果旭阿汤中土木香内酯和异土木香内酯的含量测定

陈晓红，陈睿，陈元涛，热增才旦，段黎昊

(1.青海大学医学院药学系，西宁 810001;2.青海师范大学化学系，西宁 810008;3.青海省质量技术监督局，西宁 810008)

藏药果旭阿汤是藏医药世家通过长期实践总结出的治疗血隆病的经典处方之一，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》第1册中［1］，在《四部医典》［2］和青海的藏药志中也有记载。该处方主治功能为开胸解郁行气、镇痛，用于治疗血隆病引起的胸闷气短、胸胁疼痛和肩背胀痛等症。通过查阅文献［3-7］，笔者未见果旭阿汤中藏木香有效成分土木香内酯和异土木香内酯含量测定方法的报道，因此通过对藏木香中有效成分提取方法、提取溶剂以及影响测定结果的其他参数进行了比较，采用气相色谱法测定藏药果旭阿汤中藏木香有效成分土木香内酯和异土木香内酯的含量，为该药质量标准的建立提供了实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 气相色谱仪(Agilent 7890型);FID检测器;GCD-500G高纯氢气发生器(北京佳维科创科技有限公司)。超声仪(KQ-250DV型，250 W，40 kHz，昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药 土木香内酯对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110760-200507，供含量测定用);异土木香内酯对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110761-200204，供含量测定用);超纯水;乙酸乙酯(色谱纯);藏药果旭阿汤样品所用药材均由青海省藏医药研究所提供(批号:100801，100802，100803)，并经青海省药品检验所鉴定。各缺味阴性对照样品按四味藏木香汤散的处方及制备工艺进行缺味制备。

2 方法与结果

2.1 提取条件的选择 同时提取土木香内酯和异土木香内酯，采用乙酸乙酯超声提取30min。

2.2 色谱条件 色谱柱:SE-30(30 m×0.32mm，0.50 μm);程 序 升 温 法:初 始 温 度 50℃，以20℃·min-1升 至 170℃，保 持 28min，再 以25℃·min-1升至250℃;分流比:10∶1;检测器温度:260℃;载气:氮气;流速:1.0mL·min-1。

2.3 对照品溶液制备 分别精密称取土木香内酯和异土木香内酯对照品各20 mg，置10mL量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，配成2.00 mg·mL-1储备液。各吸取2.00 mg·mL-1土木香内酯对照品储备液和异土木香内酯对照品储备液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mL，分别置于5mL量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，制得土木香内酯和异土木香内酯系列对照品溶液。

2.4 供试品溶液 精密称取果旭阿汤样品(悬钩木、藏木香、宽筋藤、干姜和马钱子按处方比例混匀，藏木香在成药中所占的比例约为20.2%，过孔径0.355mm药筛)3份，加入乙酸乙酯30mL，称定质量，超声处理30min，取出，冷至室温，再称定质量，用乙酸乙酯补足质量，摇匀，过滤，取滤液作为供试品溶液。

2.5 空白实验 取不含藏木香成分的果旭阿汤阴性样品1份，按“2.4”项方法制成阴性样品溶液。分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各1.0 μL注入气相色谱仪，按色谱条件依次测定。结果该阴性溶液在土木香内酯峰的位置上无干扰。

2.6 线性关系考察 分别吸取土木香内酯和异土木香内酯系列对照品溶液1.0 μL进样，测定其含量。结果土木香内酯和异土木香内酯均在 0.1～1.0 mg·mL-1内呈良好线性关系，回归方程分别为Y=1.35×103X+8.17(r=0.999 3)，Y=1.25×103X+32.3(r=0.999 8)，前者检测限为 2.7 μg·mL-1(S/N=3)，后者检测限为 2.6 μg·mL-1。

2.7 精密度实验 分别取0.20 mg·mL-1土木香内酯和异土木香内酯的对照品溶液，进样，测定其含量。结果，土木香内酯的RSD为1.25%(n=6)，异土木香内酯的RSD为1.16%(n=6)。说明该实验方法准确。

