and lung tissues，the IgE of peripheral blood and the number of EOS in bronchoalveolar lavage fluid.Results：Comparing with the normal group and theseDingchuan Decoctiongroups，the bronchial and lung tissue morphology of the model group were significantly changed.Also，IgE of peripheral blood and the number of EOS in bronchoalveolar lavage fluid of the model group were significantly increased.There were some obvious differences among the the normal group and theDingchuan Decoctiongroups in the IgE and EOS.However，there were no remarkable differences among theseDingchuan Decoctiongroups in the IgE and the EOS.Conclusion：Dingchuan Decoctioncan treat asthma possibly by inhibition of the airway remodelling and decrease IgE and EOS

Dingchuan Decoction；Asthma；Airway remodelling；EOS

R285.5

A

1004-745X（2011）09-1437-02

河北省沧州市科技局科研课题（06ZD224）

2011-05-05）