黏蛋白1在低分化胃癌细胞中的表达及临床意义

张 波，邸雅南，彭德银

北京航天总医院消化内科，北京 100076

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展是一个多因素、多步骤的复杂过程。随着人们对肿瘤研究的不断深入，黏蛋白1（mucin1，MUC1）作为黏蛋白家族中的重要成员之一，在胃癌中的表达和转移中的作用也日益凸显出来。本文就MUC1在转化的可传代人胃黏膜上皮细胞系（GES-1）和低分化胃腺癌细胞系（BGC-823）中的表达及其意义进行探讨。

1 材料与方法

1.1 细胞培养和细胞株处理

SV40病毒转化的可传代人胃黏膜上皮细胞系（GES-1）由北京市肿瘤防治研究所提供；低分化胃腺癌细胞系（BGC-823）由哈医大肿瘤研究所提供。GES-1和BGC-823用含15%灭活胎牛血清和适量抗生素的RPMI Medium 1640培养液，在含5%CO2、37℃条件下培养。在24孔板中每孔均放置5 mm×5 mm的盖玻片一块，并加入对数期的GES-1、BGC-823 细胞分别为（4×104）、（10×104）个，贴壁生长至占盖玻片面积的80%时，进行固定、染色。

1.2 试剂

羊抗人MUC1多克隆抗体购自SANTA CRUZ公司；FITC-兔抗山羊IgG购自北京中杉；RPMI Medium 1640购自GIBCO；FBS购自四季青公司。

1.3 间接免疫荧光染色法检测黏蛋白1在胃黏膜上皮细胞系和低分化胃腺癌细胞系中的表达

弃去24孔板中培养液，滴加pH 7.4的PBS冲洗标本，轻微震荡；4%多聚甲醛室温固定30 min；0.5%Triton X-100/PBS液抽提30 min；然后用PBS冲洗，取出玻片，滴加1∶200羊抗人MUC1多克隆抗体；将玻片置于湿盒内，4℃过夜；用PBS冲洗后取出玻片，滴加1∶100 FITC-兔抗山羊IgG抗体（在暗室中进行）；室温，将玻片平放在湿盒内2 h；然后荧光显微镜下观察拍照。

1.4 结果判定

设两组阴性对照：一组不加Ⅰ抗和Ⅱ抗，用于荧光强度的基线校正；一组仅加Ⅱ抗，用于非特异性结合对照。用荧光显微镜在蓝色激发光下观察结果：抗体结合处呈现绿色荧光，说明该处有MUC1的存在，判定为阳性表达细胞，如无绿色荧光呈现，判定为阴性表达细胞；重复试验，取平均值。

1.5 统计学方法

利用多功能成像分析系统 （Motic软件开发公司）进行MUC1的平均光密度检测。采用SPSS 13.0软件进行数据分析，计量资料采用均数±标准差（）表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

MUC1在GES-1中的表达均为弱阳性；而在BGC-823中MUC1的表达为强阳性，由表1可见，GES-1和BGC-823细胞系中MUC1表达（平均光密度）差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 黏蛋白1在胃黏膜上皮细胞系和低分化胃腺癌细胞系中的表达

3 讨论

MUC1是一种在上皮性肿瘤高度或异常表达的膜糖蛋白，是肿瘤的侵袭转移及易感性等有关的重要基础[1]，MUC1在所有正常及癌变的多种组织中均表达，而在间叶组织来源的淋巴结中不表达，因此可作为某些上皮肿瘤发生淋巴结转移的有效标志物[2]。

本实验中，应用间接免疫荧光法对MUC1在GES-1和BGC-823中的表达和定位进行检测。实验结果显示，MUC1在两种细胞系中的表达是有差异性的。侵袭和转移潜能高的BGC-823中MUC1的表达率高于GES-1，这说明MUC1在细胞中的异常表达加速了肿瘤的发生和发展，暗示着 MUC1基因的产物以某种方式参与了致癌和转移过程。

MUC1基因编码Ⅰ型跨膜胞膜表面多种肿瘤细胞内MUC1呈过度表达，以往对结肠癌、胰腺癌及乳腺癌的研究发现，过度表达的MUC1可赋予肿瘤生长与转移性质，使肿瘤侵袭性增加[3-6]。MUC1促进肿瘤细胞增殖可能与以下两条信号通道活化有关：一是核因子-κB（NF-κB）信号通道活化，另一机制涉及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通道活化。已发现MUC1基因启动子区有κB结合位点，而胃癌等多种癌肿中存在NF-κB活化[7-8]，活化的NF-κB作为细胞增殖促进因子及抗凋因子可以促进肿瘤细胞增殖；另外，NF-κB作为转录因子反过来促进MUC1等下游基因转录，进一步促进肿瘤细胞增殖。MUC1分子末端与β-连环蛋白相结合后定位于细胞核内，参与细胞周期素D1（cyclin D1）等下游基启动子活化，上调细胞周期素D1等基因表达，促进肿瘤细饱增殖[9-10]。

MUC1在肿瘤细胞中异常过量表达，这与MUC1的C-ter亚基介导的C-Src信号途径有关[11]，其过量表达可以抑制细胞凋亡、促进相关基因的转录，并导致细胞转化。MUC1亦可通过在细胞表面的过度表达减小细胞-细胞、细胞-细胞外基质的黏附使肿瘤细胞易于从原发部位脱离，从而更利于肿瘤的转移。Beya等[12]提出了肿瘤干细胞（cancer stem cell）的概念，C1arke等[13]首次成功地从乳腺癌分离筛选出表达CD44+和ESA的细胞，在小鼠实验中证实了肿瘤干细胞的存在，有学者认为，MUC1是胃癌肿瘤干细胞的另一个重要标志物。因此，笔者下一步的工作重点将集中探讨MUC1在胃癌的侵袭和转移中发挥的具体作用，并作更深一步的研究，为以后利用细胞系研究肿瘤的转移和基因治疗实验提供了理论基础和可行性依据。

MUC1表达可作为胃癌恶性程度高低的标志，进一步探讨MUC1表达与胃癌发生、发展、转移的关系，对指导临床诊断、判断预后及肿瘤免疫治疗有很重要的意义[14]。但由于胃癌发生和转移是一个涉及多环节的复杂过程，结合其他基因表达的多因素综合分析，有益于提高对转移机制的深入认识，更利于为临床治疗提供正确指导。

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