吴茱萸化学拆分组分的性味药理学评价——化学拆分组分抗炎作用的研究

杨志欣，孟永海，杨炳友，王秋红，匡海学

(黑龙江中医药大学北药基础与应用研究省部共建教育部重点实验室、黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040)

中药性味理论指导中医临床用药几千年，其成果极为丰厚。然而，由于其理论自身哲学气息浓厚，内容缺乏客观、规范化的评价体系，导致性味理论对现代医药学的指导意义呈下降趋势。因此，如何使深刻而丰富的性味理论得到科学的诠释是我们面临的迫切任务。遵循中医药学基本理论，本课题组提出了“中药一味一性，一药X味Y性(Y≤X)”的假说和基于中药性味可拆分性和可组合性的研究思路，并构建了中药性味理论研究的新模式［1，2］。吴茱萸为芸香科植物吴茱萸［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth］.、石虎［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinaLis(Dode)Huang］或疏毛吴茱萸［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang］的干燥近成熟果实。2010版《中国药典》收载，吴茱萸:辛、苦，热。为阐明吴茱萸辛味和苦味的物质基础，我们采用与吴茱萸性味功效相关的抗炎、镇痛、抗胃溃疡、止呕、止泻等复合药理学指标作为吴茱萸性味功效评价体系，对吴茱萸的各化学拆分组分的生物学效应进行了研究。本文报道吴茱萸化学拆分组分的抗炎作用结果。

1 实验材料

1.1 实验动物

昆明种小白鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g，合格证号为P00102007号，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供;Wistar大白鼠，雌雄各半，体质量(180±10)g，合格证号为P00102007号，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供。

1.2 药品与试剂

吴茱萸购自哈尔滨市药材公司(产地:贵州铜仁)，经黑龙江中医药大学药学院中药资源学教研室王振月教授鉴定为疏毛吴茱萸［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var bodinieri(Dode)Huang］的干燥近成熟果实;药理实验样品(蒸馏水;吴茱萸水煎液;7个化学拆分组分由实验室制备［3］);Evans Blue，Scientific research special exporation06/2009。

2 方法

2.1 对小鼠耳肿胀的影响［4］

昆明种小鼠90只，雌雄各半，按体质量随机分为9组，每组10只，分别为蒸馏水空白对照组、吴茱萸水煎液组、吴茱萸内酯组、生物碱1组、生物碱2组、醇沉组、20%乙醇洗脱组、95%乙醇洗脱组和挥发油组。各组禁食12h后灌胃给药，按小鼠体重0.2mL/10g－1给药。给药每日1次，连续4天，末次给药1h后，立即在小鼠左耳前后两面涂抹二甲苯20μL，2h后，将小鼠脱颈椎处死，用手术剪齐耳根剪下左右两耳片，用7mm直径打孔器，分别在同一部位打下圆耳片，用电子天平分别称两耳片的重量，每只鼠的左耳片重量减去右耳片重量作为肿胀度，并按下列公式求出各给药组的肿胀抑制率。

2.2 对大鼠足趾肿胀的影响［5］

Wistar大鼠90只，雌雄各半，按体质量随机分为9组，每组10只，分组同2.1。每日给药1次，灌胃量2.0mL/100g－1，连续5天。实验前在大鼠右后足踝关节处作标记，用足容积测定仪测定各鼠右后肢足容积两次，取平均值作为正常足容积。给药后30min，每只大鼠右后足跖部皮下进针至踝关节附近皮下注射10%新鲜鸡蛋清溶液0.1mL致炎，分别于致炎后0.5h、1h、2h、4h、6h 测定致炎足容积，按下列公式计算各大鼠致炎前后右后肿胀率变化值。

2.3 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响［5］

昆明种小鼠90只，雌雄各半，按体质量随机分为9组，每组10只。分组及给药同2.1。每日给药1次，连续4天，末次给药30min后，小鼠均经尾静脉注射1%的伊文思蓝溶液0.1mL/10g，随即腹腔注射0.6%的醋酸溶液0.2mL/只，20min脱颈椎处死，剪开腹腔，用6mL生理盐水洗涤腹腔，吸出洗涤液，3 000r/min离心15min，取上清液，于590nm测定各组动物腹腔洗涤液染料吸光度A值。

