虫草灵芝合剂对肝损伤小鼠的预防和治疗作用

宗序玲 孟国梁 黄金华*

（1 如皋人民医院药剂科，江苏 如皋 225000；2 南通大学药学院，江苏 南通 226001）

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬天寄生在蛾科昆虫的幼虫体内到夏天形成的干燥子座和虫体的复合体，简称虫草；主要成分为虫草多糖，是从冬虫夏草菌丝中提取的；现代医学证实，虫草多糖具有多种药理学活性，如提高免疫活性、抗肿瘤、抗病毒、降血糖等；灵芝为灵芝菌科灵芝属真菌的总称，通常所称灵芝是指灵芝属中赤芝的子实体部分，灵芝多糖是灵芝中的主要活性物质，具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老以及活血化瘀等多种生物活性；虫草灵芝合剂以虫草多糖为主，佐以灵芝多糖等精制而成。

本研究通过观察虫草灵芝合剂对小鼠肝损伤的影响，并初步探讨其对肝损伤有预防和保护作用机制，以期为进一步开发利用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

实验动物：健康ICR小鼠，体质量18～22g，雌雄兼用，由南通大学动物实验中心提供，动物许可证号：SCXK[（苏）2002-0019]；虫草灵芝合剂（江苏南通安惠生物科技公司，批号090918），以0.4%CMC配置成溶液；四氯化碳油剂（宜兴市第二化学试剂厂，批号20060701）。

1.2 处理

小鼠摘眼球取血，迅速离心，取上层血清冰箱4℃保存，用全自动生化分析仪测定天冬氨酸转氨酶（AST），丙氨酸转氨酶（ALT），谷氨酰转移酶（GGT）。取血同时切取小鼠肝组织放到10%中性福尔马林中固定处理，其余肝组织置液氮冷冻保存，再经石蜡包埋切片，进行HE染色观察。

1.3 统计学处理

2 方法与结果

2.1 虫草灵芝合剂对CCl4致小鼠肝损伤的预防作用

取 ICR小鼠40只，雌雄兼备，随机分虫草灵芝合剂低、中、高剂量组和正常对照组4组，每组10只。从分组后第1天起给药，低、中、高剂量虫草灵芝合剂灌胃，剂量分别为（40、80、160mg/kg）；正常对照组以生理盐水灌胃，到第5天每天上午各组继续给药，第5天下午小鼠背部皮下注射0.1%CCl4溶液0.lmL/10g（体质量），第6天上午称完小鼠体质量后摘眼球取血清，置4℃冰箱保存；随即剖腹取出肝脏，称重后于10%福尔马林溶液中固定，以做组织学观察。结果见表1。

从表1可知，虫草灵芝合剂中剂量与高剂量组三种酶皆非常显著低于对照组（P＜0.01）。用药的高剂量组小鼠体质量较用药前有显著增加；正常组及中剂量组也有增加，但于对照组比统计不显著。对照组体质量无变化，用药3组每l0g体质量的肝重皆无显著性差异。

2.2 虫草灵芝合剂对CCl4致肝损伤小鼠的治疗作用

取ICR小鼠50只，雌雄兼备，随机分为5组，分别为虫草灵芝合剂低、中、高剂量组、对照组和正常组，每组10只。实验前称体质量；给药组及对照组皆从实验第1天起从小鼠背部皮下注射1%CCl4油溶液0.lmL/10g（体质量）。同日下午给药组以虫草灵芝合剂灌胃，其三组剂量分别为（40、80、160mg/kg）；对照组以生理盐水灌胃，第2～8天每天上午继续给药，第5天下午再重复注射CCl4一次，第8天上午称小鼠体质量后摘眼球取血清，用赖氏法测定ALT等三种酶。随后剖腹取肝脏，称重后于10%福尔马林溶液中固定，以备组织学观察。正常组小鼠不给任何药物，从1～8d以相同条件饲养，至第8天的试验同其他组。结果见表2。

表1 虫草灵芝合剂对CCl4致小鼠肝损伤的治疗作用(n=10，±s)

表1 虫草灵芝合剂对CCl4致小鼠肝损伤的治疗作用(n=10，±s)

