老年性瘙痒症小鼠模型的研制

李文露 黄妍丽 张文军 周永红 (暨南大学医学院中医系，广东 广州 510632)

老年性皮肤瘙痒症，中医称为“痒风”或“风瘙痒”，是困扰老年人的常见瘙痒性疾病，发病率约占40.7%。目前和瘙痒有关的分子学基础和病理生理学机制尚未清楚，直接影响到临床治疗药物的开发和研究〔1，2〕。本文拟以中医传统理论为指导，中医整体观为原则，结合风瘙痒形成的内因和外因，采用综合因素造模的方法来进行老年性瘙痒症实验动物模型的研制，为探讨该病的发病机制和临床疗效评价提供一种可靠的实验工具〔3〕。

1 资料与方法

1.1 实验动物 普通级昆明种小鼠22只，7月龄，SPF级，雌雄不限，由广州中医药大学实验动物中心提供〔许可证号:SCXK(粤)2008-0020〕。

1.2 动物饲料、药品及试剂 低铁饲料，由广州市花都区花东信华实验动物养殖场配制(配方:玉米淀粉54%，奶粉40%，豆油5%，食盐1%〔1〕)。变色硅胶，由青岛森威化工有限公司生产，规格:HG/T2765.4-2005，500 g/瓶。Na2CO3固体，由北京化工厂生产，批号:900401，500 g/瓶。

1.3 仪器设备 OLYMPUS倒置显微镜(日本OLYMPUS公司，型号CKX41);冷冻切片机(北京中西泰安技术服务有限公司，型号M288815);苏木素伊红染色试剂盒(北京中西远大科技有限公司，型号m179794)。

1.4 实验方法

1.4.1 实验前 取小鼠22只，称量体重后随机抽取4只小鼠，取尾静脉血，测全血RBC、HGB、HCT、WBC、嗜酸性粒细胞;将2只小鼠脱颈椎致死，剪下腹部、前腿皮肤制成皮肤组织切片在显微镜下观察其皮脂腺并记录。剩余20只小鼠第1天实验前采用录像记录10 min并记录其搔抓次数，以小鼠前爪搔抓头部，后爪搔抓躯干，嘴咬全身各部位作为瘙痒指征。

1.4.2 低铁饲料〔4，5〕喂养 第1天记录搔抓次数后，开始饲喂小鼠低铁饲料，每天饲料量控制约8 g/只，饮水量每天约8 ml/只。从第3天开始隔天定时继续对各组小鼠录像，观察和记录10 min内小鼠搔抓次数。

1.4.3 综合刺激 在饲喂低铁饲料的同时，从实验第11天开始对小鼠进行综合的物理刺激。具体步骤为:①录像记录后将小鼠放入事先置入冰袋的人工气候箱内的铁笼中，电吹风吹冷风档对着冰块吹风30 min;②应用60℃、pH=9的400 ml Na2CO3溶液从气候箱两侧持续喷洒小鼠;③将小鼠置于鼠笼内，笼内事前铺置细碎化纤布料，厚度约为0.5～1 cm;1个装有36 g变色硅胶的镂空小瓶。以上步骤隔天进行一次。实验开始第3周后对所有小鼠称量体重，随机抽取小鼠样本进行血液取样和皮肤取样，检测方法同上。

1.5 统计学方法 采用SPSS统计软件进行统计学处理，小鼠所有参数均以表示，组间差异采用方差分析。

2 结果

2.1 瘙痒次数 由图1可见，第13天至第25天小鼠瘙痒次数恒定保持在较高水平，瘙痒程度较为明显且稳定。

图1 小鼠瘙痒次数时间变化曲线

2.2 血样结果 由表1可见，血液凝滞度增加，小鼠出现了一定程度的阴伤化燥症状。

表1 小鼠血液中相关指标的变化()

表1 小鼠血液中相关指标的变化()

血液检测项目 第1天 第27天RBC(104/μl)855.0±157.19 1 034.0±306.29 HGB(g/L) 125.5±21.30 150.7±54.28 HCT(10－3) 416.0±70.43 490.0±150.70 EO#(10/μl)25.25±6.85 42.3±10.69

2.3 皮肤组织切片 对比实验前后的皮肤组织切片，皮脂腺出现明显聚集现象、皮脂腺腺泡细胞内出现脂质空泡显著增加。见图2。

图2 实验前后小鼠的皮脂腺(HE，×100)

