497株肠杆菌科细菌耐药性分析

谷 巍,尚 峨,张晓静,姚兴伟*,刘百歌*

(1.吉林公安边防总队通化支队卫生队,吉林通化 134000;2.北京中医药大学第一临床医学院;3.吉林大学中日联谊医院）

革兰阴性杆菌尤其是肠杆菌科细菌目前是临床感染中最重要的病原菌,也是医院感染中较为常见的病原菌。为了解临床肠杆菌科菌耐药性,我们对2009年10月-2010年9月间我院临床标本中分离出的497株肠杆菌科细菌进行了分析,现报道如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源无菌方法采集标本进行细菌培养获得2009年10月-2010年9月我院临床标本中分离出的肠杆菌科细菌497株。

1.2 细菌培养和鉴定按《全国临床检验操作规程》进行,培养分离得到的纯种菌在生物梅里埃公司的VITEK-32细菌鉴定仪上进行菌种鉴定。

1.3 药物敏感性试验药敏试验 按CLSI推荐的纸片扩散法(K-B法）,判断标准按CLSI2009年版。

1.4 超广谱β-内酰胺酶检测(1）双纸片协同法检测超广谱β-内酰胺酶:选用阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟、氨曲南药敏纸片。将初筛可疑菌株按K-B法操作,将阿莫西林/克拉维酸纸片贴于M-H琼脂平皿中央,周围分别贴头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟、氨曲南药敏纸片,每种纸片于中央纸片间距20 mm。经35℃培养18-24小时观察结果,如发现任意一个纸片和阿莫西林/克拉维酸纸片间出现协同效应,即判断为产ESBLs菌株。(2）ESBL确证试验[1]:按CLSI确证试验,将初筛可疑菌株用头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸纸片作纸片法药敏试验。经35℃,18-24小时观察结果,含克拉维酸和不含克拉维酸的抗生素纸片间的抑菌环直径相差≥5 mm可证实产ESBLs。

1.5 质量控制以金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠埃希菌ATCC25922为质控标准菌株。

1.6 统计学分析用WHONET5.4进行。

2 结果

2.1 临床分离的常见肠杆菌构成由表1可以看出,2009年10月-2010年9月从我院临床标本中共分离出497株常见的革兰阴性肠杆菌,构成比占前三位的分别是大肠埃希菌198株(39.8%）,肺炎克雷伯菌115株(23.1%）,阴沟肠杆菌110株(22.1%）其他肠杆菌科细菌74株(15.0%）。

表1 常见肠杆菌分离情况

2.2 临床分离肠杆菌在各种标本中的分布我院临床分离出的肠杆菌科细菌主要来自尿液标本(275株）见表2。

表2 497株肠杆菌在不同标本中的分布情况

2.3 肠杆菌对常用抗菌药物的耐药性肠杆菌科细菌对15种常用抗菌药物的耐药率见表3。大肠埃希菌和克雷伯菌对抗菌药物的耐药率,见表4。

3 讨论

在我院2009年-2010年间检出的肠杆菌科细菌中检出率排在前三位的分别为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的菌株为100株(20.1%）,ESBLs可以通过接合、转化和转导等形式使耐药基因在细菌间扩散,从而造成严重的医院交叉感染和院外耐药菌的扩散[2]。同时,随着三代头孢菌素的广泛应用,在药物的选择性压力下也促进了产ESBLs菌株的产生。

表3 肠杆菌科细菌对抗菌药物的耐药率

从表4可以看出,产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药率明显高于非产ESBLs株。产ESBLs菌不仅对头孢菌素和氨曲南耐药,而且对氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类交叉耐药[3]。根据CLSI2009年规定[1],对于产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,即使体外试验对青霉素类、头孢菌素类、单环β-内酰胺类抗菌药物敏感,也应报告耐药。在我们的资料中,产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对这些药物也有一定的敏感率,这会误导临床治疗。因此,加强临床微生物实验室对产ESBLs菌株的检测及其药敏结果的正确报告,对指导临床用药具有十分重要的意义。

表4 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药率

碳青霉烯类抗菌药亚胺培南和美罗培南对产ESBLs和非产ESBLs菌株的敏感率为100%,这与碳青霉烯类抗菌药物特殊的空间构象有关[4],因此目前碳青霉烯类抗菌药物是治疗产ESBLs菌感染的首选药物。但国内外已有报道指出[5],已经分离出耐碳青霉烯类抗菌药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,这可能由于碳青霉烯类抗菌药物的广泛应用,造成其耐药菌株逐渐产生,因此,应引起足够的重视。

[1]Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing:Nineteenth informational supplement

[2]徐加勤,朱红国,曹娟,等.肺炎克雷伯菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药分析[J].实用医学杂志,2008,24(10）:1817.

[3]Jacoby GA,Han P.detection of extended-spectrum beta-lactamases in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli[J].J Clin Microbiol,1996,34(7）:908.

[4]Jacoby GA,Archer GL.New mechanisms of bacterial resistance to antimicrobial agents[J].N Engl J Med,1991,324(9）:601.

[5]蒯守刚,邵海枫,王卫萍,等.肺炎克雷伯菌介导碳青霉烯类耐药的基因型检测[J].2008,5.