类风湿关节炎患者外周血CD19+CD23+B淋巴细胞水平及其与疾病活动性的关系

林 威 陈素娟 (福建医科大学附属协和医院干部病房，福建 福州 35000)

类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis，RA)发病机制可能与遗传、细菌与病毒感染、机体免疫功能紊乱、环境及激素等有关〔1〕。近年来证据表明B淋巴细胞与多种自身免疫性疾病的发病机制有关，但B淋巴细胞在RA发病机制中的作用一直存在争议〔2〕。白细胞分化抗原 (CD)19是B细胞表面所特有的CD抗原分子，在B细胞分化及成熟的全过程中均表达〔3〕，其分子表达可代表B淋巴细胞水平。而CD23是B细胞活化和克隆性增生的标志之一〔4〕，因此外周血CD23+/CD19+细胞的含量可代表活化B淋巴细胞的水平。本研究通过分析外周血B淋巴细胞相关表面标记CD19、CD23的表达与RA患者疾病活动度指标的相关性，评估CD19+CD23+B淋巴细胞检测在反映病情严重程度和监测病情活动性、指导临床用药方面潜在的价值，并进一步探讨B淋巴细胞在RA发病机制中的作用，为临床治疗方案的选择提供理论依据。

1 对象与方法

1.1 对象 选择2008年4月至2009年10月我院收治的50例RA患者为研究对象(RA组)，均符合1987年美国风湿病协会制定的RA诊断标准。排除其他结缔组织病;其他原因引起的严重的肝、肾疾病;其他原因引起的血液、内分泌系统病变;各种感染性疾病或恶性肿瘤等患者。其中男16例，女34例;年龄20～70〔平均(50.9±4.7)〕岁;病程 0.5～28年，平均(4.8±2.5)年。另选择同期健康体检者20例为对照组，性别、年龄均与RA组患者相匹配。

1.2 方法

1.2.1 B淋巴细胞相关表面标记CD19、CD23的检测 RA组患者均于入院时抽取清晨空腹静脉血3 ml;正常对照组于体检时抽取清晨空腹静脉血3 ml。3 000 r/min离心15 min，弃上清，留取沉淀细胞并打散，转入流式管中，应用流式细胞仪(美国贝克曼公司)检测外周血B淋巴细胞相关表面标记CD19、CD23的表达。淋巴细胞分离液、破膜打孔液、异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)标记-抗人CD19单克隆抗体、藻红蛋白(phycoerythrin，PE)标记-抗人CD23单克隆抗体及同型对照等均购自美国贝克曼公司。

1.2.2 疾病活动度指标 收集RA组患者的临床资料和实验室指标，包括晨僵时间、关节压痛数(个，采用28关节计数法)、关节肿胀数(个，采用28关节计数法)、疾病活动指数28(DAS28)、红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、血小板计数(PLT)等。

1.3 统计学处理 应用SPSS11.0统计软件，资料数据以表示，两组之间比较采用t检验，相关资料用Pearson相关分析。

2 结果

2.1 RA组患者和对照组外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表达率 RA组患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+细胞百分率均明显较正常对照组显著升高(P＜0.05)。见表1。

表1 两组外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表达率比较(，%)

表1 两组外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表达率比较(，%)

与对照组比较:1)P＜0.05

组别 n CD19+ CD23+ CD23+/CD19+RA组 50 12.64±2.931) 9.25±2.171) 5.84±1.481)对照组20 6.37±1.74 2.46±0.78 1.95±0.62

2.2 RA患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表达率与DAS的相关性 相关性分析显示，CD19+表达率与晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、RF、PLT、DAS28呈正相关(均P＜0.05)，而与ESR、CRP无明显相关关系(均P＞0.05)。CD23+及CD23+/CD19+表达率与晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、ESR、CRP、RF、PLT、DAS28 呈显著正相关关系(均P＜0.05)，见表2。

