山羊传染性胸膜肺炎病原及诊断方法的研究进展

刘 远，林仕欣，李文杨

（福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州 350013）

山羊传染性胸膜肺炎（contagious caprine pleruopneumonia，CCPP）是由山羊支原体山羊肺炎亚种（Mycoplasma capricolum subsp.capripneumonia，Mccp）引起的山羊独有的一种急性或慢性呼吸道传染病，以纤维素性胸膜肺炎为主要特征［1］。该支原体最早由MacOwan和Minette分离得到，被感染羊群无明显年龄和性别差异，发病率和死亡率均较高，广泛流行于非洲和亚洲养羊国家，危害极大，已经被世界动物卫生组织（OIE）列入重要疾病目录［2］。尽管CCPP的发生至今已有近百年的历史，但对其病原的认识一直比较混乱。国内在分离到Mccp以前，长期认为丝状支原体山羊亚种（M.mycoides subsp.Capri，Mmc）才是该病的病原［3］，除此之外，绵羊肺炎支原体（M.ovipneumoniae，Mo）感染山羊后也能引起类似山羊传染性胸膜肺炎的临床症状，经常被误认为是CCPP的病原之一［4］。造成这种病原认识不清的主要原因是由于支原体分离培养非常困难，且临床上又常可能被其它呼吸道疾病干扰而最终不能确诊［5］。长期以来，内蒙古、宁夏、甘肃、四川、湖南、福建等地均有该病暴发的报道［6］，但各地病原分离试验也证实了各地引起该病的病原差异性和复杂性。

1 病原

1.1 丝状支原体山羊亚种

在国内，丝状支原体山羊亚种长期被当作是山羊传染性胸膜肺炎的病原。王栋等最早用血清学方法鉴定了国内4株分离自传染性胸膜肺炎山羊的支原体，并认为Mmc在我国广泛存在［3］。一般认为Mmc不感染绵羊，加之长期以来对支原体基因组序列研究的缺乏，导致国内其它研究者也认为该支原体是引起我国传染性胸膜肺炎的病原［7］。

随着支原体研究的深入，逐渐形成了直接根据支原体基因组序列在进化上的关系进行支原体的分类。李媛等应用序列分析等手段对引起国内传染性胸膜肺炎病原的支原体进行了分子特征研究，结果认为该病原应归为Mccp［8］。虽然Mmc并不是真CCPP的病原，但可引起临床上类似于CCPP的胸膜肺炎，感染山羊高热、不食，解剖可见损伤主要在肺部、胸膜和心包。肺小叶不同程度肝样变，小叶间隔扩大。胸膜常被渗出性纤维覆盖并与膈膜、心包和胸壁粘连。病变器官的淋巴结，尤其支气管、纵膈、下颌及咽后淋巴结增大、水肿、出血。

1.2 绵羊肺炎支原体

绵羊肺炎支原体是引起绵羊肺炎支原体病的病原，以咳嗽、喘气、渐进性消瘦以及肺间质增生性炎症为特征的慢性呼吸道疾病。该支原体最先由Mackay于1963年从发生肺炎的绵羊肺中分离到。随后Cottew在澳大利亚绵羊的病肺中也发现该霉形体，并由Carmichael等证明了这种霉形体的致病性，建议将其命名为MO［9］。

MO还能感染山羊，最早是Linvingston等（1979）从患肺炎西班牙和安哥拉山羊中分离。我国王栋等1991年就报道了从疑为山羊传染性胸膜肺炎的病料中分离到12株MO和1株精氨酸霉形体，通过人工感染试验，证明了对山羊的致病性，同年邓光明等也报道了MO是甘肃省华池县山羊传染性胸膜肺炎的病原［4］。杨发龙等从四川省乐至县发生胸膜肺炎性传染病的山羊群中检测到了绵羊肺炎支原体，且未发现丝状支原体簇成员，表明绵羊肺炎支原体是引起山羊群发生胸膜肺炎的病原，同时说明绵羊肺炎支原体仍然是目前山羊支原体性肺炎的重要病原之一［10］。

1.3 山羊支原体山羊肺炎亚种

山羊支原体山羊肺炎亚种（M.capri.ssp.capripneumoniae，Mccp）最早是MacOwan等1976年在肯尼亚分离出来的，原称生物型F38（模式株）。Mccp只感染山羊，现已被国际公认为山羊传染性胸膜肺炎的唯一病原。但因为这种支原体在体外极难培养，目前分离到病原的不多。我国辛九庆等从患肺炎山羊分离到一株支原体，经分子生物学试验初步鉴定为Mccp，这是我国首次报道有Mccp的存在［11］。CCPP特征性病变仅限于胸腔，单纯Mccp感染不伴随其它器官的损害。CCPP典型病例表现为极度高热（41～43℃），感染羊无年龄性别差异，怀孕羊易发生流产。高热2～3 d，呼吸加速，显得痛苦，有时还发出呼噜声，持续性剧烈咳嗽。最后山羊不能运动，两前肢分开站立，脖子僵硬前伸，有时嘴里不断流出涎水。死后剖检显示胸腔纤维蛋白性渗出（稻草色），肺部伴有大范围的肝样变和纤维性胸膜炎。

