249例儿童脑脊液胱抑素-C结果分析

王均乐

(南京医科大学附属南京儿童医院,南京 210008）

胱抑素C(Cystatin C,简称CysC）亦称半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,是一种由120个氨基酸组成,分子量为13kDa的低分子量、碱性非糖化蛋白质。CysC基因在包括肾、肝、胰、肠、胃、肺及胎盘等所有组织中持续地转录和表达。研究发现CysC是半胱氨酸蛋白酶抑制物家族的成员之一[1],是目前发现的对组织蛋白酶B抑制作用最强的抑制物。同时CysC对木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、组织蛋白酶H及L也有抑制。近来临床应用中血清CysC被作为反映肾小球滤过率的灵敏指标而受到重视,对血中胱抑素C的报道也很多,而对儿童脑脊液胱抑素-C水平了解较少。为此,本文调查了249例儿童脑脊液胱抑素-C水平,旨利用脑脊液胱抑素-C为临床疾病提供诊断和治疗依据。

1 资料和方法

1.1 临床资料249例儿童脑脊液来源于我院住院儿童,均为无神经系统疾病及相关症状和病史的外科病区的患儿,无炎症感染,无脑膜病变,头颅CT/MRI和脑电图检查均正常。年龄2天到15岁,其中男性128例(＜1个月20例,1月-≤1岁32例,1岁-≤3岁28例,3岁-≤7岁26例,7岁-15岁22例）,女性121例(≤1个月 21例,1月-≤1岁30例,1岁-≤3岁31例,3岁-≤7岁19例,7岁-15岁20例）。脑脊液常规:外观均为无色透明、蛋白定性阴性、细胞计数正常。生化检查:脑脊液糖、蛋白含量、氯化物、乳酸脱氢酶和腺苷脱氨酶均正常。微生物检查:细菌培养均为无菌生长。

1.2 仪器和试剂日立7600-20全自动生化分析仪。北京利德曼生物技术有限公司提供的CysC试剂盒、质控品和校准品。

1.3 方法用无菌方法抽取脑脊液,采用液相免疫胶体金法,3 h内完成测定。同时测定该患儿血清中胱抑素C。该试剂盒的试剂2选择纳米级胶体金作为胱抑素C抗体的标记物,在反应过程中标记胱抑素C抗体和血清中的抗原结合而发生凝聚,反应液在特定波长下吸光度发生改变以达到检测目的。经过标记的抗体提高了试剂检测灵敏度,最低检测限达到毫克级,完全满足了临床检测灵敏度的要求。经过全面的性能测试,试剂具有检测范围宽,重复性好,抗干扰性强的特点。试剂应用多点定标和非线性校准,可在全自动生化分析仪上自动完成,检测时间缩短至10分钟以内,极大地方便了临床检测应用。

1.4 统计学处理计量资料采用¯x±s表示,应用SPSS13软件包进行统计学分析。按年龄和性别分组,组间比较用单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

249例儿童脑脊液CysC检测结果见表1。1岁前其CysC水平高于1岁后各组,而1岁-、3岁-、7岁-各组间则无统计学差异,趋于稳定。而各年龄组男女性别间亦无统计学差异。血清CysC检测结果见表2。其变化趋势及相互关系与脑脊液检测结果相同。

表1 249例儿童脑脊液 CysC检测结果(±s）

表1 249例儿童脑脊液 CysC检测结果(±s）

注:与≤1月组比较,[1]P＜0.05,[2]P＜0.01;与1月-≤1岁组比较,[2]P＜0.01;与1岁-≤3岁组比较,[3]P＞0.05

组别 男性 女性n CysC(mg/L）n CysC(mg/L）≤1月 20 9.16±1.69 21 9.84±1.65＞1月-≤1岁 32 7.58±1.89[1] 30 8.83±1.79 1岁-≤3岁 28 4.66±1.33[2] 31 3.89±1.26[2]3岁-≤7岁 26 4.08±1.32[2][3] 19 3.18±1.13[2][3]7岁-≤15岁 22 3.76±1.11[2][3] 20 3.08±0.98[2][3]

表2 249例儿童血清CysC检测结果(±s）

表2 249例儿童血清CysC检测结果(±s）

组别 男性 女性n CysC(mg/L）n CysC(mg/L）≤1月 20 1.86±0.32 21 1.90±0.29＞1月-≤1岁 32 1.66±0.28 30 1.72±0.23 1岁-≤3岁 28 0.86±0.11 31 0.91±0.10 3岁-≤7岁 26 0.73±0.09 19 0.88±0.08 7岁-≤15岁 22 0.69±0.08 20 0.71±0.09

3 讨论

3.1 CysC是一种非糖基化的碱性蛋白质,主要分布于细胞外液中,如脑脊液、唾液、尿液、精液等,其中脑脊液中浓度最高,尿中的浓度最低[2]。它含有120个氨基酸,相对分子质量Mr=13 359,人体所有的有核细胞都可以持续的产生CysC,其产量不受其他因素(如年龄、性别、饮食、炎症等）的影响。肾脏是CysC的主要分解代谢器官,低分子量和高等电点(PI=9.3）使其能自由的通过肾小球基底膜,而且在近端肾小管几乎全部被重吸收和分解代谢。CysC是近年来逐步被临床关注的评价肾小球滤过率的一项敏感指标,自从Price等[3]在脑脊液中发现CysC后,仅有少量文章研究某种疾病的脑脊液中的CysC,如Asgeirsson等[4]测定HCCAA患者脑脊液中CysC水平并与健康人对照发现,HCCAA患者脑脊液中CysC浓度仅为健康人的1/3,而对儿童脑脊液中的CysC知之甚少。

3.2 据史清海[5]报道,新生儿1岁前,血清中胱抑素C水平最高,约为2.16 mg/L。表1、表2结果比较,儿童脑脊液中CysC含量比血清中高,其中一岁前脑脊液中的CysC是血清中CysC的4-5倍。与其它组比较,≤1月组男女儿童脑脊液中CysC含量,都高于其它各年龄组,差异具统计学意义。一岁后儿童脑脊液中CysC含量趋于稳定,3岁—≤7岁组、7岁—15岁组男女儿童脑脊液中CysC与1岁—≤3岁组比较,差异不具统计学意义。表明儿童脑脊液中CysC在一岁前比一岁后含量高,一岁后脑脊液中CysC含量变化不大。

3.3 对各组男女间脑脊液中CysC进行统计学分析,各年龄组男女间的差异均不显著,均为P＞0.05,表明儿童脑脊液CysC浓度在不同性别之间差异无统计学意义,因此没必要建立不同性别的脑脊液CysC参考范围。

[1]余洪立.血清胱抑素 C测定的方法学研究进展[J].广西医学,2004,26(3）:366.

[2]顾春瑜,郑 磊.血清胱抑素C在评价肾移植患者肾功能中的应用[J].国外医学◦临床生物化学与检验学分册,2004,25(6）:559.

[3]Price CP,Finney H.Developments in the assessment of glomerular filtration rate[J].Clin Chim Acta,2000,297(122）:55.

[4]Asgeirsson B,Haebel S,Thorsteinsson L,et al.Hereditary cystatin C amyloid angiopathy:Monitoring the p resence of the Leu268→Gln cystatin C variant in cerebrosp inal fluids and monocyte cultures by MS[J].Biochem J,1998,329(Pt 3）:497.

[5]史清海,占丽娜,路西春,等.血胱抑素C测定对新生儿窒息后肾功能损伤的评价[J].中国小儿急救医学,2006,13(4）:373.