*P＜0.01与对照组比较；△P＜0.01与实验前比较

对照组 341.3±135.5 149.8±78.6 4.7±37 25.3±1.1 27.6±2.0 0.59±0.06低剂量组 338.9±132.6 142.9±39.7 1.7±1.0 24.8±1.4 25.9±1.8 0.57±0.06中剂量组 202.3±44.1* 88.6±20.3* 1.2±0.7* 24.6±1.7 26.9±2.0△ 0.57±0.05高剂量组 145.6±37.3* 48.3±18.6* 0.9±0.5* 25.3±2.0 28.8±2.1△ 0.58±0.06

表2 对CCl4致小鼠肝损伤的预防作用（n=10，±s）

表2 对CCl4致小鼠肝损伤的预防作用（n=10，±s）

*P＜0.01与对照组比较；△P＜0.01与实验前比较

对照组 338.8±136.4 153.6±81.3 4.6±3.7 28.6±1.2 29.2±1.4 0.60±0.06正常组 78.3±57.2 14.3±9.1 0.7±0.6 27.9±1.4 28.8±1.9 0.59±0.05低剂量组 324.6±134.8 129.3±40.1 4.4±3.5 26.2±1.8 27.3±1.8 0.60±0.06中剂量组 213.8±51.1* 92.7±34.3* 2.2±0.9* 25.4±1.7 27.8±1.9△ 0.60±0.05高剂量组 155.6±53.3* 55.2±17.9* 1.0±0.8* 25.1±1.6 27.1±1.8△ 0.59±0.06

从表2可见，对照组的ALT、GGT两种酶约为正常组的几倍，虫草灵芝合剂低、中、高3个剂量组的AST 、ALT、GGT皆低于对照组，经t检验除低剂量组与对照组比无显著性差别外，中与高剂量组与正常组比有显著性增加（P＜0.01） 且各剂量组之间存在量效关系；正常组，对照组与低剂量组的实验前后体质量无显著变化，中、高2个剂量组实验后体质量有所增加，与实验前差别非常显著（P＜0.01）。各组之间以每l0g体质量所计的肝重则无显著性差异，

2.3 病理检查

实验各组的小鼠肝脏用10%福尔马林液固定后，经石蜡包埋病理切片，再经HE染色后镜检的结果如下：对照组小鼠因CC14的损伤其肝小叶结构严重紊乱，胞质内可见严重的脂肪变性，纤维组织显著增生，纤维间隔大量形成，肝细胞中央带出现出血性坏死，肝小叶整体呈弥漫性水样性；虫草灵芝合剂的低剂量组与对照组相似，未见用药后有明显改善；但虫草灵芝合剂中剂量组只有轻度水样性病变，且较少有出血性坏死，纤维化明显改善，显示肝组织结构正逐步接近正常组；虫草灵芝合剂大剂量组小鼠肝小叶结构则出现明显改善，小叶分布均匀，多呈放射状分布，汇管区内无出血性坏死。

3 讨 论

本研究运用四氯化碳的肝损伤小鼠经典模型，配以3种剂量的虫草灵芝合剂给予灌胃治疗，结合血清学指标检测，结果发现虫草灵芝合剂能够明显降低3种指标酶的血清含量，表明其对受损肝脏有治疗作用;此外从组织病理切片上发现用药组的肝纤维化病变明显改善，并且呈现剂量相关性。

大量研究显示[1-3]，肝纤维化的形成 MMP-2是肝脏最重要的致肝纤维化因子，其在肝纤维化中的主要作用是促进细胞外基质的合成并抑制其降解；而灵芝多糖能通过减轻 MM-2对肝脏正常基底膜的破坏，从而间接抑制HSC的激活，阻止肝损伤的进一步发生发展。

国内外对冬虫夏草已经有较深入的研究[4-7]，发现天然冬虫夏草具有看氧化作用，可通过清除体内羟自由基，抑制脂质过氧化反应，减少胆固醇沉积，从而减轻肝脏纤维化及对其脏器细胞起保护作用。

虫草灵芝合剂主要是以冬虫夏草和灵芝为主的合剂，此实验结果表明，其具有明显的抗肝损伤的作用，可以预防和抗肝纤维化，希望通过进一步研究开发来应用于临床。

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