P16 INK4A与MIB-1在宫颈癌及宫颈癌前病变中的表达

王志新，肖明明

1.辽宁省康平县人民医院妇产科，辽宁康平 110500；2.辽宁省人民医院病理科，辽宁沈阳 110016

宫颈癌在女性癌症发生率中位居第二，有5%的女性患者死于宫颈癌[1]。但宫颈癌是目前唯一可以预防、早期诊断并可治愈的癌症。宫颈细胞涂片及活组织学检查的病理诊断，对减少宫颈癌的死亡率起着至关重要的作用[2]。但由于宫颈涂片筛查的主观性强，所以该法并不是十分精确，这使得宫颈病变显现出很大的筛查局限性，所以迫切需要寻找到一种特异性非典型细胞的生物标志物，来辅助宫颈病变的筛查及诊断。P16 INK4A是一种抑癌基因，其编码的蛋白质能特异性地抑制CDK4的活性，阻止细胞由G1期进入S期和DNA合成的启动，对细胞的生长周期起负性调节作用。MIB-1抗原（Ki-67抗原）是表达于增殖期细胞中的核抗原，参与细胞周期的调控。本文采用免疫组织化学方法检测P16 INK4A与MIB-1在正常宫颈组织及宫颈病变组织中的表达情况，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

63例宫颈组织标本取自20～70岁患者，均经阴道镜活检，并做宫颈涂片。对于宫颈表达有过度出血及坏死的标本视为不满意标本，不列入研究组中。组织活检均由病理专家做出病理分级及分型。根据FIGO方法将病例分为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌。宫颈涂片的细胞学检查按改良的巴氏分级法分为低级别病变、高级别病变、宫颈癌。

1.2 方法

采用免疫组织化学方法对63例组织学标本及38例细胞学标本进行检测。鼠单克隆抗体TRU-P16-432（P16）、鼠抗人克隆ki-67（MIB-1）均购自中杉公司，选择宫颈癌标本作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 判定标准

P16免疫染色弥漫均匀一致地定位于细胞核和 （或）细胞浆中，染色不均匀或局部区域细胞核阳性均定为阳性，弱阳性定为阴性。根据阳性细胞量的多少进行染色分级，0～3级，分别对应的阳性细胞量为 1%～10%，10%～50%，＞50%[3]。MIB-1免疫染色定位于细胞核。在宫颈鳞状上皮中基底部阳性表达属于正常，故把鳞状上皮上2/3阳性被认为是阳性表达，以阳性核所占的百分比分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组，分别对应的阳性核所占百分比为 0%～10%，10%～20%，＞20%[4]。

1.4 统计学方法

数据分析采用STATA 9.2软件包分析。两组间均数的比较采用Kruskall Wallis test。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

在正常宫颈组织上皮细胞、化生的细胞、宫颈管内及炎性反应性的病变中均无P16的表达。所有宫颈上皮内肿瘤及宫颈癌中显示细胞核及细胞浆中阳性或局部细胞核及细胞浆阳性。从正常宫颈组织到浸润性宫颈癌中瘤细胞P16阳性表达率逐渐增高。MIB-1表达在正常宫颈组织中位于基底层细胞。所有宫颈上皮内肿瘤及宫颈癌中都有不同程度的阳性表达。各组间比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表1。

表1 宫颈病变组织中P16及MIB-1的表达情况（例数）

3 讨论

近年来，许多生物标志物被研究并应用于宫颈癌及癌前病变的诊断，P16 INK4A与MIB-1也显示了其巨大的潜在的临床意义。P16 INK4A是一种肿瘤抑制蛋白，其只表达于非典型增生的宫颈上皮细胞中[5]。MIB-1表达于增生活跃的处于分裂期的细胞中，此类细胞在宫颈涂片中可以检测到，通过抑制CDK4和CDK6激酶的活性，使PRb不能磷酸化，进而导致未磷酸化的PRb增多，达到抑制细胞增殖的目的[6]，因此P16与MIB-1在宫颈涂片中的阳性表达，可以作为宫颈非典型细胞的标志。单一的宫颈涂片的检查受到敏感度欠佳、重复率低的制约，由于非典型细胞的结果，会造成很多假阴性和假阳性的结果。为了弥补这一不足，筛查工作就要反复的检查，并且对阳性病例要追踪随诊，此外对于醋白阳性的患者有可能会做一些阴道镜活检。因此在宫颈病变筛查中辅以生物标志物的检测来提高检出率已成为必然。

有文献显示，P16在所有CINⅠ病例中均表达 （n=47），在所有的CINⅡ中均表达（n=32），在所有的CINⅢ中均表达（n=60），58例宫颈鳞癌中有56例表达。在正常的宫颈上皮、炎性病变、低危HPV感染CINⅠ中无表达，与本研究结果相似。本研究免疫组织化学测定结果显示，P16表达于CINⅠ（15/15）、CINⅡ（15/15）、CINⅢ（3/3）、宫颈癌（15/15）中，因此P16的表达可以提示宫颈上皮细胞的异常增殖；有2例低度病变在细胞学中表达阴性，但在组织学中表达阳性，提示P16在宫颈上皮内病变中几乎很少表达为阴性，故可以作为联合生物标志检测的指标对宫颈病变进行筛查，P16的检测可以减少不同观察者间的差异性冲突，也可以减少假阴性及假阳性的干扰，很大程度上改善宫颈癌及癌前病变的筛查工作。此研究结果与Klaes等[7]报道一致。

MIB-1免疫组织化学检测显示在宫颈正常组织、宫颈上皮内病变、宫颈癌中的阳性表达明显依次增强，各组间差异有统计学意义 （P＜0.05），而组内差异无统计学意义 （P＞0.05）。 MIB-1 抗体可以检测 Ki67 抗原在 G1，S，G2，M 期中表达，但在G0期无表达，因此MIB-1是检测宫颈癌及癌前病变细胞增殖性的有效指标。本研究显示CINⅠ（14/15）、CINⅡ（15/15）、CINⅢ（3/3）、宫颈癌（15/15），Mravunac 等[8]报道 显示，MIB-1高的表达指数可以提示宫颈的高度病变，但MIB-1低的表达指数并不能完全排除宫颈高度病变，本研究中并没有观察到宫颈高度病变有MIB-1低表达指数的病例，虽然与上述文献中的研究有不一致的地方，但MIB-1的检测对观察者进行宫颈病变的判断还是很有辅助作用的。

综上所述，P16与MIB-1的表达增强提示宫颈病变，建议在宫颈低度病变中，由于P16有表达阴性的可能，故应与MIB-1表达情况、HPV的检测情况结合起来分析，对于高度病变，P16则是具有高度敏感性及特异性的指标。在进行宫颈病变的筛查工作中应结合形态学辅以P16及MIB-1的检测诊断宫颈病变，以免再行不必要的组织活检。这在宫颈细胞学中不失为一种简单、可靠、易行的检测方法。

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[7]Klaes R,Friedrich T,Spitkovsky D,et al.Overexpression of P16(ink4a)as a specific marker for dysplastic and neoplastic epithelial cells of the cervix uteri[J].Int J Cancer,2001,92(2):276-284.

[8]Mravunac M,Smedts F,Philippi A,et al.Interpreting micro biopsies in cervical smears cytohistologic approach[J].Acta Cytol,2000,44(5):752-759.