2 诊断方法

2.1 临床诊断

一般而言，根据病程和临床症状，可分为最急性、急性和慢性3种类型。最急性病初体温增高，可达41～42℃，极度萎顿，食欲废绝，呼吸急促而有痛苦的鸣叫，数小时后出现肺炎症状，呼吸困难，咳嗽，并流浆液性带血鼻液，肺部叩诊呈浊音或实音，听诊肺泡呼吸音减弱、消失或呈捻发音。1～2 d后病羊卧地不起，呼吸极度困难并伴有全身颤动，粘膜高度充血发绀，最后衰弱，窒息死亡，病程一般为4～5 d。急性最常见，病初体温升高，继之出现短而湿的咳嗽，伴有浆性鼻漏，4～5 d后一侧胸膜出现肺炎症状，高热稽留不退，食欲锐减，呼吸困难和痛苦呻吟，腰背拱起，多数怀孕母羊发生流产，最后病羊极度萎顿衰弱而死，幸而不死者转为慢性。慢性多见于夏季，病程可维持2个月以上，病羊全身症状轻微，间有咳嗽和腹泻，被毛粗乱无光。

2.2 血清学诊断

根据不同支原体株在抗原结构上的差异，可以用血清学方法进行支原体疾病的诊断。目前，该病的血清学诊断方法有生长抑制试验、代谢抑制试验、表面荧光抗体试验（间接法）、直接补体结合试验（微量法）、间接血凝试验（IHA）、间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。然而，血清学方法的特异性较低，且支原体之间有交叉反应。近年来微量间接血凝试验（MIHA）常用来进行该疾病的流行病学调查，其原理是将可溶性抗原（或抗体）吸附于与免疫无关的小颗粒（载体）表面，此吸附抗原（或抗体）的载体颗粒在有电解质存在的适宜条件下可与相应的抗体（或抗原）发生凝聚反应，该方法操作简便，所需时间较少，但作为病原的确定灵敏性不高［12］。

2.3 分子生物学诊断

分子生物学的发展，一方面提供了支原体在基因组层面的进化关系，为羊传染性胸膜肺炎病原的确定提供了理论依据；另一方面，可以利用PCR技术检测病原的部分保守序列对疾病的病原进行确诊。李媛等（2007）应用序列分析对引起国内CCPP病原的支原体进行了分子特征研究，结果认为该病原应该归为Mccp。同时，张莉等、储岳峰等分别参照Mo、Mmc、Mccp标准株序列设计引物，建立了各病原相应的PCR快速诊断方法［12-14］。另外，鉴于临床上的复杂性，储岳峰等、宋勤叶等分别建立了可以同时特异性检测Mmc和Mo的双重PCR方法，大大提高了诊断效率，为该病的防治提供了有效的技术支持［15-16］。

3 研究展望

CCPP的流行早已为国内广大兽医工作者共识，但直到2007年才有1例Mccp被分离成功和鉴定的报道，这与中国生产实际中CCPP的流行情况存在极大的差异。目前，已知的3种支原体均能引起国内山羊群体羊传染性胸膜肺炎病，仅通过临床症状和病理观察难以区分临床发生的羊支原体肺炎是由哪种病原引起，确诊需要进行支原体分离鉴定，但受生长速度慢、培养困难等诸多因素限制，支原体分离率较低。国内外对CCPP的研究将仍然集中在病原的确定及快速诊断方法的建立两个方面。

虽然分离到的3种病原的血清学特征存在明显的交叉反应，然而三者的抗原特性、药敏性等方面均存在较大差别。因此，利用分子生物学技术，根据支原体基因组序列特征研究各支原体株在进化上的关系，并以此为依据进行支原体的分类，为羊传染性胸膜肺炎病原的确定提供科学依据，是科学防治该疾病的重点方向之一。Mccp株的发现表明该支原体也可能是我国羊支原体肺炎的优势病原之一，且临床感染情况更为复杂。因此，引进Mccp标准株，建立Mccp-Mmc-Mo三重PCR技术，是下一步我国羊支原体肺炎病原快速诊断技术的另一重点方向［15］。

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［4］邓光明，赵煊，梁桂香.类山羊传染性胸膜肺炎诊断和防治的研究［J］.中国兽医科技，1991，21（6）：3-6.

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