2.8 重复性实验 取样品粉末按“2.4”项方法分别配制供试品溶液6份，依次测定土木香内酯和异土木香内酯的含量。结果土木香内酯和异土木香内酯的平均含量分别为2.65和3.60 mg·g-1，RSD分别为1.44%和1.16%。结果表明，该方法重复性良好。

2.9 稳定性实验 取同一批次供试品，按“2.4”项方法分别配制供试品溶液5份，依次放置0，4，8，12，24 h后，分别测定。结果土木香内酯的RSD=1.02%(n=5)，异土木香内酯的RSD=1.32%(n=5)。说明稳定性很好。

2.10 加样回收率实验 分别精密称取已知含量的土木香内酯和异土木香内酯样品约1.0 g，分别准确加入1.00 mg·mL-1对照品溶液 2.00mL，按“2.4”项方法分别制备供试品溶液，依法测定，结果土木香内酯和异土木香内酯平均回收率分别为97.25%，97.42%;RSD分别为 0.93%，0.90%，见表 1。

表1 土木香内酯和异土木香内酯的加样回收率测定结果Tab.1 Resultsofrecovery ofalantolactoneand isoalantolactone mg，n=6

2.11 样品含量测定 取3批样品，分别按“2.4”项方法制备供试品溶液，依次测定土木香内酯和异土木香内酯含量。结果土木香内酯含量分别为2.65，2.59，2.61 mg·g-1，平均 2.62 mg·g-1，RSD=1.21%(n=3);异土木香内酯含量分别为 3.34，3.37，3.39 mg·g-1，平均 3.37 mg·g-1，RSD=0.76%。

3 讨论

实验中同时提取土木香内酯和异土木香内酯，分别采用三氯甲烷冷浸提取14 h、甲醇超声提取、乙酸乙酯超声提取和乙醚回流提取的方法对同一批样品进行了提取和测定，对这几种方法地提取速度和分离效果进行比较研究，发现提取速度、提取率略有差别:三氯甲烷冷浸法耗时长，操作较繁琐，不利于快速、及时分析;甲醇超声提取40min能较完全地提取药材中的土木香内酯和异土木香内酯，但耗时也较长;乙醚回流提取样品液虽简单快速，但脂溶性杂质较多，影响色谱柱的分离效果;用乙酸乙酯超声提取30min法提取率较高，又省时，故本实验采用此提取方法。

以乙酸乙酯为溶剂，比较超声提取法 30，60，90min提取效果，结果发现超声提取30min提取的含量差别不大，由于其操作时间短，选择超声30min为提取条件。

在其他色谱条件固定的条件下，笔者对5种不同的升温程序进行了选择，包括初始温度、升温速率进行了选择、比较，并且考虑分离度、分析时间长短及高沸点杂质的影响，选择了简单易行的提取条件和色谱条件，基本消除了其他成分的干扰。

本研究结果表明，采用气相色谱法同时测定藏药果旭阿汤中土木香内酯和异土木香内酯含量，快速、准确，简便可靠，重复性好。本实验所建立的方法，为更好地控制藏木香药材及其制剂的质量标准和藏药综合开发利用提供了科学依据。

［1］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准［S］.藏药.第1册.1995:309.

［2］玉妥·云丹贡保.四部医典(藏文)［M］.拉萨:西藏人民出版社，2000:70.

［3］曾锐，瞿燕，高宇明.反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定藏药六味能消胶囊中土木香内酯和异土木香内酯的含量［J］.中国药学杂志，2007，42(7):491－493.

［4］董琦，马世震，胡凤祖.高效液相色谱(HPLC)法测定不同采收期栽培藏木香中内酯类成分［J］.中草药，2010，41(7):1186.

［5］王秀丽，栾杨，刘拥军，等.气相色谱法测定土木香中土木香内酯含量［J］.山东中医大学学报，2005，29(4):322－323.

［6］丘翠嫦，戴斌.新疆木香中土木香内酯与异土木香内酯的分离鉴定［J］.中药材，1995，18(1):30－32.

［7］杨媛媛，马晓康，顾政一，等.不同产地新疆赤芍中芍药苷的含量测定［J］.医药导报，2008，27(7):763－764.