正交试验优选八角莲中鬼臼类化合物的提取工艺研究

石磊岭魏鸿雁*夏提古丽•阿不利孜贾晓光许晶晶徐晓琴

（1 新疆中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002；2 新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐 830002）

正交试验优选八角莲中鬼臼类化合物的提取工艺研究

石磊岭1魏鸿雁1*夏提古丽•阿不利孜1贾晓光1许晶晶2徐晓琴1

（1 新疆中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002；2 新疆医科大学，新疆 乌鲁木齐 830002）

目的研究回流提取法中各因素对八角莲中鬼臼毒素，4’-去甲鬼臼毒素提取效果的影响。方法采用L9(34)正交试验，以鬼臼毒素，4’-去甲鬼臼毒素含量为指标，确定回流提取法各因素对八角莲中有效物质提取效果的影响，结果八角莲最佳回流提取工艺为：料液比为1∶5，温度80℃，90%乙醇提取3次每次1h。

鬼臼毒素；4’-去甲鬼臼毒素；正交试验

八角莲为小檗科植物八角莲Dysosma versipellis（Hance.） M.Cheng的干燥根茎，是鬼臼类化合物常用的一种具有显著生物活性的中药，据《本草纲目》等记载，八角莲为根茎入药，药用价值很高，具清热解毒，抗毒蛇咬伤，祛风除湿、活血止痛、镇咳平喘等功效。鬼臼类化合物为其主要活性成分，属芳基四氢萘木脂素类化合物，具有抗肿瘤、抗病毒活性[1,2]。

八角莲中4’-去甲鬼臼毒素的提取工艺及含量测定罕见报道。本试验应用HPLC对八角莲中鬼臼毒素与4’-去甲鬼臼毒素的提取工艺进行优化，为八角莲合理利用提供科学依据。

1 仪器与试药

WATERS ALLIANCE E2695-2998-2424高效液相色谱仪（沃特世科技有限公司）。FA2004型电子天平（杭州大铭仪器有限公司）。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。对照品鬼臼毒素，4’-去甲鬼臼毒素自制，经HPLC检测均为单峰，面积归一化法测定其含量，分别为99.35%，99.55%%。经1H-NMR、13C-NMR测定，鉴定为鬼臼毒素，4’-去甲鬼臼毒素。

八角莲药材采自广西，经广西民族医药研究所戴斌研究员鉴定为八角莲[Dysosma versipellis（Hance）M.cheng]。

2 实验方法

2.1 色谱条件

C18柱（250mm×4.6mm，5μm），25℃，流动相为甲醇∶水=50∶50，流速1.0mL/min，检测波长207nm。

2.2 试验步骤

准确称取八角莲粗粉10g，加入一定量乙醇，在一定温度下，在水浴锅内提取一定时间，提取液减压浓缩至干。用甲醇溶解并稀释至一定刻度，然后用微孔膜过滤制成样品溶液。样品溶液用HPLC法分析。样品中鬼臼毒素和4’-去甲鬼臼毒素的含量（质量分数，下同）计算公式为：

x=（x1/ x2）×100%

公式中：x为鬼臼毒素或4’-去甲鬼臼毒素含量，%；

x1 为样品溶液中鬼臼毒素或4’-去甲鬼臼毒素质量，g；

x2 为八角莲粗粉质量，g。

3 提取工艺

3.1 固液比

分别取八角莲粉末4份，每份10g，分别加入30mL，50mL，70mL，100mL 80%的乙醇，70℃加热回流提取1h，过滤，测定鬼臼毒素、4’-去甲鬼臼毒素的含量，结果见表1。

表1 固液比试验选择结果

3.2 乙醇体积分数

分别取八角莲粉末4份，每份10g，分别加入 60%，70%，80%，95%的乙醇100mL，70℃加热回流提取1h，同前法，结果见表2。

表2 乙醇体积分数试验结果

3.3 提取时间

分别取八角莲粉末4份，每份10g，加入80%的乙醇100mL，同前法，加热回流提取lh，2h，3h，4h，同前法，结果见表3。

表3 提取时间试验结果

3.4 提取次数

分别取八角莲粉末4份，每份10g，加入80%的乙醇100mL，加热回流提取lh，分别提取1次、2次、3次、4次，同前法，结果见表4。

表4 提取次数的实验结果

3.5 温度

分别取八角莲粉末5份，每份10g，加入80%的乙醇100mL，加热回流提取lh，提取温度依次为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，同前法，结果见表5。

表5 提取温度的实验结果

3.6 正交实验

根据上述试验结果，以温度、料液比、乙醇浓度，提取次数为考察因素，用L9（34）正交表进行正交试验（表6）。

表6 正交设计方案

3.7 正交试验结果

对正交试验数据作极差分析，结果见表7。

表7 鬼臼毒素，4’-去甲鬼臼毒素浸出率实验方案表

3.8 鬼臼毒素、4’-去甲鬼臼毒素浸出率方差分析

由表7的R值分析，以鬼臼毒素为考察指标，各因素对实验结果的影响顺序依次为A＞D＞B＞C，方差分析结果表明（表8），温度、料液比、乙醇浓度、提取次数四因素均具有极显著影响，最适宜的提取工艺为：A2B2C1D3。

由表8的R值分析，以4’-去甲鬼臼毒素为考察指标，各因素对实验结果的影响顺序依次为A＞B＞D＞C，方差分析结果表明（表9），温度、料液比、提取次数三因素具有极显著影响，乙醇浓度具有显著影响，最适宜的提取工艺为：A2B2C3D3。

结 论

实验首次对八角莲根茎中4’-去甲鬼臼毒素进行了提取工艺研究，提取鬼臼毒素和4’-去甲鬼臼毒素的最佳工艺应为：温度为80℃，料液比为1∶5，70%的乙醇提取3次，每次1h。

5 讨 论

表8 鬼臼毒素含量方差分析

表4 -去甲鬼臼毒素含量方差分析

5.1 本实验用回流法对八角莲中鬼臼毒素和4’-去甲鬼臼毒素进行提取工艺优化，考察了时间、乙醇体积分数、固液比、提取次数4个重要影响因素进行研究。以往文献很少见对八角莲Dysosma versipellis（Hance.） M.Cheng提取工艺的报道，仅对本属其他植物有鬼臼毒素提取工艺报道[3]，与其相比，该方法更为合理。根据分析结果，八角莲中有效物质的最佳提取工艺为：温度为80℃，料液比为1∶5，70%的乙醇提取3次，每次1h。

5.2 八角莲是我国特有的濒危三级保护多年生草本植物，鬼臼毒素和4’-去甲鬼臼毒为其主要成分，能溶于甲醇、丙酮、乙醇和三氯甲烷等，但是考虑到以后的后续药用价值，以乙醇为溶媒，环保，可重复利用、提取效率高、成本低、操作简单、适合大量生产。

[1]尚明英,郑国钧,徐珞珊,等.HPLC测定鬼臼类生药中鬼臼木脂素的含量[J].中国药科大学学报,1996,27(4):219-222.

[2]肖昌钱,杨淑贞,单文,等.HPLC比较不同产地生药八角莲中鬼臼类成分含量[J].中国现代应用药学杂志,2009,26(8):659-661.

[3]张杰,周春山,刘韶,等.小八角莲中鬼臼毒素的提取工艺研究[J].中药材,2007,30(1):103-104.

R282.703

B

1671-8194（2011）33-0045-03

新疆维吾尔自治区科技支疆项目计划项目(200991128)；乌鲁木齐市科学技术计划项目（P101310005）

*通讯作者：E-mail：whywlmq@sina.com