NF-κB基因多态性与中国汉族2型糖尿病及其血管并发症的关系研究

邹伏英 王友莲 何 丹 张 娜

（江西省人民医院，江西 南昌 330006）

潜在的慢性亚临床炎性反应是胰岛素抵抗（IR）和T2DM的发病机制。核因子-κB（NF-κB）是一种能与免疫球蛋白κ轻链基因增强子κB系列（GGGACTTTCC）特异性结合的核蛋白因子[1]，是炎症信号通路的关键因子。NF-κB激活介导了许多炎性因子水平升高，从而引起IR和胰岛β细胞功能损伤，最后导致T2DM发生。Apiradee等[2]研究表明，IκB/NF-κB炎症通路活化是骨骼肌IR的机制。通常情况下，IκB通过自身的重复锚蛋白结构域与NF-κB结合，导致NF-κB不能入核。但NF-κB能为众多因素激活而游离出来，成为活性状态进入细胞核，调控炎性反应和免疫应答相关基因的表达[3]。本研究是探讨NF-κB的（CA）基因多态性与2型糖尿病（T2DM）及其血管病变的相关性。

1 资料与方法

1.1 病例选择

对照组：我院健康体检者中随机选取，无糖尿病，年龄 40～80岁；T2DM组：我院住院患者中选取，符合1999年WHO糖尿病诊断标准，年龄40～80 岁。汉族，无血缘关系。

1.2 材料

①荧光标志物为 5’-FAM；②按稳态模式评估法计算IR及β细胞功能；③DNA的抽提、 PCR 扩增；④凝胶电泳分析；⑤基因型分析；⑥测序。

1.3 统计学处理

计量资料用均数±标准差表示，正态资料两组间比较采用t检验，非正态资料应用 Wilcoxon 检验；计量资料组间采用χ2检验以及 Fisher精确检验，统计学处理采用 SPSS13 .0 统计软件进行。P＜0.01 有显著差异。

2 结 果

2.1 两组间一般资料的比较

两组年龄、性别构成无统计学差异，T2DM组体重指数、腰臀围比例、低密度脂蛋白、空腹血糖及胰岛素均显著高于对照组，而高密度脂蛋白低于对照组，且均有统计学差异。

2.2 两组间基因频率比较

①共发现了14个等位基因，将116bp上的等位基因称为“A1”型，以此类推118bp（A2）、120 bp（A3）等；②A4 、A5、A7、A8、A9 、A10为常见等位基因。见图1。

图1 两组间基因频率比较

2.3 两组间等位基因比较

①等位基因A5在对照组中明显高于T2DM组；等位基因A9在对照组中明显低于T2DM组，且均有显著差异；②常见等位基因A4、A7、A8、A10在两组中无显著差异。

2.4 共发现40种基因型

A4 / A5及A5 / A5在 CON 组中均明显高于T2DM 组；A4 / A9 在CON 组中明显低于DM 组，且均有显著差异。

2.5 单纯T2DM组（72例）、T2DM并冠心病组（39例）、T2DM并肾病组（49例）三组比较发现，常见等位基因A4 、A5、A7、A8、A9、A10无显著差异。

3 结 论

①A4 、A5、A7、A8、A9 、A10为中国汉族人常见等位基因；A9可能为参与T2DM发病的基因，而A5可能为T2DM保护基因。②正常人群以基因型A4/A5（16%）及A5/A5（12 %）为主；而T2DM患者以A4/A9基因型为主（22.9 %）。③ 糖尿病组间（不管有无并发症）其等位基因分布无显著差异。

4 讨 论

胰岛素抵抗和B细胞分泌缺陷是2型糖尿病（T2DM）发病机制的两个主要环节。涉及胰岛素抵抗的机制有很多，近10年来，针对大量人群的研究将胰岛素抵抗与全身炎症联系起来。而NF-κB是一类能与多种基因启动子部位的κB点发生特异性结合促进转录的DNA结合蛋白总称，它几乎存在所有细胞中，并能够和许多基因启动子区域的固定核苷酸序列结合而启动基因转录，在免疫应答、炎性反应、细胞凋亡和增殖等多种细胞活动中起关键的作用。

随着对T2DM的深入研究，部分已知致病基因的糖尿病从T2DM中独立出去，但T2DM是一个多基因疾病，且大多数T2DM致病基因不明。 Horikawa等[4]应用SNP 作为遗传标记通过基于连锁不平衡的相关分析，在墨西哥裔美国人群和北欧人群中发现了第一个DM易感基因，且与北欧人群的 T2DM 的遗传易感性相关。近年来，国外大量研究发现炎症因子NF-κB的基因多态性与T2DM的发病有关。1999 年，Ota[5]等确定了在NF-κB 1靠近编码区存在这种短串联重复序列，并且发现了13个等位基因。2001年，Hegaz[6]等通过对 321名英国人的研究发现18个等位基因并且认为等位基因138bp在1型糖尿病的易感性中起到了重要作用。

本研究的结果共发现了14种等位基因，中国汉族人群以A4（122 bp）、A5（124 bp）、A7（128 bp）、A8（130bp）、A9（132 bp）、A10（134bp）等位基因为主；A5等位基因频率在 CON 组中明显高于 T2DM组，A9等位基因频率在T2DM组中明显高于CON 组。糖尿病组间，不管有无并发症，其等位基因分布无显著差异。由于病例资料少，故本研究并不能说明NF-κB的基因多态性在糖尿病血管并发症中就无意义。期待更多的病例资料来证实。

[1] Singh H,Sen R,Baltimore D,et al.A nuclear factor binds to a conserved sequence motif in transcriptional control elements of immunoglobulin genes[J].Nature,1986,319 ( 6049 ) : 154 -158.

[2] Apiradee S,Roberts CC,Berria R,et al.Reduced skeletal muscle inhibitor of κB β content is associated with insulin resistance in subjects with type 2 diabetes reversal by exercise training[J].Diabetes,2006,55(3):760-767.

[3] Cardozo A K,Heimberg H,Heremans Y,et al.A comprehensive analysis of cytokine-induced and nuclear factor- B-dependent genes in primary rat pancreaticβ-cells[J].J Biol Chem,2001,276(52): 48879- 48886.

[4] Horikawa YOda N,Cox NJ,et al.Genetic variation in the gene encoding calpain-10 is assiociated with type 2 diabetes mellitus [J] .Nat Genet,2000,26 (2): 163 -175.

[5] Ota N.,Nakajima T,Shirai Y,et al.Isolation and radiation hybrid mapping of a highly polymorphic CA repeat sequence at the nuclear factor kappa - beta subunit (NF -κB 1) locus[J].J Hum Genet,1999,144(1):129.

[6] Hegazy DM,O' Reilly DA,Yang BM,et al.NF-κB polymorphisms and susceptibility to type 1 diabetes[J].Genes Immun,2001,2(3):304.