反相高效液相色谱法测定硫酸阿托品注射液的含量

2011-07-28刘海燕蒋红霞

中国药业 2011年24期

刘海燕，蒋红霞

(河南省周口市食品药品检验所，河南周口 466000)

硫酸阿托品(AtropineSulfate)属莨菪碱类生物碱，是一种常用的抗胆碱药，其注射剂的含量测定采用经典的酸性染料比色法[1]。该法操作比较烦琐，影响因素多[2]。参照有关文献[3－4]，笔者建立了测定其含量的高效液相色谱(HPLC)法，可以消除辅料的干扰，简化分析步骤，结果比较满意。现报道如下。

1 仪器与试药

LC－2010CHT型全自动高效液相色谱仪(日本岛津);UV Detector紫外检测器;92SM－202A－DR型电子分析天平;V－530型紫外－可见分光光度计。硫酸阿托品对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100040－200510);硫酸阿托品注射液(郑州羚锐制药股份有限公司，批号分别为0910072，1001081，1006162，规格为2∶1 mg);乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾、庚烷磺酸钠、氢氧化钠、三氯甲烷、溴甲酚绿和邻苯二甲酸氢钾均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱温:30 ℃;流动相:0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.0025 mol/L庚烷磺酸钠，用氢氧化钠试液调节 pH至 5.0)－乙腈(82∶18);流速:0.8 mL/min;进样量:20 μL;检测波长:225 nm。外标法计算峰面积。

2.2 溶液制备

精密称取于120℃干燥的硫酸阿托品对照品50.12 mg，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液25 mL置100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取供试品25 mL，置50 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:按处方比例及制备工艺制备不含硫酸阿托品的阴性样品。按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液，并按上述色谱条件进行检测。结果阴性对照品溶液在硫酸阿托品对照品出峰位置未见干扰峰，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取对照品贮备液 0.5，1.0，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加水至刻度，摇匀，各精密量取20 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积 A为纵坐标、进样量 C(μg)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 A=389800 C+11262，r=0.99975(n=7)。结果表明，硫酸阿托品进样量在1.0024～10.024μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一份对照品溶液，重复进样6次，依法测定。结果峰面积积分值的 RSD为0.56%(n=6)，表明仪器进样精密度良好。

稳定性试验:精密量取同一供试品溶液，在室温下分别于0，1，3，5，8，12 h时进样，依法测定。结果峰面积积分值的 RSD为0.93%(n=6)，表明硫酸阿托品在12 h内基本稳定。

重复性试验:取供试品，按供试品溶液制备方法制备6份溶液，并按上述色谱条件测定。结果硫酸阿托品平均含量为标示含量的 99.1%，RSD 为 1.05%(n=6)。

加样回收试验:精密量取已知含量的样品(批号为0910072，含量为0.4955 g/L)10 mL，共6份，置50 mL量瓶中，每2份为1组，分别精密加入对照品贮备液 2.5，5.0，7.5 mL，加水稀释至刻度，摇匀。照拟订的色谱条件进样，测定峰面积，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批供试品，按拟订的方法制备供试品溶液并测定含量，同时以药典中的含量测定方法测定含量。结果见表2。

3 讨论

取对照品溶液，在200～400 nm波长范围内扫描，结果在225 nm波长处有最大吸收，故选用225 nm作为测定波长。本试验比较了几种不同流动相体系，如0.025 mol/L磷酸(以三乙胺调 pH为 3.0)－乙腈 (82 ∶18)，甲醇 (加0.05%三乙胺，用磷酸调 pH=5.8)－水(50∶50)0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.0025 mol/L庚烷磺酸钠)－(82∶18)－乙腈(用氢氧化钠试液调节pH至5.0)，发现最后1种流动相体系所得色谱图峰形较好、保留时间适中，且峰面积和出峰时间较稳定，故采用此种流动相。