3 结果

3.1 对小鼠耳肿胀的影响

吴茱萸水煎液及各化学拆分组分对小鼠耳肿胀的作用结果见表1。

表1 吴茱萸及各化学拆分组分对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(s，n=10)

表1 吴茱萸及各化学拆分组分对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(s，n=10)

注:与空白对照组比较，*P＜0.05。

组别 剂量(g/kg)肿胀度(mg)肿胀抑制率(%)－ 11.76 ±3.09吴茱萸水煎液组 1.95 8.49 ±2.46* 38.5挥发油组 1.95 9.24 ±3.06* 21.4吴茱萸内酯组 1.95 10.94 ±2.97 7.0生物碱1 组 1.95 9.04 ±1.74* 23.1 95%乙醇洗脱组 1.95 10.45 ±3.25 11.1醇沉组 1.95 10.99 ±2.93 6.55生物碱2 组 1.95 10.27 ±2.10 12.8 20%乙醇洗脱组 1.95 9.23 ±2.85*空白对照组21.5

由表1可见，各组给药后吴茱萸水煎液组对二甲苯所致小鼠耳肿胀的抗炎作用与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01)，肿胀抑制率为38.5%。生物碱1组、20%乙醇洗脱组、挥发油组对小鼠耳肿胀的抗炎作用与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，抑制率分别为23.1%、21.5%及21.4%。

表2 吴茱萸及各化学拆分组分对大鼠足趾肿胀的影响(s，n=10)

表2 吴茱萸及各化学拆分组分对大鼠足趾肿胀的影响(s，n=10)

注:与空白对照组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

空白对照组 0.974 ±0.139 44.6 ±11.9 46.4 ±10.1 43.0 ±12.1 4*

3.2 对大鼠足趾肿胀的影响

吴茱萸水煎液及各化学拆分组分对大鼠足趾肿胀的作用见表2。10%新鲜鸡蛋清致炎的规律是0.5h就出现明显的足肿，此后肿胀继续加剧，1h达到最高值，2h后肿胀开始逐渐恢复。对大鼠足趾肿胀的抗炎作用，吴茱萸水煎液组与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，给药后0.5h就有缓解炎症的表现，但是与空白对照组比较作用不显著(P＞0.05)，1h与空白对照组比较有显著差异(P＜0.05)，该作用与空白对照组比较一直持续到6h(P＜0.01)。吴茱萸生物碱1组及20%乙醇洗脱组与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05)。其余各化学拆分组与空白对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。

3.3 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

吴茱萸水煎液组及各拆分组分对小鼠腹腔毛细血管通透性的抗炎作用结果见表3。可见，吴茱萸水煎液组、生物碱1组和20%乙醇洗脱组的抗炎作用与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05);其余各组与空白对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。

表3 吴茱萸及各化学拆分组分对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(s，n=10)

表3 吴茱萸及各化学拆分组分对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(s，n=10)

注:与空白对照组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

空白对照组 0.753±0.160 95%乙醇洗脱组0.687 ±0.114吴茱萸水煎液组 0.380 ±0.125＊＊醇沉组 0.682 ±0.161挥发油组 0.709±0.201 生物碱2组 0.628±0.212吴茱萸内酯组 0.665±0.095 20%乙醇洗脱组 0.408±0.103＊＊生物碱1组 0.559 ±0.152*

4 讨论

吴茱萸生物碱1组、20%乙醇洗脱组对三种炎症模型均显示较强的抗炎作用，此外挥发油组对小鼠耳肿胀模型也显示抗炎作用，故吴茱萸抗炎物质基础为生物碱1组分、20%乙醇洗脱组分、挥发油组分。

［1］匡海学，程伟.中药性味的可拆分、可组合性研究［J］.世界科学技术 －中医药现代化，2009，11(6):768－771.

［2］匡海学，王艳宏，王秋红，等.基于中药性味可拆分性和可组合性的中药性味理论研究新模式［J］.世界科学技术－中医药现代化，2010，12(6):1 －5.

［3］杨志欣，孟永海，王秋红，等.吴茱萸化学拆分组分的性味药理学评价－化学拆分组分的制备及其镇痛作用的研究［J］.中医药学报，2011，39(4):11 －14.

［4］李宗铎，赵君枚，李建生，等.毒素清颗粒抗炎作用的实验研究［J］.中国中医药科技，2006，13(1):42.

［5］陈奇.中药药理研究方法学［J］.北京:人民卫生出版社，1993:305，308.