桦褐孔菌粗多糖对急性感染弓形虫小鼠的存活时间及SOD的影响

刘 妍,鞠玉琳,刘利本

(延边大学农学院动物医学系,吉林 龙井 133400)

弓形虫病是由龚地弓形虫引起的一种分布极为广泛的全球性人兽共患病,可在人和牛、羊、猪、鸡等多种动物之间进行传播,世界平均感染率为25%～50%,严重的威胁人类的健康与生活[1]。弓形虫急性感染期患者治疗尚无理想药物,目前公认有效的西药有乙胺嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、复方胺甲唑、阿奇霉素、螺旋霉素、克林霉素等,但它们均有较大副作用。与西药相比,中药副作用较小,近些年有关中药治疗弓形虫病研究的报道很多,多数收到了很好的疗效[2]。为此本试验拟以桦褐孔菌粗多糖(IOCP)为研究对象,通过试验观察IOCP对急性弓形虫感染小鼠存活时间及体内主要脏器中超氧化物歧化酸(SOD)的影响,以期为探索一种用于治疗弓形虫病的有效药物提供依据。

1 材料与方法

1.1 动物 健康昆明系小鼠,雌雄各半,体重18～22 g,由延边大学医学院动物实验室提供。

1.2 虫株 弓形虫RH株由日本带广原虫病研究所惠赠。

1.3 药物及试剂 桦褐孔菌购自延吉市某药材专柜。提取粗多糖的含量为500 mg/mL,4℃冰箱保存。阳性对照药物蒿甲醚片剂,由昆明制药集团股份有限公司提供,每片含萘酚喹50 mg,青蒿素125 mg,用双蒸水配置成悬浊液,浓度3 mg/mL。

1.4 试剂 SOD活性检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.5 试验分组 分空白对照组、阴性对照组、阳性对照组(蒿甲醚)和IOCP组。每组20只小鼠。

1.6 动物模型建立 除空白对照组外,其余各组每只鼠均腹腔注射浓度为1×103/m L弓形虫速殖子。

1.7 给药 小鼠感染弓形虫4 h后灌胃给药,每天1次,灌胃量为0.2 m L/10 g体重。正常饲养,疗程14 d,观察至30 d。

1.8 观察小鼠一般情况 自感染后,每天观察小鼠有无拱背耸毛,拉稀;记录小鼠死亡时间、饮食及活动状况,直到30 d。

1.9 指标测定 分别在小鼠感染后第3天、第6天用羟胺法测定各组小鼠的血清、心、肝和肺组织中SOD活性;SOD活性检测方法按照试剂盒说明书操作。

1.10 组织匀浆制备 取小鼠心、肝、肺称重,在冷生理盐水中漂洗,滤纸拭干,再切取相应部位组织适当大小称重,加入组织重量9倍的生理盐水,置入匀浆器中在冰水中匀浆5 min,3000 r/min离心10 min,分别吸取0.1 m L上清液测定SOD活性。

1.11 统计学处理 采用t检验,用SPSS 11.5统计软件进行统计分析。

2 结果

2.1 小鼠一般情况 除空白对照组外,其余3组小鼠均不同程度的出现拱背耸毛、食欲下降,活动减少的情况,但阴性对照组的小鼠最为严重。接种弓形虫及治疗后各组小鼠存活时间见表1。

表1 各组小鼠存活时间比较

2.2 SOD检测结果 见表2。

表2 各组小鼠不同时间、不同脏器中SOD活性的测定)

表2 各组小鼠不同时间、不同脏器中SOD活性的测定)

注:第3天与空白对照组比较,P＜0.05(▲);第6天与阴性对照组比较,P＜0.05(△)

