TMB在粪便隐血中的应用

叶昌远

（河源市中医院，广东 河源 517000）

粪便隐血试验是诊断消化道出血，肠道肿瘤的重要指标，对早期发现和诊断消化道出血性疾病有重要意义[1]，TMB作为辣根过氧化物酶的底物广泛应用于免疫学检验，本文通过对200例确诊有消化道出血粪便标本，其中133例为上消化道出血，67例下消化道出血，和100例正常人粪便标本分别用匹拉米洞法、邻联甲苯胺法、单克隆抗体胶体金试纸条法、TMB法做隐血试验进行比较，，探讨TMB应用于粪便隐血试验的可行性，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂

TMB试剂应用乙型肝炎检测试剂盒中显色剂A液B液；匹拉米洞试剂盒；邻联甲苯胺法试剂（10g/l邻联甲苯胺溶液和3%过氧化氢溶液）；万华普曼生物工程有限“速而准”潜血试纸。

1.1.2 标本

要求标本新鲜，盛装容器干燥无污染无吸水性，送检标本1h内检验完成。

1.2 方法

1.2.1 标本检测

TMB法用竹签挑取少量粪便涂在消毒棉签上或滤纸带上，先滴加B液2～3滴，再加A液2～3滴，2min内观察颜色变化。10s内出现深绿色为4+；30s出现绿色且颜色逐渐加深为3+；1min出现绿色为2+；1～2min出现浅绿色为1+；2min以上未出现颜色为阴性。匹拉米洞法、邻联甲苯胺法、单克隆抗体胶体金法严格按照操作说明操作。

1.2.2 灵敏度试验

挑取黄豆大小正常人粪便加入到刻度试管中，加蒸馏水至2mL刻度并调成糊状，加入纯化血红蛋白质控品并倍比稀释成不同浓度的Hb混合液，分别用四种方法检测。血红蛋白质控品采用四川省新成生物科技有限责任公司提供经校准的，Hb为110g/l。

1.2.3 特异性试验

收集鸡血、猪血分别用4种方法检测。

1.2.4 干扰试验

分别采用VitC和铁剂加入粪便混合液中，用四种方法检测。

2 结 果

2.1 标本检测结果

表2 灵敏度试验结果

上消化道出血的患者粪便隐血试验TMB法阳性率低于邻联甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、高于单克隆抗体胶体金试纸条法；下消化道出血的患者粪便隐血试验TMB法阳性率低于邻联甲苯胺法，接近于匹拉米洞法，低于单克隆抗体胶体金试纸条法；TMB法假阳性率低于邻联甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、高于单克隆抗体胶体金试纸条法，真阴性率高于联甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、低于单克隆抗体胶体金试纸条法，见表1。

2.2 灵敏度试验结果[2]

TMB法检出血红蛋白(Hb)浓度≥3.36μg/mL；匹拉米洞法检出血红蛋白浓度≥3.36μg/mL；邻甲联苯胺法检出血红蛋白浓度≥6.71μg/mL；金标法检出血红蛋白浓度0.21～859.38μg/mL。见表2。

2.3 特异性试验结果

TMB法，匹拉米洞法、邻联甲苯胺法特异性试验均阳性，金标法特异性试验为阴性。

2.4 干扰试验结果

在含有大剂量VitC和铁剂时，TMB法，匹拉米洞法、邻联甲苯胺法呈阴性，而金标法不受干扰。

3 讨 论

粪便隐血试验是检测粪便中微量（出血量少于5mL，肉眼及镜检不能发现的）血液的试验，当消化道、消化器官出血或存在肿瘤时，粪便隐血试验可出现阳性，粪便隐血试验对消化性溃疡和消化道肿瘤的诊断和鉴别有重要意义，消化道恶性肿瘤可呈持续阳性，消化道溃疡呈间断阳性[2,3]。粪便隐血试验大致分为化学法（匹拉米洞法、邻联甲苯胺法）和免疫法，本文讨论的TMB法也属于化学法，其原理是红细胞中血红蛋白具有类似过氧化酶的作用，催化过氧化氢，氧化TMB而显示色，从而证实血红蛋白的存在。

本试验通过对匹拉米洞法、邻联甲苯胺法、单克隆抗体胶体金试纸条法、TMB法的比较表明：①上消化道出血的患者粪便隐血试验TMB法阳性率低于邻联甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、高于单克隆抗体胶体金试纸条法；下消化道出血的患者粪便隐血试验TMB法阳性率低于邻联甲苯胺法，接近于匹拉米洞法，低于单克隆抗体胶体金试纸条法。②TMB法和匹拉米洞法最低可以检出6.7μg/mL的血红蛋白，邻联甲苯胺法最低可以检出13.4μg/mL的血红蛋白，金标法最低可以检出0.21～859.38 μg/mL的血红蛋白，TMB法灵敏度适中。③TMB法属于化学法，特异性与干扰性与邻联甲苯胺法，匹拉米洞法相同，与人血和动物血都呈阳性反应，易受VitC和铁剂的干扰，而免疫法具有高度特异性，只与人血呈阳性反应不易受VitC和铁剂的干扰。

经上述分析TMB法粪便隐血试验对消化道出血有很高的检出率，灵敏度适中，适宜临床常规检查，但存在特异性不强，易受干扰，不能仅凭单一方法来判断隐血试验的结果，应根据患者三天内饮食及用药情况综合判断，以降低假阳性及假阴性率。

[1] 李鹏宇,陈激扬.粪便潜血两种检测方法的评价和选择[J].武警医学院学报,2009,18(5):458-459.

[2] 黄彦,刘燕玉,王娜.粪便隐血两种检测方法的结果比较[J].福建医药杂志,2006,28(1):178-179.

[3] 张时民,陈静.检验与临床诊断.全科医师分册[M].北京:人民军医出版社,2009:214.