银杏达莫注射液中双嘧达莫及其制剂含量测定研究进展

徐世霞

广西壮族自治区北海食品药品检验所，广西北海536000

双嘧达莫 (又称潘生丁)为一种含氮杂环的嘧啶类药物，化学式为C24H40N8O4，是一类较强的冠状动脉血管扩张剂，也是一种受体阻断剂，它能促进侧枝循环发挥疗效，临床上主要用于治疗和预防心绞痛，心肌梗死，还能抑制血小板聚集，防止血栓形成［1］。随着双嘧达莫临床应用的扩大，其相关制剂的应用也更为广泛，质量控制相关研究报道也更多。本文就近年来以下测定方法在双嘧达莫含量测定中的应用进展报道作一综述，供今后对双嘧达莫及制剂中双嘧达莫含量测定研究参考。

1 高效液相色谱法

朱旭等［2］用高效液相色谱法测定双嘧达莫缓释片的含量，采用Eclipse XDB C18色谱柱，流动相为甲醇:水:磷酸:二乙胺 (275:225:0．3:0．1);检测波长:283nm;结果双嘧达莫在0.16～1.6μg范围内线性关系良好，平均回收率为100.63%。毕雨萌等［3］建立了银杏达莫注射液中双嘧达莫、槲皮素、山柰素和异鼠李素4种成分的反相高效液相色谱分析方法。他们选用SCIENHOME Kromasil C18柱，甲醇—0.4%磷酸溶液 (55:45)为流动相，于360nm测定银杏达莫注射液中上述4种成分的含量。结果双嘧达莫、槲皮素、山柰素和异鼠李素分别在21.7～261.1μg/m L，8.0 ～ 96.0μg/mL、7.75 ～ 93.0μg/mL 及 5.75 ～69.0μg/mL内峰面积与浓度呈良好的线性关系。4种成分的平均回收率分别为100.3%、100.0%、99.9%、99.8%。杨燕云等［4］建立了测定阿司达莫缓释片含量的方法。采用HPLC法，色谱柱为 Diamonsil C18柱，流动相为甲醇—0.05 mol/L磷酸二氢钾缓冲液 (52:48)，检测波长275 nm。结果双嘧达莫的线性范围为20～120μg/ml，低、中、高3种浓度的平均回收率分别为98.6%±2.3%、99.0%±1.6%、101.4% ±2.3%。陈岐信等［5］建立了高效液相色谱法同时测定双嘧达莫阿司匹林胃内漂浮片的含量。采用Zorbax SB－C18色谱柱，流动相为甲醇—水—三乙胺—高氯酸 (50:48.75:0.75:0.5)。检测波长280nn。结果:双嘧达莫和阿司匹林分别在80～400mg/L和10～50mg/L浓度范围内线性关系良好，平均回收率分别为99.09%和98.73%。

2 非水滴定法

曾毅等［6］探讨了高氯酸非水滴定法和高效液相色谱法测定双嘧达莫原料药含量的可行性。试验中非水滴定法采用电位法指示终点，并考察了不同溶剂对滴定的影响;HPLC法中，色谱柱为C18柱，流动相为乙腈—20mmol·L－1磷酸二氢钾 (含1．0%三乙胺，磷酸调pH至4．0)=35:65;并与《中国药典》规定的溴酸钾滴定法进行比较。试验结果为:非水滴定法、HPLC法和溴酸钾滴定法测得双嘧达莫的含量分别为101.36%、101.11%、100.56%。通过试验可知高氯酸非水滴定法和HPLC法均可用于双嘧达莫原料药的含量测定，且高氯酸非水滴定法操作更简便、快捷。

3 电化学法

李潇［7］报道了用聚氯乙烯膜双嘧迭莫电极法测定双嘧迭莫片中双嘧迭莫含量的方法。试验利用该电极对双嘧达莫的响应，测定双嘧达莫片含量。结果电极的Nermt响应范围为1.0×10－2～ 4.8×10－2mol/L，级差为 40mv/pC，检出限为3.2×10－5mol/L。通过试验可知聚氯乙烯膜电极法可简便、快速、准确地检测片剂中双嘧达莫的含量。李利军等［8］在玻碳电极上成功地制备了多壁碳纳米管修饰电极。研究了双嘧达莫 (DPD)在该修饰电极上的电化学行为。基于表面活性效应，得知十二烷基磺酸钠 (SDS)可提高DPD在多壁碳纳米管修饰电极的氧化电流，修饰电极对其具有明显的增敏作用，并对存在的机理作了探讨。在SDS介质存在下，通过DPD在多壁碳纳米管修饰电极上的氧化和高锰酸钾在另一电极上的还原构建不可逆双安培检测体系，建立直接测定DPD的新方法。在0.05mol/L H2SO4介质中，DPD氧化峰电流与其浓度在1.5×10－6～1.0×10－3mol/L范围内呈线性关系，方法检出限为8.0×10－7mol/L。陈连山［9］报道了一种以双嘧达莫与碘分子形成的缔合物为电活性物的PVC膜双嘧达莫涂丝选择电极，测定了双嘧达莫片的含量。电极的线性响应范围为1.0×10－2～4.0×10－5mol/L，级差电位为56mV/pC，检测限为2.6×10－5mol/L。该电极响应迅速，重现性好，结果与药典法相符。

