牛蒡醇提取物抗肿瘤活性研究

2011-08-08徐力

中国医药指南 2011年31期

徐力

（长春中医药大学附属医院药剂科，吉林长春 130021）

牛蒡（Arctiumlal，aLinn）别名大力子、牛子等。牛蒡为我国古老的药食两用蔬菜，明朝李时珍称其“剪苗淘为蔬，取根煮，曝为脯，云其益人”，《本草纲目》中详载其“通十二经脉，除五脏恶气”；《名医别录》称其“久服轻身耐老”。牛蒡于公元940年前后传入日本，并被培育成优良品种，现日本人把牛蒡奉为营养和保健价值极佳的高档蔬菜。牛蒡凭借其独特的香气和纯正的口味，风靡日本和韩国，走俏东南亚，并引起西欧和美国有识之士的关注，可与人参媲美，有“东洋参”的美誉。

文献报道牛蒡含有木脂素类、萜类、脂肪酸类等有机物质，在牛蒡子中鉴定了牛蒡苷及其苷元[1-5]。牛蒡的药理作用至今报道了抗菌及抗真菌、抗糖尿病、免疫调节、镇痛、镇静及诱导植物系统抗性等作用，本研究研究并报道牛蒡醇提取物的体外抗肿瘤作用。

1 实验材料

1.1 药物

牛蒡提取物由我院制剂室提取制备。将全草用95%乙醇提取，减压回收乙醇，干燥，即得黄色粉末，收率3.5%。

1.2 菌株及其来源

中国仓鼠卵巢CHO 细胞株，吉林大学细胞免疫实验室。

1.3 培养基

固体培养基（g/L）：葡萄糖 40、蛋白胨 10、酵母浸出粉 10、琼脂 20、蒸馏水1000mL。液体发酵培养基（g/L）：葡萄糖 40、蛋白胨10、酵母浸出粉 10、蒸馏水 1000mL。

细胞培养基：DMEM/F12培养基（含10%小牛血清以及100μg/mL青霉素和 100μg/mL 链霉素）。

1.4 试剂及仪器

无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯等均为分析纯。Spectra M2 酶标仪，美国 Molecular Devices 公司。

2 方法与结果

2.1 肿瘤细胞生长抑制实验方法[6]

细胞的亚培养：CHO细胞经0.25%胰酶消化后加新鲜培养液，于温度为37℃，5%CO2培养箱中培养，每2～3d更换一次培养液，待细胞生长到对数分裂期，用于进一步实验。96孔板种子细胞的培养：待细胞进入对数分裂期，将细胞从培养瓶中转移到96孔板中培养，以每孔4.0×104个细胞接种于96孔细胞培养板中，每孔体积100μL，同时留出3个空白孔（不加细胞），于37℃、5%CO2培养箱中培养24h。加样品与细胞共培养：待细胞在96孔板中稳定24h且贴壁后，用移液器吸出旧的培养液，然后每孔加90μL 新鲜培养液和10μL溶于12.5%DMSO的样品，同时设100%对照组、0% 对照组，100%和0%对照孔中分别加入90μL新鲜培养液和10μL 12.5%DMSO（其中100% 对照组是 3 个无细胞的空白孔），于 37℃、5%CO2培养箱中培养 72h。

酶标仪检测：细胞加样品共培养72h 后，每孔加20μL 0.05%Resazurin，于培养箱中保温2h，用酶标仪检测荧光强度（FLU），激发波长 530nm，发射波长 590nm。