两种降钙素原检测方法的比较研究

高红军，郑 敏，周艳秋*，王洪武

1.煤炭总医院中心实验室，北京 100028；2.北京市朝阳区三间房第二社区卫生服务中心，北京 100024

降钙素原（procalcitonin，PCT）目前主要用于鉴别严重细菌感染和病毒感染、自身免疫性疾病所致的炎症性反应[1]。PCT是由116个氨基酸组成的糖蛋白，是降钙素（calcitonin，CT）的前体[2]。外周血中的PCT通常在严重的细菌感染及脓毒血症时才明显升高，由此PCT可用来早期检测败血症，并快速评估其严重程度[3-5]。目前临床上使用的PCT检测方法主要分为两大类，一类是定量检测，一类是半定量检测。定量检测和半定量检测在实际临床应用中结果是否完全一致值得探讨，本研究选用国产定量检测试剂盒和进口半定量检测试剂盒对比研究其检测结果的一致性。

1 材料与方法

1.1 材料

PCT定量检测试剂盒购自深圳新产业生物医学工程有限公司（批号：F68100801188）；PCT半定量检测试剂盒购自德国B.R.A.H.M.S公司（批号：0106007）。60例检测标本为2010年12月～2011年3月实验室接收的临床送检标本。PCT半定量法随时检测送检标本，剩余血清-80℃保存用于PCT定量检测（一次完成）。

1.2 方法

1.2.1 定量PCT检测 严格按照厂家试剂盒标准操作规程进行试验。标准品、质控品、标本各加20 μl，然后加发光物标记抗体 20 μl，加荧光素标记抗体 20 μl，混匀，37℃水浴 15 min；加磁分离试剂 40 μl，混匀，37℃水浴 5 min，上磁分离器分离4 min，倒去上清；加应用洗涤液 400 μl，混匀，上磁分离器分离4 min，倒去上清；重复一次洗涤过程；直接按要求上机测试。PCT浓度与相对光强度（RLU）成一定的比例关系，仪器自动拟合计算PCT浓度。

1.2.2 半定量PCT检测 将分离后的血清200 μl加到反应孔中，定时开始，观察反应区的颜色变化，如果2～3 min后反应区无较明显的显色反应，继续加血清200 μl至反应孔中，再计时30 min后观察反应区的颜色。在红色的对照带显示的前提下（证明PCT试验有效），如果加入的总血清量为200 μl，比照200 μl的比色卡读出PCT的大概范围（结果分为<0.5 ng/ml，≥0.5 ng/ml，≥2 ng/ml，≥10 ng/ml）；如果加入的总血清量为400 μl，比照 400 μl的比色卡读出 PCT 的大概范围（结果分为<0.25 ng/ml，≥0.25 ng/ml，≥1 ng/ml，≥5 ng/ml）。

2 结果

本研究共收集了60例进行半定量PCT测定的标本，随后用定量检测试剂盒分析了PCT的具体含量，比较二者检测结果的一致性（表1）。不同半定量范围内的PCT与定量PCT检测结果是否一致的判断标准如下：①≥10 ng/ml的标本，只要定量检测值≥10 ng/ml即认为二者检测结果一致；②半定量PCT结果介于中间值范围的标本，只要定量检测值在相应的范围内，即认为二者检测结果一致；③<0.25 ng/ml的标本，只要定量检测值＜0.25 ng/ml即认为二者检测结果一致；④定量值如果超出对应的半定量范围，那么超出范围的定量数值是否与半定量PCT检测结果一致，按照如下标准判断，如果定量数值低于下限，如有按照二者检测一致判断，否则认为二者检测结果不一致；如果定量数值高于上限，如有按照二者检测一致判断，否则认为二者检测结果不一致。从表中可以看出两种方法检测结果一致率达90%，只有10%的标本检测结果相差比较大。

