高效液相色谱法测定泻停封胶囊中苦参碱含量

2011-07-28杨芳

中国药业 2011年24期

杨芳

(湖南省常德市药品检验所，湖南常德 415000)

泻停封胶囊主要由金果榄、苦参、地榆、功劳木4味中药材组方，具有清热解毒、燥湿止泻等功效，用于腹泻、伤食泄泻、脘腹疼痛、口臭、嗳气、急慢性肠炎等。方中苦参为豆科植物苦参 Sophora flavescens Air.的干燥根，主要有效成分苦参碱具有抗肿瘤、抗心律失常、抗菌、正性肌力、镇痛等作用[1]。原标准[2]中仅对功劳木中盐酸小檗碱有定量指标。本试验参考文献[1－11]，建立测定泻停封胶囊中苦参碱含量的反相高效液相色谱法，为完善该制剂质量标准提供依据，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱仪，包括Waters2489紫外检测器、四元梯度泵、在线脱气装置、柱温箱、EMPower色谱工作站，溶剂过滤系统;梅特勒－托利多AG135型电子天平(德国Sartorius公司);KQ2200E型超声波清洗器。水为Ⅰ级水，甲醇、乙腈为色谱试剂，磷酸二氢钾、三氯甲烷均为分析纯;苦参碱对照品(批号为110805－200306，中国药品生物制品检定所);泻停封胶囊(贵州百灵企业集团制药有限公司，批号分别为090306，090902，091003)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Hypersil BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.05 mol/L的磷酸二氢钾溶液－乙腈－甲醇 (94∶5∶1);流速:1.0 mL/min;检测波长:205 nm;柱温:30 ℃;进样量为 10 μL。采用外标法定量。分离度均应大于1.5，理论板数按苦参碱峰计算应不低于5000[3]。高效液相色谱图见图1。

2.2 溶液制备

取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含苦参碱0.128 mg的溶液，即得对照品溶液。取装量差异项下的本品内容物，研细，取0.3 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加三氯甲烷25 mL和浓氨试液1 mL，密塞，称定质量，时时振摇，放置过夜，再称定质量，用三氯甲烷补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，减压回收至干，残渣加流动相使溶解，转移置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取除苦参药材外，将其他药材按处方中药味的比例，配制阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 1，5，10，15，20 μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积积分值为纵坐标、对照品进样量(μg)为横坐标进行线性回归。得回归方程 Y=1.035×107X－1.066×105，r=0.9997(n=5)。结果苦参碱进样量线性范围为 0.128 ～2.56μg。

精密度试验:分别精密吸取同一对照品溶液，按拟订的色谱条件重复进样6次测定。结果苦参碱峰面积的 RSD为1.0%(n=6)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，按拟订的色谱条件于0，4，8，12，24，48 h时进样测定。结果苦参碱峰面积的 RSD为1.2%(n=6)，表明供试品溶液在48 h内稳定。

重现性试验:取样品6份，按2.2项下方法制备供试品溶液，按拟订的色谱条件进行测定。结果苦参碱峰面积的 RSD为1.3%(n=6)，表明方法重复性好。

加样回收试验:取已知含量(5.51 mg/g)的样品9份 (批号为091003)约 0.15 g，加入苦参碱对照品溶液(0.422 g/L)，按供试品溶液制备方法配制高、中、低3组质量浓度的溶液，每一质量浓度2份，按拟订的色谱条件测定。结果见表1。