治疗天数 组别 只 血清SOD(U/mL) 组织匀浆(U/mg)心脏 肝脏 肺脏空白对照组 5 16.50±0.11 16.66±0.06 17.34±0.13 22.19±0.11第3天阴性对照组 5 23.60±0.11▲ 20.92±0.14▲ 20.14±0.17▲ 24.60±0.17▲阳性对照组 5 20.05±0.11▲ 17.48±0.11▲ 14.95±0.09▲ 22.39±0.12▲粗多糖组 5 20.46±0.07▲ 19.56±0.07▲ 17.24±0.09▲ 22.47±0.06▲第6天空白对照组 5 16.50±0.11 16.66±0.06 17.34±0.13 22.19±0.11阴性对照组 5 11.09±0.10 9.95±0.08 9.45±0.18 10.82±0.11阳性对照组 5 17.47±0.08△ 13.27±0.12△ 12.47±0.07△ 18.02±0.07△粗多糖组 5 17.70±0.10△ 16.90±0.09△ 13.97±0.17△ 18.48±0.08△

3 讨论

上述试验结果提示,IOCP及阳性药物均能有效的延长感染弓形虫小鼠的存活时间,但IOCP延长感染弓形虫小鼠的存活时间高于阳性药物达5 d。游运辉等[3]作了蒿甲醚治疗试验小鼠急性弓形虫感染的研究,揭示了蒿甲醚对小鼠试验型急性弓形虫感染有一定的疗效。王明建[4]等作了4种中药抗弓形虫效果比较的研究,其研究说明桦褐孔菌及蒿甲醚均对弓形虫具有一定的治疗效果,本试验与其试验结果相一致。

弓形虫的致病作用主要是速殖子在细胞内繁殖,以致细胞被反复破坏,引起组织的炎症反应,氧依赖性杀菌系统活化,呼吸暴发,产生许多氧自由基,其可以破坏生物膜,SOD会清除氧自由基,对急性感染弓形虫小鼠有保护作用。从试验结果得知治疗第3天时,IOCP组、阳性药物组及阴性对照组小鼠体内SOD活性都有不同程度的升高,与正常组相比差异显著(P＜0.05)。这可能是小鼠感染初期在应激状态下,为消除过多的OFR,保护组织及其靶器官膜系统不受损伤,反馈性地导致机体SOD合成增多的结果,因而得出弓形虫感染时机体有氧化损伤的发生,为此在治疗弓形虫感染时考虑到抗氧化损伤的治疗是很有必要的[5]。治疗第6天时,IOCP组及阳性药物对照组小鼠体内的SOD活性降低程度不明显,但与阴性对照组的小鼠血清、心、肝和肺的SOD活性比较差异显著(P＜0.05),这可能是模型组没有得到治疗,随着感染加重,病情恶化,炎症加重,加上饮食减少、蛋白合成降低,SOD消耗过多,以致SOD活性急剧下降;也有可能和体内的微量元素的消耗有关系[5]。耿志辉等[6]在弓形虫感染鼠肝脾脑微量元素测定中也证实了弓形虫感染会引起体内Cu2+减少。因为Cu2+是SOD生物合成的必需原料,所以它的不足使体内SOD合成减少。从试验结果中可得知,IOCP组和阳性药物小鼠血清及脏器的SOD活性均高于阴性对照组,这可能是IOCP和阳性药物具有清除体内氧自由基的作用,但IOCP组略高于阳性药物对照组,说明IOCP比阳性药物的治疗效果更佳,而阴性对照组因缺乏药物治疗,体内过多的氧化代谢终产物超出了机体的清除能力。这表明IOCP对弓形虫感染小鼠体内氧化损伤具有较好的保护作用。

[1] 吴观陵.人体寄生虫学[M].3版.北京:人民卫生出版社,2005:247.

[2] 詹希美.人体寄生虫学[M].北京:人民卫生出版社,2005:95.

[3] 游运辉.欧阳颗,向选东.用蒿甲醚治疗实验小鼠急性弓形虫感染的研究[J].中国现代医学杂志,2000,10(6):35.

[4] 王明建,鞠玉琳,高威,等.4种中药治疗急性弓形虫感染小鼠的疗效观察[J].中国兽医杂志,2010,46(1):32-33.

[5] 万红娇,杨翠萍,王敏章.自拟抗弓形虫汤对急性弓形虫感染小鼠SOD、MDA的影响[J].江西中医学院学报,2007,19(4):61-63.

[6] 耿志辉,石毅,方艳秋,等.弓形虫感染鼠肝脾脑微量元素的测定[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2000,18(6):347-348.