表1 半定量PCT与定量PCT检测结果一致性比较

3 讨论

PCT的临床检测方法主要包括定量法和半定量法[6]，二者的检测基础均是利用了抗原抗体的特异性免疫反应。本试验采用的定量检测法的原理是免疫发光夹心法：采用针对PCT的一株单克隆抗体标记ABEI，另一株标记FITC。标本、标准液、质控液与ABEI标记的单克隆抗体，FITC标记的单克隆抗体，混匀置37℃孵育形成“夹心三明治”，加入包被羊抗FITC抗体的纳米免疫磁性微珠，37℃孵育后外加磁场沉淀目的抗原抗体复合物，去掉上清液漂洗后通过检测发光强度（RLU）判断PCT的含量。其他厂家的定量检测试剂的原理基本类似，不同的地方主要是与抗体相连的示踪物和标记物不同，自动化程度略有不同。半定量法主要是应用一个单克隆鼠抗katacalcin（一种PCT降解产物）抗体结合在胶体金上（示踪物）和一个多克隆羊抗降钙素抗体（固相）。标本加到反应孔后，示踪物结合样品中的PCT并形成明显的抗原抗体复合物。该复合物经虹吸作用通过观察区，在这里标记的抗原抗体复合物结合到固定的抗降钙素抗体上形成夹心复合物。当PCT高于检测下限时，夹心复合物呈红色带，颜色深浅与样品中的PCT浓度成正比。未结合的示踪物扩散到对照区，结合并产生了红色的对照带。

半定量PCT检测有方法简单、报告结果快、不受标本数量和特殊设备限制等优点，然而由于半定量检测需要肉眼观察色带，不同操作者的判断可能截然不同，尤其是接近阳性下限值时比较难判断，有时可能误导临床医生的治疗。因此，PCT的定量检测显得尤为重要，尤其是对于需要定期观测治疗效果的患者很有意义。本研究比较了两种不同方法的检测结果，由于一种是定量检测，另一种是半定量检测，检测结果不能进行相关性分析，因此本研究借鉴相对偏差的分析方法判断二者检测结果是否一致，其中偏差计算中的平均数是上限值或下限值与超出范围的定量值和的一半，单纯从数值考虑，相对偏差小于10%时笔者认为二者检测结果一致，超过10%则认为检测结果不一致。如果按照半定量PCT检测方法中小于0.25 ng/ml作为阴性值的判断标准，那么从检测结果阴阳性的角度考虑，其中54例二者的检测结果一致，一致率高达90%。

定量方法需要同时做标准曲线和质控品，从实验室效益管理角度考虑，比较适合临床标本比较多的实验室。半定量法的主要优势在于检测快速，不受标本数量限制，比较适合急诊科、ICU等重症监护患者的定性判断。本研究结果表明两种检测方法的检测结果还是比较一致的，均是临床上比较可靠的方法，每个实验室可以根据自己的实际情况选择其中一种或联合两种检测方法为临床提供及时可靠的检测报告。

[1]杨滨,康梅.降钙素原在细菌感染性疾病诊断及治疗中的应用[J].现代预防医学,2009,36(3):596-597.

[2]Oberhoffer M,Karzai W,Meier-Hellmann A,et al.A new diagnostic parameter for severe infections and sepsis[J].Anaesthesist,1998,47(7):581-587.

[3]Sudhir U,Venkatachalaiah RK,Kumar TA,et al.Significance of serum procalcitonin in sepsis[J].Indian J Crit Care Med,2011,15(1):1-5.

[4]陈自武.降钙素原、超敏C反应蛋白与外周血碱性磷酸酶积分在细菌感染中应用探讨[J].临床和实验医学杂志,2010,9(8):572-573.

[5]杜冀晖,苏卓娃,麦丽文,等.血清降钙素原测定在儿科感染性疾病诊断中的应用[J].临床和实验医学杂志,2006,5(9):1320-1321.

[6]陈淑丹.降钙素原的临床应用及不同检测方法[J].现代医学仪器与应用,2007,19(4):61-62.