细胞粘附分子CD44s在大肠癌中的表达及临床意义

沈志力

恶性肿瘤的重要生物学特征为对邻近正常组织的浸润及远处转移。CD44s粘附分子与许多恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关。在这些恶性肿瘤细胞的表面，CD44s通常表达异常［1］。第 1个编码CD44s的cDNA是由Stamenkovic等于1989年使用不同的单抗分离和克隆的，该基因不仅可由淋巴样细胞表达，也可由不同的癌细胞系包括典型实体瘤标本中表达;而第1份临床肿瘤(结肠癌)标本的检测发现CD44s是1992年由英国牛津大学病理实验室的研究人员首先报道的，此后人们应用免疫组化在肺癌、胃癌、食道癌、乳腺癌、膀胱癌、肝癌等中均发现有 CD44s表达，因此认为CD44s的表达与恶性瘤进展程度、转移及预后密切相关［2］。本实验拟通过免疫组织化学方法，探讨粘附分子CD44s在人大肠癌中的表达与癌转移及预后的关系，为临床大肠癌诊断与治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集江苏省江宁医院临床病理资料完整的大肠癌68例(其中结肠癌26例，直肠癌42例)，男46例，女22例;平均年龄62(39～85岁)。病理类型均为腺癌。肿瘤分化程度:高分化14例，中分化38例，低分化16例。Duke's分期:A期12例，B期18例，C期32例，D期6例。所有病例术前均未行放疗和化疗，并由2位病理医师确诊。另取20例距癌组织10 cm的远处肠黏膜作正常对照。所有病例均行5年随访，死亡28例，存活40例。

1.2 免疫组织化学染色 采用Envision TM法，Envision免疫组化检测试剂盒购自丹麦Dako基因有限公司，鼠抗人单克隆抗体CD44s购自北京中杉金桥生物技术有限公司。CD44s蛋白均定位在细胞膜，呈棕色细颗粒状，结果判断的依据是细胞膜上阳性细胞的显色有无及强弱分级:基本不着色、未见阳性细胞为(－)(见图1)，着色浅黄、着色细胞低于25%者为(+)，着色适中、着色细胞占25% ～50%为(++)，着色深、着色细胞大于50%为(+++)。后三者均视为阳性表达(见图2)。

图1 肠腺癌细胞CD44s(－)(×100倍)

1.3 统计学处理 统计分析应用STATA 9.0软件对数据进行分析，组间阳性率比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

CD44s在正常肠上皮表达阴性，仅在腺体基底部有弱阳性表达，本免疫组化结果显示，大肠癌组织中CD44s的表达阳性率为63.24%(43/68)。

2.1 CD44s的表达与大肠癌患者临床病理特征的

关系 免疫组化结果显示:CD44s的阳性表达与肿瘤分期显著相关性，Duke's C/D期的大肠癌患者的阳性率显著高于Duke's A/B期(P＜0.05);随肿瘤细胞分化程度的降低，CD44s的阳性表达率也增加(P＜0.05)。伴淋巴结转移患者的CD44s阳性率显著高于不伴淋巴结转移者(P＜0.05)。而CD44s的阳性表达与患者年龄、性别、浸润深度无显著相关性(P ＞0.05)。(见表1)

表1 CD44s阳性表达率与大肠癌病理特征的关系

图2 肠腺癌细胞CD44s(+)(×100倍)

2.2 CD44s的阳性表达与生存率的关系 对68例大肠癌患者的生存情况进行统计分析，结果显示:CD44s阴性、阳性患者的5年生存率分别为68.00%(17/25)、53.49%(23/43)，两者差异具有显著性(P ＜0.05)。

3 讨论

CD44(cluster of differentiation 44，鉴别簇 44)系指白细胞分化抗原分化簇第44号，由国际白细胞分化抗原协作组会议将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的膜分子统一命名，是一类重要的粘附分子。人类CD44s位于11号染色体短臂上(11p13)，由至少20个外显子和其间的内含子组成。CD44s只包含10个组成型外显子而不含有任何V区变异型外显子，其转录片段存在于所有CD44s转录产物中。在正常人体内大量存在，主要在间质和造血源性细胞表达，介导淋巴细胞的活化、分化、回流、粘附等一系列过程。

