绿色棘孢木霉菌株固体发酵条件优化及其生物学特性的农业应用

尹秀兰 周双林

（绥化农垦晨环生物科技有限责任公司，黑龙江 绥化 152000）

1 材料和方法

1.2 菌株：木霉Trichcderma.asperellium属半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目类，是广泛存在于土壤的习居菌。此菌株来自于俄罗斯远东农业技术中心分离，纯化并鉴定。

1.3 菌种斜面培养基：

PDA 培养基（g/L）：马铃薯 200，葡萄糖20，琼脂 20

基本培养基：玉米芯小颗粒

改良培养基:麸皮，锯末，稻壳以 1：2：1混合后共5KG，再加入KH2PO44.8g MGSO43.6g NaHCO32g H2O 2000mL以柠檬酸或草酸调节PH5-7，分装于带盖的盒子内,厚约2cm,灭菌后接入孢子悬浮液（孢子4.0x107个/mL）

1.4 化学试剂:国产分析纯

2 木霉菌固体发酵的过程的结果及讨论

2.1 用改良后的固体培养基在常规条件下的产酶过程,结果如图，在接种1d内培养基表面出现少量的白色菌丝,残糖变化较小,蛋白质开始合成,2d后菌丝开始大量产生并出现少量的绿色孢子呈绒毛状并开始结块,此时木聚糖酶开始合成,残糖下降,蛋白质合成增加,4d后残糖已经降到起始量的一半以下,木聚糖酶活力达到最大值,大量的深绿色孢子出现,发酵结束。

2.2 温度对发酵过程的影响:不同温度测定发现采用变温处理，发酵前期24℃为适应期，温度较高有利于菌丝的萌发,使适应期缩短。中期20℃为对数期生长旺盛,产生大量的生物热,降低温度加强通气有利于散热,。后期26℃成熟期,营养降低,生长缓慢此时应升高温度缩短周期,含孢量达到最高值240亿/g,木聚糖酶的活力值也处于优势。

2.3 无机盐的加入对发酵过程的影响:无机盐可以缓冲固体发酵中PH的变化,避免发酵过程培养基过酸过碱,而其中的K+和SO4离子更可以促进后期菌丝产孢,营养平衡。

2.4 接种量发酵条件的影响:实验表明接种量过低发酵周期延长,同时染菌机率增大,孢子数量也低,接种量过高,发酵速度加快,周期缩短,菌丝体繁殖不正常,不利于木聚糖酶的合成,孢子数量少,处于4.0*107个/mL时最好。

2.5 拌水量对发酵过程的影响:固体发酵中,菌体的萌发,生长离不开水分,但菌体在代谢和生长中会产生大量的生物热,水分过高时影响通气,不利于菌丝的生长和繁殖,水分过少不利于各种营养元素的吸收和利用,对后期孢子萌发也影响很大，导致实验失败，一般控制在6-8%。

2.6 培养基的厚度对发酵过程的影响：此木霉均是一种好气性真菌，固料间的大小和厚度会影响菌体生长所需的氧也会散去发酵过程产生的热量和二氧化碳，厚度为2cm有利于水分的保持,和散热并排除有害气体,降低温度。

2.7 PH值对发酵过程的影响:该菌株具有极强的耐酸耐碱能力，在PH2.5-9.5的范围内均可生长,最适为PH5.6-6.5,在此范围内繁殖能力强,生长速度快,而添加草酸0.05%生物量的对照值高达普通PH范围的1.5倍。

[1]张星元.生物学与经济学的复杂性问题[J].江南大学学报 (人文社会科学版)，2010-04-20.