表2 RA患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表达率与疾病活动度指标的相关性

3 讨论

以往对RA发病机制的研究多集中在成纤维细胞、巨噬细胞、T细胞或细胞因子等方面，而B淋巴细胞作为抗体介导的体液免疫反应的始动细胞，其与RA发病机制的关系近几年逐渐受到重视。首先是组织病理学发现在RA患者滑膜组织中存在着丰富的 B细胞〔5〕，同时 Brezinschek等〔6〕研究发现利妥昔单抗用于治疗难治性RA患者取得较好的疗效，其作用机制是损耗外周血中的B细胞，提示B细胞可能在RA的发病机制中起着重要作用。因此研究B淋巴细胞与RA的关系对进一步认识RA发病机制及研发新的免疫治疗具有重要价值。

CD19是分子量为95 kD的Ig超家族成员，属于B细胞限制性抗原，其表达高低可代表外周血B淋巴细胞水平，功能类似于T细胞表面的CD4/CD8，具有协同受体的作用，参与调控B细胞的活化和增殖及信号传导过程。目前认为CD19+B细胞可能在RA的发病机制中发挥重要作用〔7，8〕。CD23是分子量为45 kD的低亲和力IgE Fc受体〔9〕，其分子结构包括一个由23个氨基酸残基组成的胞浆内N末端、21个残基的跨膜区和277个残基的膜外区。CD23是重要的白细胞分化抗原，同时也是T细胞来源的低分子量B细胞生长因子受体，主要在B细胞、嗜酸粒细胞、激活的单核/巨噬细胞、部分T细胞等细胞膜上表达。研究发现CD23的持续性表达反映了B淋巴细胞克隆性增生，常作为B淋巴细胞的激活分化标志之一〔10，11〕，而外周血CD23+/CD19+细胞的表达则代表活化B淋巴细胞水平。

本研究结果发现 RA组患者外周血 CD19+、CD23+及CD23+/CD19+细胞百分率均较正常对照组显著升高，提示B淋巴细胞的异常表达在RA发病机制中可能起一定作用。同时分析RA患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+细胞表达与疾病活动度指标的相关性，发现CD19+细胞表达与晨僵时间、关节压痛数、关节肿胀数、RF、PLT、DAS28呈正相关，而与ESR、CRP无明显相关关系，说明在一定程度上，CD19+表达反映了RA病情活动性。CD23+及CD23+/CD19+细胞表达率与疾病活动度指标均呈显著正相关关系，说明 CD23+及CD23+/CD19+与RA的病情活动关系密切，CD23+及CD23+/CD19+检测可为RA的病情监测提供一定的参考。推测可能是RA患者体内各种调控因素刺激B淋巴细胞持续增殖，CD23分子高表达，而CD23高表达对B细胞分化、增殖和成熟有促进作用，使B细胞呈现高反应性而异常活化，并合成和分泌大量自身抗体，加重RA患者的自身免疫紊乱，促进患者病情发展。这也进一步证明了B细胞在RA发病机制中发挥着重要作用，且与疾病活动有关，但具体作用机制仍有待深入研究。

综上所述，外周血中CD19+、CD23+及CD23+/CD19+淋巴细胞的异常表达在RA发病机制中可能起一定作用，且与疾病活动性相关。因此，联合监测CD19+、CD23+及CD23+/CD19+细胞的表达率对RA病情监控具有一定价值，且探讨B淋巴细胞在RA发病中的具体作用机制，有望为应用生物制剂治疗RA以及新药的开发提供理论依据。

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4 Ribbens C，Bonnet V，Kaiser MJ，et al.Increased synovial fluid levels of soluble CD23 are associated with an erosive status in rheumatoid arthritis(RA)〔J〕.Clin Exp Immunol，2000;120(1):194-9.

5 Takemura S，Klimiuk PA，Braun A，et al.T cell activation in rheumatoid synovium is B cell dependent〔J〕.J Immunol，2001;167(8):4710-8.

6 Brezinschek HP，Brickmann K，Yazdani-Biuki B，et al.Treatment of rheumatoid arthritis in the 21st century:targeting B-lymphocytes〔J〕.Wien Med Wochenschr，2006;156(1-2):61-7.

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