目前对多种恶性肿瘤的研究发现，CD44s的高表达与恶性肿瘤的侵润和转移密切相关。Murai等［3］在实验中发现透明质酸可以使CD44s在恶性瘤细胞表面脱落，CD44s分子的相互聚结同样能够使CD44s在恶性肿瘤细胞表面脱落，而CD44s在恶性瘤细胞表面上的脱落可能与恶性瘤细胞的侵润和转移有密切关系，证明CD44s在调节肿瘤恶性转移中的重要作用。在大肠癌方面，Du等［4］实验发现来自于大肠癌组织中的一个CD44s阳性细胞可以在体外生长成一个类似原发癌的肿瘤组织，揭示CD44s阳性表达在大肠癌发生中起重要作用。Liu等［5］应用免疫组化染色法检查了62例结肠直肠腺癌中CD44s的表达，结果发现CD44s的高表达能够导致淋巴腺瘤的转移和侵袭。

本研究采用Envision TM免疫组化法检测大肠癌组织中CD44s蛋白的表达情况，方法敏感度和特异性较好，结果显示:大肠癌组织中CD44s的阳性表达率为63.24%，CD44s的阳性率与肿瘤细胞的分化程度及肿瘤分期有相关性:肿瘤分期越晚，CD44s的阳性率也越高;而伴有淋巴结转移患者的CD44s表达率明显高于无淋巴结转移者。以上结果提示随着大肠癌浸润、转移的发生，CD44s表达增强，提示CD44s可能与大肠癌的浸润及转移有一定相关性。CD44s表达强度的增加在一定程度上可以反映病情的进展，为临床评价疗效、评估病情及指导治疗提供参考依据。另外，本研究结果显示:CD44s阴性、阳性患者的5年生存率分别为68.00%(17/25)、53.49%(23/43)，CD44s阳性表达的患者5 年生存率显著低于阴性者，二者差异具有显著性(P＜0.05)，提示CD44s在大肠癌中的高表达与生存时间显著相关，CD44s可能在肿瘤生长中起一定的作用，CD44s表达水平可能为大肠癌的患者预后评价提供重要信息。这与 Fernández等［6］的报道相一致。

目前，对于CD44s粘附分子参与肿瘤浸润转移的确切机制仍不明确，可能的机制为:CD44s阳性的肿瘤细胞能与透明质酸等配体结合，获得粘附性，附着于血管内皮细胞，并从基质中获得生长因子，使得肿瘤细胞得以侵出及迁移，构成了肿瘤细胞的侵袭性和转移性。但CD44s在大肠癌发展中的具体作用尚需进一步的研究证实。

本研究提示CD44s不仅是转移相关因子，还可以作为大肠癌患者的预后评估指标。检测CD44s分子对大肠癌的病情进展、转移潜能及预后评估等方面有很大的潜在价值，同时为临床治疗提供参考。

［1］ Hao JL，Cozzi PJ，Khatri A，et al.CD147/EMMPRIN and CD44 are potential therapeutic targets for metastatic prostate cancer［J］.Curr Cancer Drug Targets，2010，10(3):287-306.

［2］ Zavrides HN，Zizi-Sermpetzoglou A，Panousopoulos D，et al.Prognostic evaluation of CD44 expression in correlation with bcl-2 and p53 in colorectal cancer［J］.Folia Histochem Cytobiol，2005，43(1):31-36.

［3］ Murai T，Miyazaki Y，Nishinakamura H，et al.Engagement of CD44 promotes Rac activation and CD44 cleavage during tumor cell migration［J］.J Biol Chem，2004，279(6):4541-4550.

［4］ Du L，Wang H，He L，et al.CD44 is of functional importance for colorectal cancer stem cells［J］.Clin Cancer Res，2008，14(21):6751-6760.

［5］ Liu YJ，Yan PS，Li J，et al.Expression and significance of CD44s，CD44v6，and nm23 mRNA in human cancer［J］.World J Gastroenterology，2005，11(42):6601-6606.

［6］ Fernández JC，Vizoso FJ，Corte MD，et al.CD44s expression in resectable colorectal carcinomas and surrounding mucosa［J］.Cancer Invest，2004，22(6):878-885.