博心通软胶囊质量标准研究

张耕，程璐，徐宏峰

(武汉市第一医院制剂中心，430022)

博心通软胶囊是本院自制制剂(批准文号:鄂药制字Z20093124，每粒0.4 g)，是以葱白为原料，经二氧化碳超临界萃取，并加入适当辅料而制成的软胶囊。临床上主要用于治疗脂肪肝和高脂血症等。为控制该制剂的质量，笔者在本实验中采用化学反应及薄层色谱法对其中甾体皂苷化合物和β-谷甾醇进行定性鉴别，并采用高效液相色谱法对β-谷甾醇进行含量测定，为博心通软胶囊的质量标准提供定性和定量检测方法[1-7]。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪(岛津LC-10A，检测器SPD-10A，浙大N2000色谱工作站)，电子天平(赛多利斯ME215S，d=0.01 mg)，β-谷甾醇对照品(中国药品生物制品检定所，鉴定用，批号:110851-200504)，β-谷甾醇对照品(西格玛公司，含量测定用，批号:058K3787)，博心通软胶囊(自制，批号:080319，080403，080510)，甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 鉴别

2.1 甾体皂苷化合物的鉴别取本品1粒，取其中内容物，溶于冰醋酸2 mL，加浓硫酸-醋酐(1∶20)1 mL，摇匀，最后反应颜色为污绿色。结果表明内容物中含有甾体化合物，空白辅料对鉴别均无干扰。

2.2 β-谷甾醇的鉴别取本品1粒的内容物，加甲醇2 mL溶解，滤过，作为供试品溶液。取未加葱白提取物的空白辅料，同法制成阴性对照溶液。另取β-谷甾醇对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB)实验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，展开距离为9.5 cm，结果见图1。

3 含量测定

3.1 色谱条件色谱柱:Dikma Technologies DiamonsilTMC18(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(98∶2);检测波长为210 nm，柱温30℃，进样量20 μL。β-谷甾醇和其他组分分离度R＞1.5，理论板数按β-谷甾醇峰计算应不低于2 000。

图1 3种溶液的薄层色谱图

3.2 对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4 h的β-谷甾醇对照品适量，加甲醇制成每毫升含20 μg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物0.6 g，精密称定，置于25 mL量瓶，加甲醇适量，超声处理10 min使其溶解，并用甲醇稀释至刻度，经孔径0.45 μm滤膜过滤，取续滤液即得。

3.4 专属性实验按本品处方制备不含葱白提取物的阴性对照，同“3.3”项下制备方法制得阴性对照溶液。按拟定的色谱条件进行实验，结果供试品溶液主峰保留时间与对照品溶液主峰保留时间一致，阴性对照在β-谷甾醇对照品色谱峰相应的保留时间处没有出峰，表明处方中的其他成分对β-谷甾醇测定无干扰，结果见图2。

3.5 线性关系考察精密称取β-谷甾醇对照品5.28 mg，置20 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得对照品储备液;分别精密量取该储备液0.5，1，2，3，4，5 mL置20 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀;分别吸取20 μL注入液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程:Y=1.968 6X+0.001 6，r=0.999 7)。可见β-谷甾醇在6.6～66.0 μg·mL-1范围内，峰面积与浓度的线性关系良好。

3.6 精密度实验取β-谷甾醇对照品溶液，按拟定色谱条件注入高效液相色谱仪，连续进样6次，记录β-谷甾醇峰面积，RSD为1.58%，结果显示精密度良好。

3.7 稳定性实验取供试品溶液，在拟定的色谱条件下，分别于0，3，6，9，15，24 h进样，记录β-谷甾醇峰面积，RSD为0.84%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

3.8 重复性实验取博心通软胶囊(批号:080319)，按照“3.3”项下供试品溶液制备方法平行制备6份，照“3.1”项下色谱条件测定β-谷甾醇的含量。平均含量为0.56 mg·g-1，RSD为1.15%，结果表明本方法重复性良好。

3.9 回收率实验精密称取β-谷甾醇对照品5.92 mg，置50 mL量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，得对照品储备液。精密称取已知含量的博心通软胶囊(批号:080319，0.56 mg·g-1)9份，分别精密加入β-谷甾醇对照品储备液1.0，2.0，3.0 mL，按“3.3”项下供试品溶液制备方法处理并按拟定的色谱条件测定并计算回收率，结果平均回收率为98.1%，RSD为1.53%，结果见表1。

表1 β-谷甾醇加样回收率实验结果

3.10 供试品含量测定取博心通软胶囊，按“3.2”及“3.3”项下方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件进行测定，按外标法以峰面积计算含量，结果见表2。

表2 β-谷甾醇含量测定结果

4 讨论

葱属植物中大部分研究仅局限于薤白及大蒜等少数几个品种，有关葱的研究报道在国内外几乎为空白，葱白多用于复方制剂或民间偏方，将其作为主药制成制剂应用于临床，目前笔者尚未见报道。笔者在本实验中对博心通软胶囊的质量标准进行了研究，曾经采用香草醛-高氯酸比色法测定制剂中甾体化合物的含量，但最终选择专属性较高的高效液相色谱法测定β-谷甾醇的含量。

4.1 检测波长的选择取β-谷甾醇对照品适量，用甲醇稀释至一定浓度，在190～400 nm波长进行紫外扫描，结果β-谷甾醇在约203 nm有最大吸收，但是空白辅料与溶剂在203 nm处均有一定程度的吸收，为了排除干扰，选择210 nm作为检测波长。

4.2 检测线与定量限按信噪比为3∶1，测得β-谷甾醇的最低检测浓度为2.15 μg·mL-1，最低检测量为0.04 μg;按信噪比为10∶1，测得β-谷甾醇的最低定量浓度为8.6 μg·mL-1，最低定量限为0.17 μg。

4.3 流动相的选择笔者曾经采用甲醇-0.1%磷酸(98∶2)[8]流动相体系，结果峰形和分离度不理想，后改用甲醇-水的流动相体系，经调节比例甲醇-水(98∶2)后得到了较好的理论板数和分离度。

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