双波长分光光度法测定氯霉素氢化可的松滴耳液中氢化可的松的含量

王艺红，郑绍忠，吴艺燕

解放军第一七五医院（厦门大学附属东南医院），福建漳州 363000

氯霉素氢化可的松滴耳液（氯可滴耳液）是《中国医药制剂规范》中收载的品种[1]，其有效成分为氯霉素和氢化可的松，是一种常用的医院制剂。规范中“含量测定”项下未对氢化可的松进行含量控制。为保证制剂质量，笔者参考有关文献[2-4]设计了双波长分光光度法测定氯可滴耳液中氢化可的松的含量。该法不需要分别处理供试品，在氯可滴耳液稀释1000倍后，便可直接测定氯霉素和氢化可的松的含量。

1 仪器与试剂

紫外可见分光光度计 （岛津UV-2250）；分析天平（BT214S，德国赛多利斯）。氢化可的松对照品（山东新华制药股份有限公司，批号：090913）；氯霉素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130555-200602）；氯霉素氢化可的松滴耳液（本院制剂室配制，规格8 ml，批号为100128、100315、100517）；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品贮备液的制备

准确称取105℃下干燥至恒重的氯霉素对照品100.0 mg和氢化可的松对照品20.0 mg，分别用无水乙醇溶解并定容至 200 ml，制成贮备液 A（500 μg/ml的氯霉素对照品）和贮备液B（100 μg/ml的氢化可的松对照品）。再精密量取贮备液A、B各100 ml，于250 ml容量瓶中，加水稀释定容，即得氯霉素浓度为200 μg/ml，氢化可的松的浓度为40 μg/ml的混合溶液。

2.2 等吸收波长的选择

取编号为A、B、C的100 ml容量瓶3个。分别加贮备液A 2 ml；贮备液 B 5 ml；贮备液 A、B 各 2 ml；加水定容，摇匀备用。将以上3种溶液以水为空白，分别于200～400 nm波长范围内扫描，建立紫外光吸收图谱，见图1。根据图1，可见氢化可的松在248 nm处有最大吸收，即λ1＝248 nm，而氯霉素在该点与308.7 nm处有等吸收，即参比波长λ2＝308.7 nm。

2.3 线性关系考察

分别精密量取贮备液 C 0.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 ml分别置于100 ml容量瓶中，用水定容，摇匀。以水为空白，于248、308.7 nm 处测定吸收度（A），求出吸收度之差△A氢化可的松＝A248-A308.7。以浓度（C）为横坐标，△A为纵坐标进行回归分析，得回归方程：A=0.04456C+0.00220，r=0.9999，结果表明，氢化可的松在0～10 μg/ml范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验

取贮备液C 25 ml，用水稀释并定容至200 ml，摇匀。分别取样测定 6 次，测得浓度为 5.076、5.083、5.089、5.090、5.083、5.087 μg/ml，平均 5.0847μg/ml，RSD 为 0.10%。

图1 贮备液紫外光吸收图谱

2.5 稳定性试验

取“2.4”项下供试液，分别于 0、1、2、3、6、8 h 测定，测得浓度分别为 5.059、5.124、5.071、5.140、5.080、5.137 μg/ml，平均为 5.1018 μg/ml，RSD 为 0.70%。

2.6 测定范围试验

精密量取氯霉素氢化可的松滴耳液1 ml，置于100 ml容量瓶中，加水定容，摇匀。再精密量取稀释液4.0、5.0、6.0 ml各5份，分别置50 ml容量瓶中，加水定容并摇匀，即得处方浓度为80%、100%、120%的样品供试液，测定吸光度，得浓度值，见表1。

表1 不同浓度的供试液的浓度测定情况

2.7 加样回收率试验

精密量取贮备液C 4、6、8 ml各3份，分别置于50 ml容量瓶中，再分别各加贮备液B 1.0 ml，加入经稀释了1000倍的空白供试品溶液至刻度，摇匀。测定吸光度，得浓度值，计算加入氢化的松的回收率。见表2。

2.8 样品含量测定

精密量取样品5 ml，稀释1000倍，使之成为每毫升含氯霉素 25 μg，氢化可的松 5 μg 的溶液。 照“2.6”项下方法测定氢化可的松含量；在278 nm处测定氯霉素含量。三批样品的测定结果，见表3。

3 讨论

氢化可的松是氯可滴耳液的主要成分之一，且为激素类成分，不良反应多且严重，为了保障制剂质量，提供临床安全有效的用药，有必要建立氢化可的松的含量测定方法。

表2 加样回收率测定结果

表3 样品测定结果

3.1 供试品溶液的稀释剂选择

氯霉素微溶于水，而氢化可的松不溶于水，因此制备贮备液A、B时使用无水乙醇溶解。此外，其他稀释过程一律选用环保、廉价、易得的纯化水为溶剂，经试验证明，测定的精密度高，稳定性好，结果可靠。

3.2 空白无干扰

不含氯霉素和氢化可的松的空白供试品溶液稀释1000倍后，以水为空白，在200～400 nm波长范围内无吸收，故测定时不需对样品进行特殊处理。

3.3 方法学要求

样品稀释1000倍后，各主要成分在测定波长处的吸收值均在适宜范围内，符合方法学要求。测定氢化可的松的供试液同时也可用于氯霉素的含量测定，无需另行制备，说明本法供试液的制备简便，含量测定快速。

综上所述，使用双波长分光光度法测定氢化可的松的含量操作快速简便，结果准确可靠，适用于氯可滴耳液的质量控制。建议将氢化可的松的含量控制写入法规，进一步完善氯可滴耳液的质量控制。

[1]中华人民共和国卫生部药政局.中国医院制剂规范:西药制剂[M].2版.北京:中国医药科技出版社,1995:158.

[2]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典[S].二部.中国医药科技出版社,2010:1031.

[3]彭芳玲,李国强,龙荣.氯霉素氢化可的松滴耳液的制备和质量控制及临床应用[J].现代医药卫生学杂志,2006,22(11):1639-1640.

[4]李小军,王永桂.分光光度法测定氯霉素氢化可的松滴耳液中氢化可的松的含量[J].中国药事,2004,18(3):179-180.