复方鱼腥草软胶囊中（R，S）-告依春含量测定方法的研究

黄舒丽

广东仙乐制药有限公司，广东汕头 515041

复方鱼腥草软胶囊是由复方鱼腥草片改变剂型而来的。本方由鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘和金银花等药味和基质组成，具有清热解毒的功效，用于外感风热所致的急喉痹、急乳蛾，症见咽部红肿、咽痛；急性咽炎、扁桃体炎见上述症候者[1-3]。复方鱼腥草片已收载于《中国药典》2010年版中[4]，其质量标准中仅有黄芩苷含量的测定方法，为了更有效地控制和提高复方鱼腥草软胶囊的质量，针对复方鱼腥草软胶囊中的另一主要有效成分（R，S）-告依春，建立HPLC法进行定量测定。本实验结果表明该方法简便、准确、重复性好，为复方鱼腥草软胶囊的质量标准研究提供了依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters e2695高液相色谱仪（美国沃特斯公司），配有梯度洗脱泵、在线脱气机、自动进样器、UV-2487紫外检测器、Empower 2色谱工作站；DS-7510DTH型超声清洗器（上海生析超声仪器有限公司）；CP225D型电子天平（赛多利斯中国有限公司）。

1.2 试药

（R，S）-告依春对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111753-201103）；复方鱼腥草软胶囊（广东仙乐制药有限公司提供，批号：20110201、20110202、20110203）；甲醇为色谱纯（美国TEDIA“天地”试剂公司）；超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为 Hypersil ODS C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.02%磷酸溶液（7∶93）；流速：1.0 ml/min；柱温：35℃；检测波长：245 nm；进样量：20 μl。 理论板数按（R，S）-告依春峰计不低于4000。

2.2 供试品溶液的制备

取本品内容物约0.75 g，精密称定，置25 ml量瓶中，精密加入50%乙醇20 ml，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）45 min，放冷至室温，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取（R，S）-告依春对照品 5 mg，置 100 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每毫升含 5 μg（R，S）-告依春对照品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方比例及工艺自制除去板蓝根的阴性对照品，再按“2.2”项下供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.5 方法专属性考察

按上述色谱条件分别进样供试品溶液、对照品溶液和缺板蓝根的阴性对照溶液进行分析，结果阴性对照无干扰。见图1。

图1 复方鱼腥草软胶囊样品、（R，S）-告依春对照品、缺板蓝根的阴性对照溶液HPLC色谱

2.6 线性关系考察

精密称取（R，S）-告依春对照品 5.13 mg，置 100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液。分别精密吸取储备液 1、2、4、6、8、10 ml置 50 ml量瓶中， 加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得（R，S）-告依春质量浓度分别为1.026、2.052、4.104、6.156、8.208、10.260 μg/ml的系列对照品溶液。分别进样20 μl，记录峰面积。以对照品溶液的质量浓度为横坐标X，与其相应的峰面积积分值为纵坐标Y，得回归方程：Y=386900X+21780，r=0.9996， 表明 （R，S）-告依 春 在1.026～10.260 μg/ml的线性关系良好。

2.7 精密度试验

精密吸取质量浓度为5 μg/ml的 （R，S）-告依春对照品溶液20 μl，连续进样6次，依法测定，计算得其峰面积RSD为0.84%。

2.8 重复性试验

分别精密称取复方鱼腥草软胶囊（批号：20110201）6份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算得样品中（R，S）-告依春质量含量（n=6）分别为 44.3、45.9、45.8、45.6、45.3、44.7 mg/粒， 平均每粒 45.3 mg/粒，RSD 为 1.42%，测定结果表明重复性良好。

2.9 稳定性试验

精密称取同一批样品（批号：20110201）的供试品溶液，分别在 0、2、4、8、12、16 h 进行测定，计算得（R，S）-告依春峰面积的RSD为1.29%，表明供试品溶液在16 h内稳定。

2.10 加样回收率试验

取已测定的复方鱼腥草软胶囊（批号：20110201）内容物6份，每份 0.75 g，精密称定，分别精密加入（R，S）-告依春对照品溶液（5 μg/ml）10 ml，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果（R，S）-告依春平均回收率为96.2%，RSD为1.13%。见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

2.11 样品含量测定

分别取批号为 20110201、20110202、20110203的样品，制备供试品溶液，依法测定，用外标法计算，得样品中（R，S）-告依春的含量。见表2。

表2 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论

3.1 流动相的选择

曾考察过乙腈-0.05%磷酸溶液，甲醇-0.02%磷酸溶液为流动相测定（R，S）-告依春，结果均能达到满意的分离效果，（R，S）-告依春峰达到基线分离，峰形对称，但前者（R，S）-告依春峰略有拖尾，因此选用甲醇-0.02%磷酸溶液为流动相。

3.2 提取条件的考察

对（R，S）-告依春的提取方法进行了考察，分别比较了超声处理与加热回流两种提取方法，结果发现这两种方法的提取结果中（R，S）-告依春的含量几乎无差异。由于超声处理简便、快捷，因此选用超声处理作为提取方法，并对提取时间15、30、45、60 min进行了考察，结果发现超声处理45 min后（R，S）-告依春提取率几乎无变化，因此选择提取时间为45 min。

3.3 色谱条件的选择

取（R，S）-告依春对照品溶液在波长 200～400 nm 范围内进行紫外扫描，结果（R，S）-告依春色谱峰在245 nm波长处有最大吸收，故选择245 nm作为检测波长。

[1]王瑞,杨海英,杨琪伟.板蓝根的质量标准研究[J].中草药,2010,41(3):478.

[2]罗璇,李小芩,杨岳隆,等.复方鱼腥草软胶囊的鉴别和含量测定方法研究[J].中国中药杂志,2004,29(7):702-703.

[3]王钢力,聂黎行,迟玉明,等.HPLC法测定板蓝根和板蓝根颗粒中RS-告伊春和腺苷[J].中草药,2009,40(10):1587-1589.

[4]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:916-917.