3 讨论

早在隋代《诸病源候论》中就曾提到“风瘙痒者，是体虚受风，风入腠理，与血气相搏，而俱往来与皮肤之间。邪气微，不能冲击为痛，故但瘙痒也。”老年性瘙痒症在中医的病症分型中多属“血虚风燥型”〔6，7〕，《圣济总录》“论曰风瘙痒者，表虚卫气不足，风邪乘之，血脉留滞。中外鼓作，变而生热。热则瘙痒，久不差，淫邪散溢，搔之成疮。”本实验独创性提出以中医传统理论为指导，以中医整体观为原则，结合风瘙痒形成的内因和外因采用综合因素造模，实验注重环境因素对疾病的影响的同时，亦重视老年人的生理病理特点，尤其是模拟中医临床证候的发病特点，避免了以往建立瘙痒症模型时的缺陷。值得一提的是，实验中依据老年性瘙痒症的常见病因选择三个较具参考意义的物理因素(冷风吹、热碱性喷雾、化纤布料)刺激〔8，9〕并结合血虚风燥内因进行综合因素造模。

本实验数据显示小鼠的HCT值末次较前次出现升高，表明实验中控制饮水及物理刺激具有一定成效，小鼠出现了一定程度的阴伤化燥症状。但实验中RBC和HGB值出现了不同程度的增高，考虑可能与HCT升高，小鼠的血清容量相对下降，血液浓缩后造成RBC和HGB值出现了暂时性的升高〔10〕有关。

模拟血虚风燥的外因造模时我们主要采用了观察小鼠搔抓次数来评价瘙痒症状〔11〕和皮脂腺病理切片的方法。实验之初动物搔抓次数明显增加，物理刺激开始后搔抓次数出现较大幅度提升，嗜酸性粒细胞数值随之升高〔10〕，表明实验选取的外因刺激确能诱导小鼠出现瘙痒症状。但由于小鼠对物理刺激具有一定的耐受性，后期一度出现了小鼠搔抓次数的下跌，这也提示我们最佳的造模时间是第13～25天。在整个实验过程中，通过病理切片可以看到小鼠的皮脂腺在实验前后发生明显改变，实验后皮脂腺出现明显聚集现象、皮脂腺腺泡细胞内出现脂质空泡显著增加。综上所述，多种指证均提示采用物理因素结合血虚风燥内因进行综合因素造模的方法具有一定的可行性。

由于本科生从事实验研究的局限性，初步建立的老年性瘙痒症实验动物模型还需要进一步完善:如应积极寻找与人体发病特点更为相近的实验动物，以及对于造模后的细胞形态及结构进行更为深入的观察等等。虽然最终适用于临床药物研究和疗效评价的建模方法尚有待进一步探索，但课题研究中积累的宝贵经验将使我们受益终身。

1 毕晓东，曹 煌，魏羽佳，等.皮肤瘙痒病的研究进展〔J〕.贵州医学杂志，2004;28(4):381.

2 高留泉，王 岩，高向阳，等.老年性皮肤瘙痒症中医治疗研究概况〔J〕.内蒙古中医药2002;6(1):47-8.

3 肖 芸，方肇勤.中医证候动物模型的研究进展〔J〕.内蒙古中医药，2008;10(55):64-5.

4 钱晓飞.特殊配方饲料引起实验动物体重增长缓慢的原因探讨〔J〕.中国比较医学杂志，2007;17(12):752-4.

5 苗明三，方晓艳，孙艳红.血虚动物模型复制的思考〔J〕.光明中医，2003;18(103):8-9.

6 宋兆友.中医皮肤科临床手册〔M〕.北京:人民卫生出版社，1996:59.

7 李建生，刘读文.中医老年医学:基础与实践〔M〕.北京:中国中医药出版社，2005:38.

8 王树椿.老年皮肤病学〔M〕.北京:中国医药科技出版社，1991:172.

9 王庆坦，罗 莉.老年人皮肤瘙痒的临床分析〔J〕.医学信息，2009;(22)6:1028.

10 王鸿利.实验诊断学〔M〕.北京:人民卫生出版社，2005:67-77.

11 沈非沉，王 晖，薛漫清.瘙痒动物模型的研究进展〔J〕.中国比较医学杂志，2007;17(3):182-5.