西洋参茎叶皂苷对局灶性脑缺血大鼠血清中S－100β含量的影响

鲁美君，关利新，赵鑫，王怀刚，朱丹，朱孝娟，苏云明

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;2.牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157000;3.齐齐哈尔市中医院，黑龙江 齐齐哈尔 161000;4.哈尔滨医科大学，黑龙江 哈尔滨 150081)

脑血管病目前在全球疾病的死因中居第3位。根据中国卫生部的统计，在全国主要城市中，脑血管病的死亡率居第2位，有的城市甚至是第1位，发病率高达125～180个/10万。我们国家的脑血管病从死亡率上看是全世界最高的国家，大概中国每年有150万人死于脑卒中。随着人口老龄化速度的加快和人群预期寿命的延长，脑血管病发病率和患病率呈逐年增高的趋势。

西洋参茎叶皂苷(PQS)是从西洋参茎叶中提取的总皂苷。经过研究发现，其具有多方面的药理作用。本实验通过线栓法建立大鼠局灶性脑缺血的模型［1－2］，通过ELISA法来检测脑缺血大鼠血清中 S－100β的含量的方法来探讨西洋参茎叶皂苷对脑缺血的保护作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

雄性Wistar大鼠，体质量(300±20)g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。西洋参茎叶皂苷由牡丹江医学院药理教研室自制。尼莫地平片(091201，西安博爱制药有限公司);酶联免疫试剂盒(美国R＆D公司);酶标仪(奥地利，anthos 2010);CFAP酶联免疫检测试剂盒(南京建成)。

1.2 动物分组及给药

Wistar雄性大鼠随机分成高、低剂量组、西药阳性对照组，模型对照组及假手术组5组。高剂量给予西洋参茎叶皂苷100mg/kg，低剂量给予西洋参茎叶皂苷50mg/kg，阳性对照组给予尼莫地平片21.6mg/kg，模型对照组及假手术组给予等容积生理盐水。各组均灌胃给药，连续7天，在末次给药后0.5h，对大鼠实施右侧大脑中动脉阻塞模型手术。

1.3 右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型制作

线栓的制备:单股尼龙线，直径 0.23mm，长30mm，经酒精灯烧灼，使其一端形成光滑圆球状，制成线栓，经75%酒精消毒后备用。

水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。再将大鼠四肢固定于手术台上，颈部备皮，常规消毒。在大鼠颈正中部切开，手术显微镜下分离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA)以及 ECA和ICA的分支，并仔细分离迷走神经(神经节的刺激和损伤会引起大鼠呼吸骤阻)在ECA靠近ECA及颈内动脉(ICA)分叉处结扎ECA，在已分离的CCA上结扎其近心端，远心端用动脉夹阻断血流，并在CCA上预置一根缝合线。在CCA上位于动脉夹和结扎处之间剪一“V”形切口。将线栓球面端插入CCA上的切口，打开ICA上预置的动脉夹，将线栓经CCA插入ICA内，向前徐进，向上插至MCA起始部，稍遇阻力即停止徐进，此时自ECA、ICA分叉处计起，线栓推进长度约为18～20mm，造成MCA血供阻断。将预置在CCA上的缝合线扎紧，防止出血和栓子滑出。复位组织，逐层缝合皮肤，术毕。术中大鼠出现呼吸困难、出血过多者弃之。

假手术组手术时，只分离颈总动脉，但是不插入尼龙线，复位组织，逐层缝合皮肤。

1.4 神经功能缺损评分

大鼠脑缺血的判定及研究纳入标准采取五分法评分，于MCAO术后(大鼠意识恢复后30min)对脑缺血大鼠神经功能缺陷进行评分。

0分:无神经功能障碍;1分:左前爪不能充分外展;2分:行走时朝左转圈;3分:行走时朝左倾倒;4分:不能自主行走伴意识障碍。

MCAO术后计分在1～3分者纳入研究。各组选取MCAO术后合格大鼠10只，纳入研究。

大鼠术后24h取大鼠血液，离心后取血清。用酶标仪测定血清中S－100β的含量。酶联免疫试剂盒购自美国R＆D公司，检测仪器采用奥地利生产的anthos 2010酶标仪。