4 化学发光法

化学发光是一种由化学反应引起的光辐射现象。它是基于分子发光强度和被测物含量之问的关系建立的分析方法［10］。石文兵［11］建立了反胶束化学发光法测定双嘧达莫含量。其利用在酸性条件下，双嘧达莫分子中氮原子质子化后与阴离子AuCl4－1形成离子缔合物，被氯仿带入鲁米诺的氯化十六烷基三甲基铵反胶束中，离解出来AuCl4－1立即与鲁米诺产生化学发光。在一定浓度范围内，发光强度与双嘧达莫的含量成线性关系，从而间接测定双嘧达莫的含量。结果:在优化的试验条件下，双嘧达莫的检测线性范围为0.01～25mg/L，检出限为0.3μg/L。试验结果表明该法简单、灵敏，可用于针剂和片剂中双嘧达莫的测定。赵小辉等［12］在pH=1.98缓冲溶液中，利用双嘧达莫可与染料探针曙红Y通过相互结合，产生以315nm为特征峰的共振光散射增强信号。在该特征波长下测定的增强共振光散射强度与双嘧达莫浓度在一定范围内呈线性关系，据此建立了测定痕量双嘧达莫的共振光散射法。当曙红Y的浓度为 3.0×10－5moL/L时，双嘧达莫的检出限可达16.1nmoL/L。同时进行了实际样品的测定，回收率为(99.2±3.3)% ～ (102.0±1.7)%。刘清慧等［13］研究了双嘧达莫在铁氰化钾－鲁米诺化学发光反应体系中的后化学发光反应，并在研究其反应的动力学性质、化学发光光谱、荧光光谱以及一些相关问题的基础上，探讨了反应机理;合成了双嘧达莫的分子印迹聚合物，以此聚合物为分子识别物质，利用铁氰化钾－鲁米诺－双嘧达莫后化学发光体系，建立了测定双嘧达莫的高选择性分子印迹－后化学发光分析方法。所建方法的线性范围为1.0×10－8～1.0×10－6g/mL，检出限为3 ×10－9g/m L。饶志明等［14］提出了双嘧达莫与高锰酸钾和罗丹明B的化学发光新体系，并发现表面活性剂吐温－80可显著增强该体系的化学发光，据此建立了流动注射化学发光测定双嘧达莫的新方法。该方法选择性好，灵敏度高，线性范围宽，双嘧达莫在5.0×10－8～5.0×10－8g/mL范围内与发光信号呈线性关系，检出限1.7 ×10－8g/mL。

5 其他方法

随着各种新技术的发展，近年来运用新技术新仪器测定双嘧达莫含量的报道也越来越多。李华侃等［15］用光度法研究了双嘧达莫与氯冉酸之间发生的电荷转移反应，其中双嘧达莫是电子给予体，氯冉酸是电子接受体，反应介质是乙醇－丙酮混合溶剂。应用等摩尔连续变换法和摩尔比法测得荷移络合物的组成为1:1，稳定常数为3.9×104。络合物在526nm波长处有最大吸收，双嘧达莫浓度在10～380mg/L范围内服从比耳定律，相关系数为0.9996，表观摩尔吸光系数为1.34×103L/mol/cm，回收率为98.4%。应用该法可以快速测定双嘧达莫片中有效成分的含量，结果满意。彭慧等［16］建立一种简便、快速的高效液相色谱一质谱联用法 (HPLC－ESI－MS)测定中国健康人体内血浆中双嘧达莫浓度的方法。笔者以乙腈沉淀处理血样，采用MACHEREY－MAGEL NUCLEODUR 100－5 C18柱，流动相的组成为乙腈－水 (含30mmol/L醋酸铵)=41.3:58.7;流速0.25mL/min。质谱条件采用正离子检测的电喷雾电离方式 (+)ESI，其喷雾电压3.30kV，第一级锥孔电压59V;扫描方式为选择离子监测 (SIR)，用于定量分析监测的离子双嘧达莫为 505.6m/z，唑吡坦 (内标)为308.3m/z。试验结果为:双嘧达莫最低检测限为3.0μg/L。线性范围20～2500μg/L。高、中、低浓度回收率分别为105.0%、105.6%、100.4%。该方法灵敏度高、快速、简便、无杂质干扰，适合于双嘧达莫血药浓度检测及药物动力学研究。

6 结语

双嘧达莫为一种含氮杂环的嘧啶类药物，结构较为复杂，这使得有关双嘧达莫含量测定方法的研究报道很多。HPLC法因仪器普遍、操作简单、重现性好而优于其他方法而被大量应用。电化学法具有较高的选择性和灵敏度、修饰电极易于制作、稳定性和重现性良好、样品处理方法简单快速，适合于实时在线分析。化学发光法是近年来发展起来的一种灵敏度极高的痕量元素分析新技术，其具有灵敏度高、分析速度快、分析成本低、线性范围宽、仪器设备简单等特点。笔者认为随着发光检测体系的不断优化，新的高效能发光试剂和发光体系的不断开发，该技术和其他检测技术联用的不断发展，化学发光法的应用前景将十分广阔。

［1］ 张文升，李安良．药物化学 ［M］．北京:高等教育出版社，1999:296．

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［3］毕雨萌等．RP－HPLC同时测定银杏达莫注射液中4种成分的含量［J］．中成药，2007，29(11):1620－1623．

［4］杨燕云等．HPLC测定阿司达莫缓释片的含量［J］．华西药学杂志，2007，22(3):336－338．

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