1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0软件进行统计学处理，其组间比较采用单因素方差分析。

2 实验结果

本实验观察了24h以后，PQS对MCAO模型大鼠血清中S－100β含量的影响。结果显示，在手术后模型组与假手术组比较，血清中的S－100β有显著增加，其差异具有显著性意义(P＜0.01)。同时高、低剂量组及阳性对照组与模型组比较，血清中的S－100β蛋白均有不同程度的减少，高剂量组、低剂量组和阳性对照组与模型组比较，具有显著性意义(P＜0.05)。

Table.1PQS MCAO rats on the content of S－100β(s)

Table.1PQS MCAO rats on the content of S－100β(s)

注:Compared with model group，aP ＜ 0.05;Compared with sham group，dP ＜0.01。

Group n Dose(mg·kg－1)S －100β(ng/ml)Model 10 等体积水 12.07±1.61d Sham 10 等体积水 0.70±0.39 PQS(H)10 100 9.79 ±2.14a PQS(L)10 50 10.29 ±1.49a Nim 10 21.6 9.42 ±1.92a

3 讨论

S－100β蛋白是神经组织蛋白的一种，是More于1965年首次发现，因其在中性条件下能溶解于100%饱和硫酸铵中而得名。它是一种小分子酸性的钙离子结合蛋白，分子量21 000道尔顿，S－100β蛋白在神经系统内的分布十分广泛，高浓度存在于神经胶质细胞或Shcwnan细胞中，被认为是神经胶质细胞的标志蛋白［3］。S－100β蛋白具有神经营养作用，能激活脑果糖1，6二磷酸醛缩酶和葡萄糖磷酸变位酶，从而调节细胞的能量代谢，促进神经的生长和损伤后的修复［4］。并能通过微丝、微管等骨架成分直接或间接的相互作用以维持星形胶质细胞的完整性。急性脑缺血时，大量的脑胶质细胞死亡会导致S－100β蛋白漏出到组织间液，同时急性脑缺血导致血管内皮细胞的死亡，血－脑屏障受损害，S－100β蛋白就越过血－脑屏障，自受损伤的脑组织释放，这就提示了在血浆中测定S－100β蛋白能用来监测脑缺血的病情程度及疗效。本实验通过酶联免疫法测定了MCAO模型大鼠血清中S－100β的含量，结果显示，PQS给药组大鼠血清中S－100β的含量低于模型组，说明了PQS能减轻大鼠的脑缺血损伤。在临床研究中我们认为，急性脑缺血早期诊断和治疗特别是超早期溶栓治疗是提高疗效，降低致残率最有效的方法。但传统的颅脑CT对脑缺血的诊断往往需要发病后24～48h才有阳性结果，有时会延误治疗。而S－100β在神经胶质细胞损伤时即出现在体液中，并与病变程度相关。这使我们对血清中S－100β的测定可以成为急性脑缺血早期诊断以及愈后程度的标志。

［1］白云，颜培宇，梁颖.活血熄风方对MCAO局灶性脑缺血模型大鼠脑皮质ICAM－1蛋白表达的影响［J］.中医药学报，2011，39(1):13－15.

［2］王怀刚，关利新，赵鑫，等.西洋参茎叶皂苷对局灶性脑缺血后大鼠血清中GFAP表达的影响［J］.中医药学报，2011，39(4):17－19.

［3］唐红霞，李文辉，施荣富，等.戊四氮致癎大鼠海马S－100β蛋白变化及其相关性研究［J］.临床神经病学杂志，2004，17(3):221 －222.

［4］张晓琴.急性脑梗死患者血清肝细胞生长因子S－100β蛋白变化的意义［J］.郧阳医学院学报，2008，27(5):405.